结合CD137和OX40的抗体分子制造技术

本申请涉及结合CD137和OX40并能激动CD137和OX40的抗体分子。抗体分子包含基于CDR的CD137结合位点和位于抗体分子的恒定域中的OX40抗原结合位点。本发明专利技术的抗体分子可用于例如疾病(例如癌症和感染性疾病)的治疗。如疾病(例如癌症和感染性疾病)的治疗。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】结合CD137和OX40的抗体分子
专利

[0001]本申请涉及结合CD137和OX40并能激动CD137和OX40的抗体分子。抗体分子包含基于CDR的CD137结合位点和位于抗体分子的恒定域中的OX40抗原结合位点。本专利技术的抗体分子可用于例如疾病(例如癌症和感染性疾病)的治疗。
[0002]专利技术背景
[0003]哺乳动物的免疫系统是一个精细平衡的系统，有时会被诸如癌症之类的疾病破坏。检查点受体通过发挥共刺激或共抑制作用，在免疫系统对疾病的反应中发挥重要作用，而二者的平衡决定了免疫反应的命运(Pardoll,2012)。共抑制剂抑制T细胞增殖并诱导抗炎细胞因子释放。它们可以减轻炎症，避免过度免疫反应造成器官/组织损害。另一方面，共刺激剂通过促进T细胞克隆扩增，效应子分化和存活，以促进保护性免疫应答的发展。
[0004]一种行之有效的癌症免疫治疗方法可通过阻断共抑制受体功能或诱导共刺激受体活性的抗体靶向这些检查点受体，来触发免疫系统识别并杀死肿瘤细胞(Pardoll,2012)。阻断共抑制受体活性的抗体已显示出良好的临床活性，目前已被批准用于治疗癌症(Larkin等,2015)。诱导共刺激受体活性的抗体已在临床前模型系统中显示出巨大潜力(Moran等,2013；Schaer等,2014)，目前有几种药物正在临床试验中(Mayes等.，2018；Melero等,2013)。这些抗体旨在模拟这些共刺激受体的配体，因此也被称为激动剂抗体。
[0005]几种T细胞共刺激受体是TNF受体超家族的成员，该家族是细胞表面表达的一大类蛋白质，参与免疫和非免疫细胞功能(Bremer,2013)。对TNF家族受体及其同源配体之间形成的配合物的结构分析表明，在大多数情况下，对于三聚体的化学计量比，配合物为三聚体，并且TNFR家族配体通常以三聚体形式在细胞表面表达(Wajant,2015)。对TNFR激活提出的模型是，与三聚体配体的相互作用诱导了单体受体的三聚化并启动信号转导。这预先假设TNFR家族成员以单体表达，只有配体的相互作用诱导了受体三聚体的形成。该模型最近受到了质疑(Vanamee和Faustman,2018)，这些单体在没有配体相互作用的情况下形成更高阶结构仍然是一个有争议的问题。预组装的受体二聚体或无活性的三聚体的存在需要多个受体复合物的额外簇聚(cluster)，这可以解释某些可溶、仅三聚体的TNF配体的活性比这些受体的膜结合形式低，受体膜结合形式可形成配体超簇聚并诱导TNF受体超簇聚，从而诱导更高水平的受体活化(M
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ller等,2008)。该理论也与以下观察一致：TNFR特异性抗体通常不具有或具有低激动活性，并且需要抗体-TNF受体复合物的二次交联以诱导足够的受体簇聚和活化，从而模拟TNF配体超簇聚(Wajant,2015)。
[0006]抗体-TNF受体复合物的二次交联可以在体外通过交联剂,例如蛋白A或G,或靶向TNF受体特异性激动剂抗体恒定域的二抗实现(Vanamee和Faustman,2018；Wajant,2015)。然而，在体内，这种二次交联需要与存在于免疫细胞表面的Fcγ受体相互作用，例如巨噬细胞、NK细胞或B细胞。抗体与Fcγ受体的相互作用是复杂的，因为在人类中有6种Fcγ受体，对4种人IgG同种型具有不同的表达模式和亲和力(Bruhns等,2009)。已证明Fcγ受体对于靶向体内TNF受体超家族的激动剂抗体的最佳抗肿瘤活性是必需的(Bulliard等,2013；Bulliard等,2014)。然而，依赖TNFR激动剂抗体的Fcγ受体介导交联以诱导受体强激活很
可能会限制其体内总活性，由于以下多种原因：1)结合抗体的细胞将需要与表达Fcγ受体的细胞反式相互作用，这种相互作用的频率将限制表达TNFR的细胞的激活；2)与典型的治疗性抗体对其靶标的亲和力相比，Fcγ受体对人IgG的亲和力通常低得多(分别为微摩尔范围对纳摩尔范围)；和3)Fcγ受体介导抗体的效应子功能，例如ADCC(抗体依赖性细胞介导的细胞毒性)和ADCP(抗体依赖性细胞吞噬作用)，因此有可能消除激动剂抗体想要激活的细胞(Mayes等,2018)。
[0007]使用一种同源抗原交联TNF受体激动剂的双价双特异性抗体代表了另外一种Fcγ受体介导的交联。与TNF受体家族成员和另一个细胞表面表达的受体结合，同一细胞(顺式)或另一细胞(反式)，产生抗体的交联效果。如果第二个靶标以模拟TNF配体超簇聚的高水平表达，那么这种抗体交联的机制将导致TNF受体的超簇化。相比单特异性激动剂抗体，TNFR激动剂抗体的双特异性抗体方法具有几个理论优势：1)通过靶向第二抗原，例如检查点受体或与肿瘤相关的抗原，TNFR激动作用可针对于肿瘤微环境和外周环境的特定免疫细胞，作为双特异性抗体的第二特异性；2)双特异性抗体的交联结合结构域的亲和力可以设计为高于抗体对Fcγ受体的亲和力，从而使交联更有效；3)可以通过突变选择性地无效抗体效应子功能，从而确保不会去除(depletion)目的活化细胞；4)可以在单个双重激动剂分子中实现两个单独的TNF受体的激动作用，结合不免疫细胞的活化作用从而增强对免疫反应的刺激；5)靶向共表达的受体可以导致单个细胞顺式激活，而无需两个细胞相互作用。
[0008]几种TNF受体家族成员在免疫细胞中具有重叠的表达模式。特别地，OX40、CD137、GITR和CD27在活化的T细胞上表达，并且已经通过实验验证了OX40和CD137的共表达(Ma等,2005)。
[0009]OX40主要在活化的T细胞上表达，包括CD4+ T细胞、CD8+ T细胞、1型和2型T辅助细胞(Th1和Th2)和调节性T(Treg)细胞，并在活化的自然杀伤细胞(NK)上表达。在抗原呈递细胞(APC)上表达的OX40及其配体OX40配体(OX40L)的相互作用，增加了T细胞的克隆扩增、分化和存活，并增强了记忆性T细胞的生成(Croft等,2009)。OX40刺激可对T细胞产生直接影响，促进其增殖和存活，或者通过增强炎症细胞因子(例如IL2和IFNγ)的产生而产生间接影响。OX40信号传导也可以调节Treg的功能，尽管在这些细胞上它可以消除其抑制活性(Takeda等,2004)。在癌症中，发现OX40在患有头颈部癌、黑色素瘤和结肠直肠癌的患者的肿瘤浸润T细胞中表达，其中高水平的OX40阳性淋巴细胞与患者更好的存活率相关(Petty等,2002；Vetto等,1997)。在小鼠中进行的临床前研究已经证明OX40激动剂抗体在几种同系肿瘤模型中的治疗效果，但是以靶向OX40作为单一疗法的效果却是可变的，并且似乎与肿瘤的免疫原性相关(等,2000)。这与以下观点一致：在肿瘤特异性T细胞上的OX40表达需要足够的引发作用，这可能是免疫原性差的肿瘤所不能提供的。在某些同系模型中，已经确定OX40抗体OX86的抗肿瘤活性是由于其以Fcγ受体依赖性方式，去除表达高水平OX40的肿瘤内Treg所产生的(Bulliard等,2014)。
[0010]OX40的激动本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种与CD137和OX40结合的抗体分子，包括(a)基于互补决定区(CDR)的CD137抗原结合位点；和(b)位于抗体分子的CH3结构域的OX40抗原结合位点；其中基于CDR的抗原结合位点包含CDR 1-6，如以下所示：(i)分别为SEQ ID NO：1、2、3、4、5和6，[FS30-10-16]；(ii)分别为SEQ ID NO：1、2、16、4、5和6，[FS30-10-3]；(iii)分别为SEQ ID NO：1、2、21、4、5和6，[FS30-10-12]；(iv)分别为SEQ ID NO：25、26、27、4、5和28，[FS30-35-14]；或(v)分别为SEQ ID NO：33、34、35、4、5和36，[FS30-5-37]；和其中OX40抗原结合位点包含分别位于CH3结构域的AB、CD和EF结构环中的第一序列、第二序列和第三序列，其中第一、第二和第三序列分别具有在SEQ ID NO：51、52和53中所示序列[FS20-22-49]。2.根据权利要求1所述的抗体分子，其中：(i)第一序列位于抗体分子的CH3结构域的14至18位；(ii)第二序列位于抗体分子的CH3结构域的45.1至77位；和/或(iii)第三序列位于抗体分子的CH3结构域的93至101位；和其中氨基酸残基是根据IMGT编号方案编号的。3.根据前述权利要求中任一项的抗体分子，其中所述抗体分子包含SEQ ID NO：54[FS20-22-49]所示的CH3结构域序列。4.根据前述权利要求中任一项的抗体分子，其中所述抗体分子包含以下所列的VH结构域和VL结构域：(i)分别为SEQ ID NO：12和14，[FS30-10-16]；(ii)分别为SEQ ID NO：18和14，[FS30-10-3]；(iii)分别为SEQ ID NO：23和14，[FS30-10-12]；(iv)分别为SEQ ID NO：170和172，[FS30-35-14]；或(v)分别为SEQ ID NO：40和42，[FS30-5-37]。5.根据前述权利要求中任一项所述的抗体分子，其中所述抗体分子包含抗体的重链和轻链：(i)分别在SEQ ID NO：95和97列出的FS20-22-49AA/FS30-10-16；(ii)分别在SEQ ID NO：99和97列出的FS20-22-49AA/FS30-10-3；(iii)分别在SEQ ID NO：103和97列出的FS20-22-49AA/FS30-10-12；(iv)分别在SEQ ID NO：105和107列出的FS20-22-49AA/FS30-35-14；或(v)分别在SEQ ID...

【专利技术属性】
技术研发人员：M，
申请(专利权)人：F星贝塔有限公司，
类型：发明
国别省市：