CD4的抗原结合构建体制造技术

本文描述了与CD4结合的抗原结合构建体，例如与CD4结合的抗体，包括抗体片段(如，scFv、微抗体和cys‑双价抗体)。在此描述了使用方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】CD4的抗原结合构建体
在此描述的实施方式总体上涉及抗原结合构建体(如，抗体及其片段)，包括结合至CD4的微抗体(minibody)、cys-双价抗体(cys-diabody)、scFv等，以及它们的使用方法。序列表的引用本申请是与电子格式的序列表一起提交的。以名称为“IGNAB048WOSEQUENCELITS.TXT”的文件提供序列表，其在2019年6月4日被创建并被最后修改，其大小为65,910字节。电子序列表中的信息特此通过引用将其全部内容结合于此。
技术介绍
CD4(分化簇4)是膜糖蛋白，其是T细胞亚类的特异性标记。CD4与T细胞受体(TCR)一起充当共受体以识别MHCII类细胞的抗原呈递。CD4行使功能以启动或增强T细胞活化的早期阶段。
技术实现思路
本文提供的一些实施方式涉及抗原结合构建体，如，抗体，包括抗体片段，其包括：SEQIDNO:2中的HCDR1的HCDR1；SEQIDNO:2中的HCDR2的HCDR2；SEQIDNO:2中的HCDR3的HCDR3；SEQIDNO:4中的LCDR1的LCDR1；SEQIDNO:4中的LCDR2的LCDR2；以及SEQIDNO:4中的LCDR3的LCDR3。在一些实施方式中，抗原结合构建体还包括在本文提供的一个或多个框架区中的一个或多个点突变或残基。本文提供的一些实施方式涉及抗原结合构建体，如，抗体，包括抗体片段，其包括：SEQIDNO:2中的HCDR1的HCDR1；SEQIDNO:2中的HCDR2的HCDR2；SEQIDNO:2中的HCDR3的HCDR3；SEQIDNO:4中的LCDR1的LCDR1；SEQIDNO:4中的LCDR2的LCDR2；SEQIDNO:4中的LCDR3的LCDR3；以及至少一个选自由以下各项组成的VH框架残基：SEQIDNO:2中序列第1位的谷氨酰胺；SEQIDNO:2中序列第5位的缬氨酸；SEQIDNO:2中序列第9位的丙氨酸；SEQIDNO:2中序列第11位的缬氨酸；SEQIDNO:2中序列第13位的赖氨酸；SEQIDNO:2中序列第44位的精氨酸；SEQIDNO:2中序列第46位的谷氨酸；SEQIDNO:2中序列第65位的谷氨酰胺；SEQIDNO:2中序列第66位的甘氨酸；SEQIDNO:2中序列第67位的精氨酸；SEQIDNO:2中序列第68位的缬氨酸；SEQIDNO:2中序列第69位的苏氨酸；SEQIDNO:2中序列第87位的精氨酸；SEQIDNO:2中序列第88位的丝氨酸。本文提供的一些实施方式涉及抗原结合构建体，如，抗体，包括抗体片段，其包括：SEQIDNO:2中的HCDR1的HCDR1；SEQIDNO:2中的HCDR2的HCDR2；SEQIDNO:2中的HCDR3的HCDR3；SEQIDNO:4中的LCDR1的LCDR1；SEQIDNO:4中的LCDR2的LCDR2；SEQIDNO:4中的LCDR3的LCDR3；以及至少一个VL框架残基，选自由以下各项组成的组：SEQIDNO:4中序列第1位的谷氨酸；SEQIDNO:4中序列第13位的亮氨酸；SEQIDNO:4中序列第18位的精氨酸；SEQIDNO:4中序列第20位的苏氨酸；SEQIDNO:4中序列第21位的亮氨酸；SEQIDNO:4中序列第22位的丝氨酸；SEQIDNO:4中序列第41位的谷氨酰胺；SEQIDNO:4中序列第42位的丙氨酸；SEQIDNO:4中序列第57位的异亮氨酸；SEQIDNO:4中序列第59位的天冬氨酸；SEQIDNO:4中序列第70位的苯丙氨酸；SEQIDNO:4中序列第71位的苏氨酸；SEQIDNO:4中序列第77位的亮氨酸；SEQIDNO:4中序列第79位的脯氨酸；SEQIDNO:4中序列第84位的缬氨酸；以及SEQIDNO:4中序列第99位的甘氨酸。本文提供的一些实施方式涉及抗原结合构建体，如，抗体，包括抗体片段，其包括：SEQIDNO:2中的HCDR1的HCDR1；SEQIDNO:2中的HCDR2的HCDR2；SEQIDNO:2中的HCDR3的HCDR3；SEQIDNO:4中的LCDR1的LCDR1；SEQIDNO:4中的LCDR2的LCDR2；SEQIDNO:4中的LCDR3的LCDR3；至少一个选自由以下各项组成的VH框架残基：SEQIDNO:2中序列第1位的谷氨酰胺；SEQIDNO:2中序列第5位的缬氨酸；SEQIDNO:2中序列第9位的丙氨酸；SEQIDNO:2中序列第11位的缬氨酸；SEQIDNO:2中序列第13位的赖氨酸；SEQIDNO:2中序列第44位的精氨酸；SEQIDNO:2中序列第46位的谷氨酸；SEQIDNO:2中序列第65位的谷氨酰胺；SEQIDNO:2中序列第66位的甘氨酸；SEQIDNO:2中序列第67位的精氨酸；SEQIDNO:2中序列第68位的缬氨酸；SEQIDNO:2中序列第69位的苏氨酸；SEQIDNO:2中序列第87位的精氨酸；SEQIDNO:2中序列第88位的丝氨酸；以及至少一个VL框架残基，选自由以下各项组成的组：SEQIDNO:4中序列第1位的谷氨酸；SEQIDNO:4中序列第13位的亮氨酸；SEQIDNO:4中序列第18位的精氨酸；SEQIDNO:4中序列第20位的苏氨酸；SEQIDNO:4中序列第21位的亮氨酸；SEQIDNO:4中序列第22位的丝氨酸；SEQIDNO:4中序列第41位的谷氨酰胺；SEQIDNO:4中序列第42位的丙氨酸；SEQIDNO:4中序列第57位的异亮氨酸；SEQIDNO:4中序列第59位的天冬氨酸；SEQIDNO:4中序列第70位的苯丙氨酸；SEQIDNO:4中序列第71位的苏氨酸；SEQIDNO:4中序列第77位的亮氨酸；SEQIDNO:4中序列第79位的脯氨酸；SEQIDNO:4中序列第84位的缬氨酸；以及SEQIDNO:4中序列第99位的甘氨酸。在一些实施方式中，抗原结合构建体特异性地结合至CD4。在一些实施方式中，抗原结合构建体消耗CD4T细胞。在一些实施方式中，抗原结合构建体包含如本文中所描述的可检测标记。在一些实施方式中，抗原结合构建体包含如本文中所描述的治疗剂。本文提供的一些实施方式涉及抗原结合构建体，如，抗体，包括抗体片段，其包括可变重链结构域(VH)，其中，VH包含SEQIDNO:2中的氨基酸序列。本文提供的一些实施方式涉及抗原结合构建体，如，抗体，包括抗体片段，其包括可变轻链结构域(VL)，其中，VL包含SEQIDNO:4中的氨基酸序列。本文提供的一些实施方式涉及抗原结合构建体，如，抗体，包括抗体片段，其包括：SEQIDNO:2的可变重链结构域(VH)；以及SEQIDNO:4的可变轻链结构域(VL)。本文提供的一些实施方式涉及抗原结合构建体，如，抗体，包括抗体片段，其中，抗原结合构建体是全长抗体。本文提供的一些实施方式涉及结合至CD4的人源化微抗体。在一些实施方式中，微抗体可以包含SEQIDNO:5、6、7或8的氨基酸序列。本文提供的一些实施方式涉及编码如在此所描述的抗原本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗原结合构建体，包含：/nSEQ ID NO:2中的HCDR1的HCDR1；/nSEQ ID NO:2中的HCDR2的HCDR2；/nSEQ ID NO:2中的HCDR3的HCDR3；/nSEQ ID NO:4中的LCDR1的LCDR1；/nSEQ ID NO:4中的LCDR2的LCDR2；/nSEQ ID NO:4中的LCDR3的LCDR3；以及/n至少一个选自由以下各项组成的组的VH框架残基：/nSEQ ID NO:2中序列第1位的谷氨酰胺；/nSEQ ID NO:2中序列第5位的缬氨酸；/nSEQ ID NO:2中序列第9位的丙氨酸；/nSEQ ID NO:2中序列第11位的缬氨酸；/nSEQ ID NO:2中序列第13位的赖氨酸；/nSEQ ID NO:2中序列第44位的精氨酸；/nSEQ ID NO:2中序列第46位的谷氨酸；/nSEQ ID NO:2中序列第65位的谷氨酰胺；/nSEQ ID NO:2中序列第66位的甘氨酸；/nSEQ ID NO:2中序列第67位的精氨酸；/nSEQ ID NO:2中序列第68位的缬氨酸；/nSEQ ID NO:2中序列第69位的苏氨酸；/nSEQ ID NO:2中序列第87位的精氨酸；/nSEQ ID NO:2中序列第88位的丝氨酸。/n...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180608 US 62/682,3391.一种抗原结合构建体，包含：
SEQIDNO:2中的HCDR1的HCDR1；
SEQIDNO:2中的HCDR2的HCDR2；
SEQIDNO:2中的HCDR3的HCDR3；
SEQIDNO:4中的LCDR1的LCDR1；
SEQIDNO:4中的LCDR2的LCDR2；
SEQIDNO:4中的LCDR3的LCDR3；以及
至少一个选自由以下各项组成的组的VH框架残基：
SEQIDNO:2中序列第1位的谷氨酰胺；
SEQIDNO:2中序列第5位的缬氨酸；
SEQIDNO:2中序列第9位的丙氨酸；
SEQIDNO:2中序列第11位的缬氨酸；
SEQIDNO:2中序列第13位的赖氨酸；
SEQIDNO:2中序列第44位的精氨酸；
SEQIDNO:2中序列第46位的谷氨酸；
SEQIDNO:2中序列第65位的谷氨酰胺；
SEQIDNO:2中序列第66位的甘氨酸；
SEQIDNO:2中序列第67位的精氨酸；
SEQIDNO:2中序列第68位的缬氨酸；
SEQIDNO:2中序列第69位的苏氨酸；
SEQIDNO:2中序列第87位的精氨酸；
SEQIDNO:2中序列第88位的丝氨酸。


2.一种抗原结合构建体，包含：
SEQIDNO:2中的HCDR1的HCDR1；
SEQIDNO:2中的HCDR2的HCDR2；
SEQIDNO:2中的HCDR3的HCDR3；
SEQIDNO:4中的LCDR1的LCDR1；
SEQIDNO:4中的LCDR2的LCDR2；
SEQIDNO:4中的LCDR3的LCDR3；以及
至少一个选自由以下各项组成的组的VL框架残基：
SEQIDNO:4中序列第1位的谷氨酸；
SEQIDNO:4中序列第13位的亮氨酸；
SEQIDNO:4中序列第18位的精氨酸；
SEQIDNO:4中序列第20位的苏氨酸；
SEQIDNO:4中序列第21位的亮氨酸；
SEQIDNO:4中序列第22位的丝氨酸；
SEQIDNO:4中序列第41位的谷氨酰胺；
SEQIDNO:4中序列第42位的丙氨酸；
SEQIDNO:4中序列第57位的异亮氨酸；
SEQIDNO:4中序列第59位的天冬氨酸；
SEQIDNO:4中序列第70位的苯丙氨酸；
SEQIDNO:4中序列第71位的苏氨酸；
SEQIDNO:4中序列第77位的亮氨酸；
SEQIDNO:4中序列第79位的脯氨酸；
SEQIDNO:4中序列第84位的缬氨酸；
SEQIDNO:4中序列第99位的甘氨酸。


3.根据权利要求2所述的抗原结合构建体，还包含选自由以下各项组成的组的至少一个VH框架残基：
SEQIDNO:2中序列第1位的谷氨酰胺；
SEQIDNO:2中序列第5位的缬氨酸；
SEQIDNO:2中序列第9位的丙氨酸；
SEQIDNO:2中序列第11位的缬氨酸；
SEQIDNO:2中序列第13位的赖氨酸；
SEQIDNO:2中序列第44位的精氨酸；
SEQIDNO:2中序列第46位的谷氨酸；
SEQIDNO:2中序列第65位的谷氨酰胺；
SEQIDNO:2中序列第66位的甘氨酸；
SEQIDNO:2中序列第67位的精氨酸；
SEQIDNO:2中序列第68位的缬氨酸；
SEQIDNO:2中序列第69位的苏氨酸；
SEQIDNO:2中序列第87位的精氨酸；
SEQIDNO:2中序列第88位的丝氨酸。


4.根据权利要求1至3中任一项所述的抗原结合构建体，其中，所述抗原结合构建体特异性地结合至CD4。


5.根据权利要求4所述的抗原结合构建体，其中，所述抗原结合构建体消耗CD4T细胞。


6.根据权利要求1至3中任一项所述的抗原结合构建体，还包含可检测标记。


7.根据权利要求1至3中任一项所述的抗原结合构建体，还包含可变重链结构域(VH)，其中，所述VH包含SEQIDNO:2中的氨基酸序列。


8.根据权利要求1至3中任一项所述的抗原结合构建体，还包含可变轻链结构域(VL)，其中，所述VL包含SEQIDNO:4中的氨基酸序列。


9.根据权利要求1至3中任一项所述的抗原结合构建体，还包含：
SEQIDNO:2的可变重链结构域(VH)；以及
SEQIDNO:4的可变轻链结构域(VL)。


10.根据权利要求1至3中任一项所述的抗原结合构建体，其中，所述抗原结合构建体是全长抗体。


11.根据权利要求1至3中任一项所述的抗原结合构建体，其中，所述抗原结合构建体是微抗体。


12.根据权利要求11所述的抗原结合构建体，还包含SEQIDNO:5、6、7或8中的氨基酸序列。


13.一种编码权利要求11所述的微抗体的核酸序列，其中，所述核酸序列包含SEQIDNO:9或10中的核酸序列。


14.根据权利要求1至3中任一项所述的抗原结合构建体，其中，所述抗原结合构建体是人源化cys-双价抗体。


15.根据权利要求14所述的人源化cys-双价抗体，包含SEQIDNO:11、12、13、14、15、16、17或18中的氨基酸序列。


16.根据权利要求1所述的抗原结合构建体，其中，所述抗原结合构建体包含多肽，所述多肽包含含有连接至可变轻链结构域(VL)的可变重链结构域(VH)的单链可变片段(scFv)。


17.根据权利要求14所述的人源化cys-双价抗体，其中，从N端至C端是VH、VL。


18.根据权利要求15所述的人源化cys-双价抗体，其中，从N端至C端是VL、VH。


19.根据权利要求1至3中任一项所述的抗原结合构建体，还包含含有SEQIDNO:34、35、36或37中的氨基酸序列的铰链区。


20.根据权利要求1至3中任一项所述的抗原结合构建体，还包含以下各项中的至少一个：
SEQIDNO:2中序列第1位的谷氨酰胺；
SEQIDNO:2中序列第5位的缬氨酸；
SEQIDNO:2中序列第9位的丙氨酸；
SEQIDNO:2中序列第11位的缬氨酸；
SEQIDNO:2中序列第13位的赖氨酸；
SEQIDNO:2中序列第44位的精氨酸；
SEQIDNO:2中序列第46位的谷氨酸；
SEQIDNO:2中序列第65位的谷氨酰胺；
SEQIDNO:2中序列第66位的甘氨酸；
SEQIDNO:2中序列第67位的精氨酸；
SEQIDNO:2中序列第68位的缬氨酸；
SEQIDNO:2中序列第69位的苏氨酸；
SEQIDNO:2中序列第87位的精氨酸；
SEQIDNO:2中序列第88位的丝氨酸；
SEQIDNO:4中序列第1位的谷氨酸；
SEQIDNO:4中序列第13位的亮氨酸；
SEQIDNO:4中序列第18位的精氨酸；
SEQIDNO:4中序列第20位的苏氨酸；
SEQIDNO:4中序列第21位的亮氨酸；
SEQIDNO:4中序列第22位的丝氨酸；
SEQIDNO:4中序列第41位的谷氨酰胺；
SEQIDNO:4中序列第42位的丙氨酸；
SEQIDNO:4中序列第57位的异亮氨酸；
SEQIDNO:4中序列第59位的天冬氨酸；
SEQIDNO:4中序列第70位的苯丙氨酸；
SEQIDNO:4中序列第71位的苏氨酸；
SEQIDNO:4中序列第77位的亮氨酸；
SEQIDNO:4中序列第79位的脯氨酸；
SEQIDNO:4中序列第84位的缬氨酸；
SEQIDNO:4中序列第99位的甘氨酸。


21.根据权利要求1至3中任一项所述的抗原结合构建体，还包含以下各项中的至少一个：
SEQIDNO:2中序列第1位的谷氨酰胺；
SEQIDNO:2中序列第5位的缬氨酸；
SEQIDNO:2中序列第9位的丙氨酸；
SEQIDNO:2中序列第11位的缬氨酸；
SEQIDNO:2中序列第13位的赖氨酸；
SEQIDNO:2中序列第44位的精氨酸；
SEQIDNO:2中序列第46位的谷氨酸；
SEQIDNO:2中序列第65位的谷氨酰胺；
SEQIDNO:2中序列第66位的甘氨酸；
SEQIDNO:2中序列第67位的精氨酸；
SEQIDNO:2中序列第68位的缬氨酸；
SEQIDNO:2中序列第69位的苏氨酸；
SEQIDNO:2中序列第87位的精氨酸；
SEQIDNO:2中序列第88位的丝氨酸；
SEQIDNO:4中序列第1位的谷氨酸；
SEQIDNO:4中序列第13位的亮氨酸；
SEQIDNO:4中序列第18位的精氨酸；
SEQIDNO:4中序列第20位的苏氨酸；
SEQIDNO:4中序列第21位的亮氨酸；
SEQIDNO:4中序列第22位的丝氨酸；
SEQIDNO:4中序列第41位的谷氨酰胺；
SEQIDNO:4中序列第42位的丙氨酸；
SEQIDNO:4中序列第57位的异亮氨酸；
SEQIDNO:4中序列第59位的天冬氨酸；
SEQIDNO:4中序列第70位的苯丙氨酸；
SEQIDNO:4中序列第71位的苏氨酸；
SEQIDNO:4中序列第77位的亮氨酸；
SEQIDNO:4中序列第79位的脯氨酸；
SEQIDNO:4中序列第84位的缬氨酸；
SEQIDNO:4中序列第99位的甘氨酸。


22.根据权利要求1至3任一项所述的抗原结合构建体，还包含所有以下各项：
SEQIDNO:2中序列第1位的谷氨酰胺；
SEQIDNO:2中序列第5位的缬氨酸；
SEQIDNO:2中序列第9位的丙氨酸；
SEQIDNO:2中序列第11位的缬氨酸；
SEQIDNO:2中序列第13位的赖氨酸；
SEQIDNO:2中序列第44位的精氨酸；
SEQIDNO:2中序列第46位的谷氨酸；
SEQIDNO:2中序列第65位的谷氨酰胺；
SEQIDNO:2中序列第66位的甘氨酸；
SEQIDNO:2中序列第67位的精氨酸；
SEQIDNO:2中序列第68位的缬氨酸；
SEQIDNO:2中序列第69位的苏氨酸；
SEQIDNO:2中序列第87位的精氨酸；
SEQIDNO:2中序列第88位的丝氨酸；
SEQIDNO:4中序列第1位的谷氨酸；
SEQIDNO:4中序列第13位的亮氨酸；
SEQIDNO:4中序列第18位的精氨酸；
SEQIDNO:4中序列第20位的苏氨酸；
SEQIDNO:4中序列第21位的亮氨酸；
SEQIDNO:4中序列第22位的丝氨酸；
SEQIDNO:4中序列第41位的谷氨酰胺；
SEQIDNO:4中序列第42位的丙氨酸；
SEQIDNO:4中序列第57位的异亮氨酸；
SEQIDNO:4中序列第59位的天冬氨酸；
SEQIDNO:4中序列第70位的苯丙氨酸；
SEQIDNO:4中序列第71位的苏氨酸；
SEQIDNO:4中序列第77位的亮氨酸；
SEQIDNO:4中序列第79位的脯氨酸；
SEQIDNO:4中序列第84位的缬氨酸；
SEQIDNO:4中序列第99位的甘氨酸。


23.一种微抗体或cys-双价抗体，包括：
SEQIDNO:2中的HCDR1的HCDR1；
SEQIDNO:2中的HCDR2的HCDR2；
SEQIDNO:2中的HCDR3的HCDR3；
SEQIDNO:4中的LCDR1的LCDR1；
SEQIDNO:4中的LCDR2的LCDR2；
SEQIDNO:4中的LCDR3的LCDR3；以及以下各项中的至少一个：
SEQIDNO:2中序列第1位的谷氨酰胺；
SEQIDNO:2中序列第2位的缬氨酸；
SEQIDNO:2中序列第4位的亮氨酸；
SEQIDNO:2中序列第24位的丙氨酸；
SEQIDNO:2中序列第25位的丝氨酸；
SEQIDNO:2中序列第34位的甲硫氨酸；
SEQIDNO:2中序列第35位的组氨酸；
SEQIDNO:2中序列第46位的谷氨酸；
SEQIDNO:2中序列第47位的色氨酸；
SEQIDNO:2中序列第48位的异亮氨酸；
SEQIDNO:2中序列第49位的甘氨酸；
SEQIDNO:2中序列第50位的丙氨酸；
SEQIDNO:2中序列第51位的亮氨酸；
SEQIDNO:2中序列第61位的天冬酰胺；
SEQIDNO:2中序列第64位的苯丙氨酸；
SEQIDNO:2中序列第70位的异亮氨酸；
SEQIDNO:2中序列第72位的精氨酸；
SEQIDNO:2中序列第79位的丙氨酸；
SEQIDNO:2中序列第97位的苏氨酸；
SEQIDNO:2中序列第98位的精氨酸；
SEQIDNO:4中序列第1位的谷氨酸；
SEQIDNO:4中序列第2位的异亮氨酸；
SEQIDNO:4中序列第4位的亮氨酸；
SEQIDNO:4中...

【专利技术属性】
技术研发人员：亚历山德罗·马肖尼，道列特·萨特帕耶夫，托弗·奥拉夫森，
申请(专利权)人：伊麦吉纳博公司，
类型：发明
国别省市：美国;US