异多聚体蛋白质及其使用方法技术

本申请提供了异多聚体蛋白质，诸如双特异性抗体，其包含相对于野生型CH3结构域在氨基酸位置354处具有利用大疏水氨基酸进行的取代的含有第一抗体重链恒定结构域3(CH3)的多肽，和/或包含相对于野生型CH3结构域在氨基酸位置347处利用带负电荷的氨基酸残基进行的取代的含有第二CH3的多肽。还提供了多肽、编码此类多肽的核酸和载体、药物组合物、制备方法和使用异多聚体蛋白质的治疗方法。用异多聚体蛋白质的治疗方法。用异多聚体蛋白质的治疗方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】异多聚体蛋白质及其使用方法
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2019年3月28日提交的美国临时申请第62/825,726号的优先权，该申请的内容出于所有目的据此通过引用以其整体并入本文。
[0003]在ASCII文本文件上提交序列表
[0004]在ASCII文本文件上提交的以下内容通过引用以其整体并入本文：序列表的计算机可读形式(CRF)(文件名：792702000240SEQLIST.TXT，记录日期：2020年3月24日，大小：32KB)。


[0005]本申请涉及异多聚体蛋白质，诸如双特异性抗体、组合物、制备方法和使用方法。

技术介绍

[0006]通过在杂交瘤中共表达两种不同的IgG分子来产生双特异性抗体的经典方法导致多达10种可能的重链与轻链的组合。这降低了收率，并带来了纯化的挑战。为了克服这些挑战，已经开发了多种促进异二聚体形成的双特异性抗体形式。许多已知的形式采用单链可变区(scFv)模块或类似的结构，所述模块或结构依赖于经工程化的接头来迫使抗原结合组分组装成所需的构型。然而，与天然抗体相比，许多这些双特异性抗体形式忍受不利的性质，包括易于聚集、生产困难、血清半衰期短和潜在的免疫原性。
[0007]已经开发了几种天然抗体形式(即，由两条轻链和两条重链组成的抗体)的双特异性抗体设计。例如，重链Fc
‑
Fc界面可以用相互作用的氨基酸对(诸如旋钮进入孔(knobs
‑
into
‑
holes)(KIH)残基、形成二硫键的半胱氨酸或具有相反静电荷的残基)来工程化，以便当它们共表达时，积极促进来自不同重链的异二聚体形成。然而，经典的KIH策略仍然导致显著的同二聚体形成和双特异性抗体的低产量。
[0008]本文提及的所有出版物、专利、专利申请和公开的专利申请的公开内容据此通过引用以其整体并入本文。

技术实现思路

[0009]本申请提供了异多聚体蛋白质，诸如含Fc的异二聚体蛋白质、多特异性抗体和多特异性免疫粘附素、其制备方法和使用方法。
[0010]本申请的一个方面提供了异多聚体(例如，异二聚体)蛋白质，其包含含有第一重链恒定结构域3(CH3)结构域的第一多肽和含有第二CH3结构域的第二多肽，其中第一CH3结构域包含相对于野生型CH3结构域在氨基酸位置354处利用大疏水氨基酸进行的取代，并且/或者第二CH3结构域包含相对于野生型CH3结构域在氨基酸位置347处利用带负电荷的氨基酸进行的取代，并且其中氨基酸残基编号基于EU编号。在一些实施方案中，氨基酸位置354处的大疏水氨基酸与第二CH3结构域中的氨基酸残基形成疏水相互作用。在一些实施方案中，第二CH3结构域在氨基酸位置349(例如，Y349)处包含大疏水残基。在一些实施方案
中，氨基酸位置347处的带负电荷的氨基酸与第一CH3结构域中的氨基酸残基形成离子键。在一些实施方案中，第一CH3结构域在氨基酸位置360(例如，K360)处包含带正电荷的残基。在一些实施方案中，第一CH3结构域和第二CH3结构域是人CH3结构域。在一些实施方案中，第一CH3结构域包含选自由以下组成的组的取代：S354Y、S354F和S354W。在一些实施方案中，第一CH3结构域包含S354Y。在一些实施方案中，第二CH3结构域不包含对第一CH3结构域中S354的取代的补偿性取代(例如，Y349处的取代)。在一些实施方案中，第二CH3结构域包含选自由以下组成的组的取代：Q347E和Q347D。在一些实施方案中，第二CH3结构域包含Q347E。
[0011]在根据上述任一种异多聚体蛋白质的一些实施方案中，第一CH3结构域和第二CH3结构域还包含钮入孔(KIH)残基。在一些实施方案中，钮入孔残基是T366Y和Y407T。在一些实施方案中，第一CH3结构域包含T366Y和S354Y，并且第二CH3结构域包含Y407T和Q347E。在一些实施方案中，第一CH3结构域包含Y407T和S354Y，第二CH3结构域包含T366Y和Q347E。并且
[0012]在根据上述任一种异多聚体蛋白质的一些实施方案中，第一多肽和/或第二多肽包含重链恒定结构域2(CH2)。在一些实施方案中，异多聚体蛋白质包含IgG Fc区。在一些实施方案中，IgG Fc区是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc区。在一些实施方案中，第一多肽是抗体重链，并且/或者第二多肽是抗体重链。在一些实施方案中，异多聚体蛋白质包含一个或多个抗体轻链。
[0013]在根据上述任一种异多聚体蛋白质的一些实施方案中，异多聚体蛋白质是多特异性(例如，双特异性)抗体。
[0014]在根据上述任一种异多聚体蛋白质的一些实施方案中，异多聚体蛋白质包含：(a)第一重链，其从N末端至C末端包含：第一重链可变结构域(VH1)、第一重链恒定结构域1(CH1)、第一重链恒定结构域2(CH2)和第一CH3结构域；(b)第一轻链，其从N末端至C末端包含：第一轻链可变结构域(VL1)和第一轻链恒定结构域(CL)；(c)第二重链，其从N末端至C末端包含：第二重链可变结构域(VH2)、第二CH1、第二CH2和第二CH3结构域；和(d)第二轻链，其从N末端至C末端包含：第二轻链可变结构域(VL2)和第二CL；其中VH1与VL1缔合形成特异性结合第一靶标的第一抗原结合位点，VH2与VL2结合形成特异性结合第二靶标的第二抗原结合位点。在一些实施方案中，VL1和VL2具有相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，VL1和VL2具有不同的氨基酸序列。在一些实施方案中，第一靶标和第二靶标是相同的表位。在一些实施方案中，第一靶标和第二靶标是相同抗原的不同表位。在一些实施方案中，第一靶标和第二靶标是不同的抗原。在一些实施方案中，第一抗原结合位点特异性结合肿瘤抗原，并且第二抗原结合位点特异性结合CD3，或者第一抗原结合位点特异性结合CD3，并且第二抗原结合位点特异性结合肿瘤抗原。在一些实施方案中，第一抗原结合位点特异性结合CD20，并且第二抗原结合位点特异性结合CD3，或者第一抗原结合位点特异性结合CD3，并且第二抗原结合位点特异性结合CD20。在一些实施方案中，第一抗原结合位点特异性结合HER2，并且第二抗原结合位点特异性结合CD3，或者第一抗原结合位点特异性结合CD3，并且第二抗原结合位点特异性结合HER2。在一些实施方案中，异多聚体蛋白质包含：(a)第一重链，其从N末端至C末端包含：第三重链可变结构域(VH3)、第三CH1、VH1、第一CH1、第一CH2和第一CH3结构域；(b)第一轻链，其从N末端至C末端包含：第三轻链可变结构域(VL2)、第三CL、VL1和
第一CL；其中VH3与VL3缔合形成特异性结合第三靶标的第三抗原结合位点。在一些实施方案中，第一抗原结合位点和第三抗原结合位点特异性结合相同的抗原。在一些实施方案中，第一抗原结合位点和第三抗原结合位点特异性结合HER2，并且第二抗原结合位点特异性结合CD3。
[0015]在根据上本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种异多聚体蛋白质，其包含含第一重链恒定结构域3(CH3)结构域的第一多肽和含第二CH3结构域的第二多肽，其中所述第一CH3结构域包含相对于野生型CH3结构域在氨基酸位置354处利用大疏水氨基酸进行的取代，并且/或者所述第二CH3结构域包含相对于野生型CH3结构域在氨基酸位置347处利用带负电荷的氨基酸进行的取代，并且其中所述氨基酸残基编号基于EU编号。2.如权利要求1所述的异多聚体蛋白质，其中氨基酸位置354处的所述大疏水氨基酸与所述第二CH3结构域中的氨基酸残基形成疏水相互作用。3.如权利要求1或2所述的异多聚体蛋白质，其中所述第二CH3结构域在氨基酸位置349处包含酪氨酸(Y)。4.如权利要求1
‑
3中任一项所述的异多聚体蛋白质，其中氨基酸位置347处的所述带负电荷的氨基酸与所述第一CH3结构域中的氨基酸残基形成离子键。5.如权利要求1
‑
4中任一项所述的异多聚体蛋白质，其中所述第一CH3结构域在氨基酸位置360处包含赖氨酸(K)。6.如权利要求1
‑
5中任一项所述的异多聚体蛋白质，其中所述第一CH3结构域和所述第二CH3结构域是人CH3结构域。7.如权利要求1
‑
6中任一项所述的异多聚体蛋白质，其中所述第一CH3结构域包含选自由以下组成的组的取代：S354Y、S354F和S354W。8.如权利要求7所述的异多聚体蛋白质，其中所述第一CH3结构域包含S354Y。9.如权利要求1
‑
8中任一项所述的异多聚体蛋白质，其中所述第二CH3结构域包含选自由以下组成的组的取代：Q347E和Q347D。10.如权利要求9所述的异多聚体蛋白质，其中所述第二CH3结构域包含Q347E。11.如权利要求1
‑
10中任一项所述的异多聚体蛋白质，其中所述第一CH3结构域和所述第二CH3结构域还包含旋钮进入孔残基。12.如权利要求11所述的异多聚体蛋白质，其中所述旋钮进入孔残基是T366Y和Y407T。13.如权利要求12所述的异多聚体蛋白质，其中所述第一CH3结构域包含T366Y和S354Y，并且所述第二CH3结构域包含Y407T和Q347E。14.如权利要求1
‑
13中任一项所述的异多聚体蛋白质，其中所述第一多肽和/或所述第二多肽包含重链恒定结构域2(CH2)。15.如权利要求14所述的异多聚体蛋白质，其中所述异多聚体蛋白质包含IgG Fc区。16.如权利要求15所述的异多聚体蛋白质，其中所述IgG Fc区是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc区。17.如权利要求1
‑
16中任一项所述的异多聚体蛋白质，其中所述第一多肽是抗体重链，并且/或者所述第二多肽是抗体重链。18.如权利要求17所述的异多聚体蛋白质，其中所述异多聚体蛋白质包含一个或多个抗体轻链。19.如权利要求18所述的异多聚体蛋白质，其中所述异多聚体蛋白质是多特异性抗体。20.如权利要求18或19所述的异多聚体蛋白质，所述异多聚体蛋白质包含：(a)第一重链，其从N末端至C末端包含：第一重链可变结构域(VH1)、第一重链恒定结构域1(CH1)、第一重链恒定结构域2(CH2)和所述第一CH3结构域；
(b)第一轻链，其从N末端至C末端包含：第一轻链可变结构域(VL1)和第一轻链恒定结构域(CL)；(c)第二重链，其从N末端至C末端包含：第二重链可变结构域(VH2)、第二CH1、第二CH2和所述第二CH3结构域；和(d)第二轻链，其从N末端至C末端包含：第二轻链可变结构域(VL2)和第二CL；其中VH1与VL1缔合形成特异性结合至第一靶标的第一抗原结合位点，以及VH2与VL2缔合形成特异性结合至第二靶标的第二抗原结合位点。21.如权利要求20所述的异多聚体蛋白质，其中VL1和VL2具有相同的氨基酸序列。22.如权利要求20所述的异多聚体蛋白质，其中VL1和VL2具有不同的氨基酸序列。23.如权利要求20
‑
22中任一项所述的异多聚体蛋白质，其中所述第一靶标和所述第二靶标是相同抗原的不同表位。24.如权利要求20
‑
22中任一项所述的异多聚体蛋白质，其中所述第一靶标和所述第二靶标是不同的抗原。25.如权利要求24...

【专利技术属性】
技术研发人员：Y刘，J董，B王，
申请(专利权)人：AB工作室有限公司，
类型：发明
国别省市：