抗DLL3抗体及其用途制造技术

本发明专利技术描述了抗DLL3抗体及其抗原结合片段、抗CD47抗体及其抗原结合片段，以及抗CD47/DLL3双特异性抗体及其抗原结合片段。还描述了编码所述抗体的核酸、包含所述抗体的组合物、产生所述抗体的方法以及使用所述抗体治疗或预防疾病，例如癌症和/或相关并发症的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗DLL3抗体及其用途相关申请的交叉引用本专利技术要求2019年1月3日提交的美国临时申请62/787,815；2018年11月1日提交的美国临时申请62/754,207；和2018年5月8日提交的美国临时申请62/668,427的优先权。每个公开通过引用整体并入本文。专利
本专利技术涉及单克隆抗DLL3抗体、抗CD47抗体和抗CD47/DLL3双特异性抗体、编码该抗体的核酸和表达载体、包含该载体的重组细胞，以及包含该抗体的组合物。还提供了制备所述抗体的方法，以及使用所述抗体治疗包括癌症和/或相关并发症在内的疾病的方法。电子提交的序列表的引用本申请包含序列表，该序列表通过EFS-Web以ASCII格式的序列表电子提交，文件名为“689204.17WO序列表”，创建日期为2019年4月29日，大小为70kb。通过EFS-Web提交的序列表是本说明书的一部分，其全文通过引用并入本文。专利技术背景在早期发育过程中的进行体节分割需要Delta样经典Notch配体3(DLL3)，其也称为delta样3或delta样蛋白3(Dunwoodie等，发育129：1795-806(2002))。哺乳动物Notch家族配体DLL1、DLL4、JAG1和JAG2都可反式激活Notch受体信号传导(Ntziachristos等，癌细胞25(3)：318-34(2014))。而DLL3与它们不同，其主要位于高尔基体中，并且不能激活Notch信号传导(Chapman等，HumMolGenet20(5)：905-16(2011)和Geffers等，JCellBiol178(3)：465-76(2007))。在正常发育期间，DLL3通过与Notch和DLL1相互作用而抑制顺式和反式Notch通路的激活(Chapman等，HumMolGenet20(5)：905-16(2011))。通常，DLL3在除大脑外的成人正常组织中不存在或水平很低，但在肺癌、睾丸癌、神经胶质瘤和黑色素瘤样品中过表达(Uhlen等，科学357(6352)：eaan2507(2017))。此外，在小细胞肺癌(SCLC)和大细胞神经内分泌癌(LCNEC)肿瘤细胞的表面上可检测到DLL3(Saunders等，SciTranslMed7(302)：302ra136(2015)和Sharma等，CancerRes77(14)：3931-41(2017))，这使其成为用于癌症治疗的单克隆抗体的潜在靶点。因此，抗DLL3单克隆抗体可用于特异性靶向表达DLL3的肿瘤细胞并用作潜在的抗癌治疗剂。专利技术概述在一个总的方面，本专利技术涉及结合DLL3的分离的抗DLL3单克隆抗体或其抗原结合片段。本专利技术提供了分离的抗DLL3单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含重链互补决定区1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、轻链互补决定区1(LCDR1)、LCDR2和LCDR3，其具有以下多肽序列：(1)分别为SEQIDNO:25、26、27、61、62和63；(2)分别为SEQIDNO:28、29、30、64、65和66；(3)分别为SEQIDNO:31、32、33、67、68和69；(4)分别为SEQIDNO:34、35、36、70、71和72；(5)分别为SEQIDNO:37、38、39、73、74和75；(6)分别为SEQIDNO:40、41、42、76、77和78；(7)分别为SEQIDNO:43、44、45、79、80和81；(8)分别为SEQIDNO:46、47、48、82、83和84；(9)分别为SEQIDNO:49、50、51、85、86和87；(10)分别为SEQIDNO:52、53、54、88、89和90；(11)分别为SEQIDNO:55、56、57、91、92和93；或(12)分别为SEQIDNO:58、59、60、94、95和96；其中，所述抗体或其抗原结合片段特异性结合DLL3，优选人DLL3。本专利技术提供了分离的抗DLL3单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含重链互补决定区1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、轻链互补决定区1(LCDR1)、LCDR2和LCDR3，其具有以下多肽序列：(1)分别为SEQIDNO:97、98、99、133、134和135；(2)分别为SEQIDNO:100、101、102、136、137和138；(3)分别为SEQIDNO:103、104、105、139、140和141；(4)分别为SEQIDNO:106、107、108、142、143和144；(5)分别为SEQIDNO:109、110、111、145、146和147；(6)分别为SEQIDNO:112、113、114、148、149和150；(7)分别为SEQIDNO:115、116、117、151、152和153；(8)分别为SEQIDNO:118、119、120、154、155和156；(9)分别为SEQIDNO:121、122、123、157、158和159；(10)分别为SEQIDNO:124、125、126、160、161和162；(11)分别为SEQIDNO:127、128、129、163、164和165；或(12)分别为SEQIDNO:130、131、132、166、167和168；其中，所述抗体或其抗原结合片段特异性结合DLL3，优选人DLL3。在某些实施方案中，所述的分离的抗DLL3单克隆抗体或其抗原结合片段包含重链可变区或轻链可变区，所述的重链可变区含有与SEQIDNO：1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21或23具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％，或至少99％的同一性的多肽序列，所述的轻链可变区含有与SEQIDNO：2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22或24具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％，或至少99％的同一性的多肽序列。在某些实施方式中，所述的分离的抗DLL3单克隆抗体或其抗原结合片段包括：(a)具有SEQIDNO：1的多肽序列的重链可变区和具有SEQIDNO：2的多肽序列的轻链可变区；(b)具有SEQIDNO：3的多肽序列的重链可变区和具有SEQIDNO：4的多肽序列的轻链可变区；(c)具有SEQIDNO：5的多肽序列的重链可变区和具有SEQIDNO：6的多肽序列的轻链可变区；(d)具有SEQIDNO：7的多肽序列的重链可变区和具有SEQIDNO：8的多肽序列的轻链可变区；(e)具有SEQIDNO：9的多肽序列的重链可变区和具有SEQIDNO：10的多肽序列的轻链可变区；(f)具有SEQIDNO：11的多肽序列的重链可变区和具有SEQIDNO：12的多肽序列的轻链可变区；(g)具有SEQIDNO：13的多本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种分离的抗DLL3单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，包含重链互补决定区1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、轻链互补决定区1(LCDR1)、LCDR2和LCDR3，其具有以下多肽序列：/na.分别为SEQ ID NO：25、26、27、61、62和63；/nb.分别为SEQ ID NO:28、29、30、64、65和66；/nc.分别为SEQ ID NO:31、32、33、67、68和69；/nd.分别为SEQ ID NO:34、35、36、70、71和72；/ne.分别为SEQ ID NO:37、38、39、73、74和75；/nf.分别为SEQ ID NO:40、41、42、76、77和78；/ng.分别为SEQ ID NO:43、44、45、79、80和81；/nh.分别为SEQ ID NO:46、47、48、82、83和84；/ni.分别为SEQ ID NO:49、50、51、85、86和87；/nj.分别为SEQ ID NO:52、53、54、88、89和90；/nk.分别为SEQ ID NO:55、56、57、91、92和93；或/nl.分别为SEQ ID NO:58、59、60、94、95和96；/n其中，所述抗体或其抗原结合片段特异性结合DLL3，优选人DLL3。/n...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180508 US 62/668,427;20181101 US 62/754,207;20191.一种分离的抗DLL3单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，包含重链互补决定区1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、轻链互补决定区1(LCDR1)、LCDR2和LCDR3，其具有以下多肽序列：
a.分别为SEQIDNO：25、26、27、61、62和63；
b.分别为SEQIDNO:28、29、30、64、65和66；
c.分别为SEQIDNO:31、32、33、67、68和69；
d.分别为SEQIDNO:34、35、36、70、71和72；
e.分别为SEQIDNO:37、38、39、73、74和75；
f.分别为SEQIDNO:40、41、42、76、77和78；
g.分别为SEQIDNO:43、44、45、79、80和81；
h.分别为SEQIDNO:46、47、48、82、83和84；
i.分别为SEQIDNO:49、50、51、85、86和87；
j.分别为SEQIDNO:52、53、54、88、89和90；
k.分别为SEQIDNO:55、56、57、91、92和93；或
l.分别为SEQIDNO:58、59、60、94、95和96；
其中，所述抗体或其抗原结合片段特异性结合DLL3，优选人DLL3。


2.一种分离的抗DLL3单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，包含重链互补决定区1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、轻链互补决定区1(LCDR1)、LCDR2和LCDR3，其具有以下多肽序列：
a.分别为SEQIDNO:97、98、99、133、134和135；
b.分别为SEQIDNO:100、101、102、136、137和138；
c.分别为SEQIDNO:103、104、105、139、140和141；
d.分别为SEQIDNO:106、107、108、142、143和144；
e.分别为SEQIDNO:109、110、111、145、146和147；
f.分别为SEQIDNO:112、113、114、148、149和150；
g.分别为SEQIDNO:115、116、117、151、152和153；
h.分别为SEQIDNO:118、119、120、154、155和156；
i.分别为SEQIDNO:121、122、123、157、158和159；
j.分别为SEQIDNO:124、125、126、160、161和162；
k.分别为SEQIDNO:127、128、129、163、164和165；或
l.分别为SEQIDNO:130、131、132、166、167和168；
其中，所述抗体或其抗原结合片段特异性结合DLL3，优选人DLL3。


3.如权利要求1或2所述的分离的抗DLL3单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，包含重链可变区或轻链可变区，所述的重链可变区具有与SEQIDNO：1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21或23至少95％同源的多肽序列，所述的轻链可变区具有与SEQIDNO：2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22或24至少95％同源的多肽序列。


4.如权利要求1-3中任一项所述的分离的抗DLL3单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，包括：
a.具有SEQIDNO：1的多肽序列的重链可变区和具有SEQIDNO：2的多肽序列的轻链可变区；
b.具有SEQIDNO：3的多肽序列的重链可变区和具有SEQIDNO：4的多肽序列的轻链可变区；
c.具有SEQIDNO：5的多肽序列的重链可变区和具有SEQIDNO：6的多肽序列的轻链可变区；
d.具有SEQIDNO：7的多肽序列的重链可变区和具有SEQIDNO：8的多肽序列的轻链可变区；
e.具有SEQIDNO：9的多肽序列的重链可变区和具有SEQIDNO：10的多肽序列的轻链可变区；
f.具有SEQIDNO：11的多肽序列的重链可变区和具有SEQIDNO：12的多肽序列的轻链可变区；
g.具有SEQIDNO：13的多肽序列的重链可变区和具有SEQIDNO：14的多肽序列的轻链可变区；
h.具有SEQIDNO：15的多肽序列的重链可变区和具有SEQIDNO：16的多肽序列的轻链可变区；
i.具有SEQIDNO：17的多肽序列的重链可变区和具有SEQIDNO：18的多肽序列的轻链可变区；
j.具有SEQIDNO：19的多肽序列的重链可变区和具有SEQIDNO：20的多肽序列的轻链可变区；
k.具有SEQIDNO：21的多肽序列的重链可变区和具有SEQIDNO：22的多肽序列的轻链可变区；或
l.具有SEQIDNO：23的多肽序列的重链可变区和具有SEQIDNO：24的多肽序列的轻链可变区。


5.如权利要求1-4中任一项所述的分离的抗DLL3单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段是嵌合的。


6.如权利要求1-4中任一项所述的分离的抗DLL3单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段是人的或人源化的。


7.如权利要求6所述的分离的抗DLL3单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段包括：
(a)具有SEQIDNO：170的多肽序列的重链可变区和具有SEQIDNO：171的多肽序列的轻链可变区；
(b)具有SEQIDNO：170的多肽序列的重链可变区和具有SEQIDNO：172的多肽序列的轻链可变区；或
(c)具有SEQIDNO：170的多肽序列的重链可变区和具有SEQIDNO：173的多肽序列的轻链可变区。


8.如权利要求1-7中任一项所述的分离的抗DLL3单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述单克隆抗体或其抗原结合片段能够诱导效应子介导的肿瘤细胞裂解、介导偶联药物的募集，和/或与具有抗癌作用的另一种单克隆抗体或抗原结合片段形成双特异性抗体。


9.一种分离的抗CD47单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，包含抗CD47单克隆抗体的人源化重链可变区和抗DLL3单克隆抗体的人源化轻链可变区，其中所述抗CD47单克隆抗体或其抗原结合片段包括：
(a)具有SEQIDNO：175的多肽序列的重链可变区和具有SEQIDNO：171的多肽序列的轻链可变区；
(b)具有SEQIDNO：175的多肽序列的重链可变区和具有SEQIDNO：172的多肽序列的轻链可变区；
(c)具有SEQIDNO：175的多肽序列的重链可变区和具有SEQIDNO：173的多肽序列的轻链可变区；
(d)具有SEQIDNO：176的多肽序列的重链可变区和具有SEQIDNO：171的多肽序列的轻链可变区；
(e)具有SEQIDNO：176的多肽序列的重链可变区和具有SEQIDNO：172的多肽序列的轻链可变区；
(f)具有SEQIDNO：176的多肽序列的重链可变区和具有SEQIDNO：173的多肽序列的轻链可变区；
(g)具有SEQIDNO：177的多肽序列的重链可变区和具有SEQIDNO：171的多肽序列的轻链可变区；
(h)具有SEQIDNO：177的多肽序列的重链可变区和具有SEQIDNO：172的多肽序列的轻链可变区；
(i)具有SEQIDNO：177的多肽序列的重链可变区和具有SEQIDNO：173的多肽序列的轻链可变区；或
(j)具有SEQIDNO：177的多肽序列的重链可变区和具有SEQIDNO：174的多肽序列的轻链可变区。


10.如权利要求9所述的分离的抗CD47单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段能够阻断CD47与SIRPα的结合。

【专利技术属性】
技术研发人员：王明晗，邹晖，贾海群，
申请(专利权)人：东莞凡恩世生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44