催化抗体和其使用方法技术

本申请提供用于确定生物样本中SHD催化抗体水平和用于治疗或预防个体的蛋白聚集疾病(PAD)的方法、组合物和试剂盒。还提供特异性识别淀粉样蛋白β(Aβ)肽的催化抗体和其使用方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】催化抗体和其使用方法相关申请的交叉引用本申请要求2018年8月17日提交的临时专利申请第62/765,150号的优先权权益，其内容以全文引用的方式并入本文中。以ASCII文本文件提交的序列表以下以ASCII文本文件提交的内容以全文引用的方式并入本文中：计算机可读形式(CRF)的序列表(文件名：792702000140SEQLIST.txt，记录日期：2019年8月5日，大小：22KB)。
本申请涉及催化抗体、用于确定催化抗体水平的方法和使用催化抗体治疗的方法。特别地，本申请涉及特异性识别和切割淀粉样蛋白β(Aβ)肽。
技术介绍
催化抗体为与靶标抗原特异性结合并且催化其靶标抗原化学转变的抗体。蛋白水解催化抗体可水解并且永久地灭活靶标肽。与化学计量结合的常规抗体相比，单个催化抗体分子可在其生物寿命内水解数千个抗原分子，从而实现提高的效能。已在正常人和患有自身免疫疾病的患者中发现天然存在的催化抗体。在针对合成半抗原免疫或使用过渡态类似物从抗体文库中筛选的实验室动物中，催化抗体也已升高。然而，由于它们相对小的催化活性，催化抗体尚未广泛开发为治疗性药剂。蛋白聚集是其中错误折叠的蛋白细胞内或细胞外聚集的生物现象。这些蛋白聚集通常与神经退行性疾病(包括肌萎缩性侧索硬化(ALS)、阿尔茨海默氏病(Alzheimer'sdisease)(AD)、帕金森病(Parkinson'sdisease)(PD)、朊病毒病和其它淀粉样变性疾病)相关。举例来说，根据淀粉样蛋白假设，可溶性和纤维性淀粉样蛋白β(Aβ)肽聚集对AD的发病机理具有因果关系。Aβ聚集激活小胶质炎性过程，直接施加神经毒性作用，并且破坏脑的解剖构造。为了治疗AD，已经应用抗体介导的免疫治疗剂来诱导清除现有的Aβ淀粉样蛋白并抑制进一步的Aβ聚集。然而，这些基于抗体的疗法中许多已在临床试验中失败，包括贝频珠单抗(Bapineuzumab)和索拉珠单抗(Solanezumab)。本文中所提及的所有公开、专利、专利申请以及已公开的专利申请的公开内容由此以全文引用的方式并入本文中。
技术实现思路
本申请提供用于诊断(包括确定风险的方法)、治疗和预防个体的蛋白聚集疾病(PAD)，如阿尔茨海默氏病(AD)的组合物和方法。本申请的一个方面提供用于确定生物样本中一种或多种SHD催化抗体(即，含有丝氨酸、组氨酸和天冬氨酸的催化三联体基序，或“SHD基序”的催化抗体)的水平的方法，其包含：a)在允许形成催化抗体-底物肽复合物的条件下使生物样本与固定在固体支持物上的底物肽接触，和b)确定催化抗体-底物肽复合物的量，由此提供生物样本中一种或多种SHD催化抗体的水平，其中底物肽包含氨基酸序列(EAR)n(SEQIDNO:2)，并且其中n为介于1与30之间整数(例如n为3)。在一些实施例中，生物样本与底物肽一起保温约1小时到约16小时，如约1小时到约3小时、约3小时到约8小时，或约8小时到约16小时中的任一种。在根据上文所描述的方法中的任一种的一些实施例中，生物样本为血清样本。在一些实施例中，血清样本含有至少约1μg/mL(例如至少约10μg/mL、25μg/mL，或100μg/mL)免疫球蛋白(Ig；例如人Ig)。在根据上文所描述的方法中的任一种的一些实施例中，使用与总免疫球蛋白(Ig，如总人Ig)特异性结合的抗体确定催化抗体-底物肽复合物的量。在一些实施例中，抗体与总IgM、总IgG、总IgA和/或总IgE特异性结合。在一些实施例中，抗体用酶(例如辣根过氧化酶或“HRP”)或荧光标记(例如FITC)标记。本申请的一个方面提供用于确定个体的PAD的风险的方法，其中PAD与靶蛋白的聚集相关，所述方法包含确定在个体的生物样本(例如血清样本)中一种或多种SHD催化抗体的水平，其中如果一种或多种SHD催化抗体的水平低于对照SHD催化抗体水平，那么确定个体具有PAD的风险。在一些实施例中，一种或多种SHD催化抗体的水平为与靶蛋白特异性结合的一种或多种SHD催化抗体的水平。在一些实施例中，一种或多种SHD催化抗体的水平为总SHD催化抗体的水平。在一些实施例中，通过在允许形成催化抗体-底物肽复合物的条件下使个体的血清样本与固定在固体支持物上的底物肽接触并且确定催化抗体-底物肽复合物的量来确定总SHD催化抗体的水平，其中底物肽包含氨基酸序列(EAR)n(SEQIDNO:2)，并且其中n为介于1与30之间整数(例如n为3)。在一些实施例中，血清样本含有至少约1μg/mL(例如至少约10μg/mL、25μg/mL，或100μg/mL)Ig(例如人Ig)。在一些实施例中，生物样本与底物肽一起保温约1小时到约16小时，如约1小时到约3小时、约3小时到约8小时，或约8小时到约16小时中的任一种。在一些实施例中，使用与总Ig(例如总人Ig)特异性结合的抗体确定催化抗体-底物肽复合物的量。在一些实施例中，抗体与总IgM、总IgG、总IgA和/或总IgE特异性结合。在一些实施例中，抗体用酶(例如辣根过氧化酶或“HRP”)或荧光标记(例如FITC)标记。在根据如上文所描述用于确定风险的方法中的任一种的一些实施例中，方法另外包含确定在个体的生物样本(例如血清样本)中针对靶蛋白的自身抗体的水平，并且其中如果：(i)一种或多种SHD催化抗体的水平低于对照SHD催化抗体水平；和(ii)针对靶蛋白的自身抗体的水平低于对照自身抗体水平，那么确定个体具有PAD的风险。在一些实施例中，通过在允许形成自身抗体-靶蛋白复合物的条件下使个体的血清样本与靶蛋白接触并且确定自身抗体-靶蛋白复合物的量来确定自身抗体的水平。在一些实施例中，使用ELISA测定来确定自身抗体的水平。在一些实施例中，对照自身抗体水平为在健康个体(例如相同年龄组)中针对靶蛋白的自身抗体的水平。在一些实施例中，对照自身抗体水平为在个体群体(例如相同年龄组)中针对靶蛋白的自身抗体的中值水平。在根据如上文所描述用于确定风险的方法中的任一种的一些实施例中，方法另外包含确定在个体的生物样本(例如血清样本或脑脊髓液样本)中靶蛋白的水平，并且其中如果：(i)一种或多种SHD催化抗体的水平低于对照SHD催化抗体水平；和(ii)靶蛋白的水平高于对照靶蛋白水平，那么确定个体具有PAD风险。在一些实施例中，通过在允许形成抗体-靶蛋白复合物的条件下使个体的生物样本与针对靶蛋白的抗体接触并且确定抗体-靶蛋白复合物的量来确定靶蛋白的水平。在一些实施例中，使用ELISA测定来确定靶蛋白的水平。在一些实施例中，对照靶蛋白水平为在健康个体(例如相同年龄组)中靶蛋白的水平。在一些实施例中，对照靶蛋白水平为在个体群体(例如相同年龄组)中靶蛋白的中值水平。在根据如上文所描述用于确定风险的方法中的任一种的一些实施例中，对照SHD催化抗体水平为在健康个体(例如相同年龄组)中一种或多种SHD催化抗体的水平。在一些实施例中，对照SHD催化抗体水平为在个体群体(例如相同年龄组)中一种或多种SHD催化抗体的中值水平。在根据如上文所描述用于确定风本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于确定生物样本中一种或多种SHD催化抗体的水平的方法，其包含：/na)在允许形成催化抗体-底物肽复合物的条件下使所述生物样本与固定在固体支持物上的底物肽接触，和/nb)确定所述催化抗体-底物肽复合物的量，由此提供在所述生物样本中一种或多种SHD催化抗体的水平，/n其中所述底物肽包含氨基酸序列(EAR)

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180817 US 62/765,1501.一种用于确定生物样本中一种或多种SHD催化抗体的水平的方法，其包含：
a)在允许形成催化抗体-底物肽复合物的条件下使所述生物样本与固定在固体支持物上的底物肽接触，和
b)确定所述催化抗体-底物肽复合物的量，由此提供在所述生物样本中一种或多种SHD催化抗体的水平，
其中所述底物肽包含氨基酸序列(EAR)n(SEQIDNO:2)，并且其中n为介于1与30之间的整数。


2.根据权利要求1所述的方法，其中n为3。


3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述生物样本为血清样本。


4.根据权利要求3所述的方法，其中所述血清样本含有至少约1μg/mL免疫球蛋白(Ig)。


5.根据权利要求1到4中任一项所述的方法，其中使用与总Ig特异性结合的抗体确定所述催化抗体-底物肽复合物的量。


6.根据权利要求5所述的方法，其中所述抗体用酶或荧光标记来标记。


7.一种用于确定个体的蛋白聚集疾病(PAD)的风险的方法，其中所述PAD与靶蛋白的聚集相关，所述方法包含确定所述个体的生物样本中一种或多种SHD催化抗体的水平，其中如果所述一种或多种SHD催化抗体的水平低于对照SHD催化抗体水平，那么确定所述个体具有所述PAD的风险。


8.根据权利要求7所述的方法，其中一种或多种SHD催化抗体的水平为与所述靶蛋白特异性结合的一种或多种SHD催化抗体的水平。


9.根据权利要求7所述的方法，其中一种或多种SHD催化抗体的水平为总SHD催化抗体的水平。


10.根据权利要求9所述的方法，其中通过在允许形成催化抗体-底物肽复合物的条件下使所述个体的血清样本与固定在固体支持物上的底物肽接触并且确定所述催化抗体-底物肽复合物的量来确定总SHD催化抗体的水平，其中所述底物肽包含所述氨基酸序列(EAR)n(SEQIDNO:2)，其中n为介于1与30之间的整数。


11.根据权利要求10所述的方法，其中n为3。


12.根据权利要求10或11所述的方法，其中所述血清样本含有至少约1μg/mLIg。


13.根据权利要求10到12中任一项所述的方法，其中使用与总Ig特异性结合的抗体确定所述催化抗体-底物肽复合物的量。


14.根据权利要求13所述的方法，其中所述抗体用酶或荧光标记来标记。


15.根据权利要求7到14中任一项所述的方法，其还包含确定所述个体的生物样本中针对所述靶蛋白的自身抗体的水平，其中如果：(i)所述一种或多种SHD催化抗体的水平低于对照SHD催化抗体水平；和(ii)针对所述靶蛋白的所述自身抗体的水平低于对照自身抗体水平，那么确定所述个体具有所述PAD的风险。


16.根据权利要求15所述的方法，其中通过在允许形成自身抗体-靶蛋白复合物的条件下使所述个体的血清样本与所述靶蛋白接触并且确定所述自身抗体-靶蛋白复合物的量来确定所述自身抗体的水平。


17.根据权利要求16所述的方法，其中使用ELISA测定来确定所述自身抗体的水平。


18.根据权利要求15到17中任一项所述的方法，其中所述对照自身抗体水平为在健康个体或个体群体中针对所述靶蛋白的所述自身抗体的水平。


19.根据权利要求7到14中任一项所述的方法，其还包含确定所述个体的生物样本中所述靶蛋白的水平，其中如果：(i)所述一种或多种SHD催化抗体的水平低于对照SHD催化抗体水平；和(ii)所述靶蛋白的水平高于对照靶蛋白水平，那么确定所述个体具有所述PAD的风险。


20.根据权利要求7到19中任一项所述的方法，其中所述对照SHD催化抗体水平为在健康个体或个体群体中一种或多种SHD催化抗体的水平。


21.根据权利要求7到20中任一项所述的方法，其中：
(i)所述PAD为帕金森氏病，并且所述靶蛋白为α-突触核蛋白；
(ii)所述PAD为阿尔茨海默氏病或痴呆，并且所述靶蛋白为Tau或淀粉样蛋白β(Aβ)；
(iii)所述PAD为ATTR淀粉样变性，并且所述靶蛋白为转甲状腺素蛋白；
(iv)所述PAD为AL淀粉样变性，并且所述靶蛋白为免疫球蛋白轻链；
(v)所述PAD为额颞叶退化或肌萎缩性侧索硬化，并且所述靶蛋白为TDP43；
(vi)所述PAD为亨廷顿氏病，并且所述靶蛋白为亨廷顿蛋白；
(vii)所述PAD为II型糖尿病，并且所述靶蛋白为IAPP；或
(viii)所述PAD为肌萎缩性侧索硬化，并且所述靶蛋白为SOD1。


22.一种治疗或预防个体的PAD的方法，其中所述PAD与靶蛋白的聚集相关，所述方法包含：
a)根据权利要求1到21中任一项所述的方法确定所述个体具有所述PAD的风险；和
b)向所述个体施用有效量的与所述靶蛋白特异性结合的治疗性催化抗体。


23.根据权利要求22所述的方法，其中所述PAD为阿尔茨海默氏病，其中靶蛋白为淀粉样蛋白β(Aβ)，其中所述治疗性催化抗体包含：包含以下的轻链可变区(VL)：包含SEQIDNO:12的氨基酸序列的轻链互补决定区(LC-CDR)1、包含SEQIDNO:13的氨基酸序列的LC-CDR2，和包含SEQIDNO:14的氨基酸序列的LC-CDR3，或其变体，其在所述LC-CDR中包含至多约5个氨基酸取代；和/或包含以下的重链可变区(VH)：包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的重链互补决定区(HC-CDR)1、包含SEQIDNO:10的氨基酸序...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘跃，
申请(专利权)人：AB工作室有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US