一种抗CD40抗体及其应用制造技术

本发明专利技术公开一种特异性结合CD40的抗体或其抗原结合部分，属于抗体技术领域。所述抗体或其抗原结合部分的重链可变区CDR

【技术实现步骤摘要】
一种抗CD40抗体及其应用


[0001]本专利技术属于抗体领域，具体地，涉及一种抗CD40抗体及其应用。

技术介绍

[0002]CD40与CD40L互为受配体，CD40是一种相对分子质量为48KD的在免疫系统的B细胞和专门抗原呈递细胞表面以及许多非造血细胞类型和癌细胞中表达的Ⅰ型膜糖蛋白，属于神经生长因子受体/肿瘤坏死因子受体超家族成员。CD40前体含有297个氨基酸，N端为20个氨基酸的信号肽，胞外区有193个氨基酸，跨膜区有22个氨基酸，胞内区有62个氨基酸。其中胞外区的193个氨基酸构成4个富含半胱氨酸的结构域，在铰链区的71个氨基酸中含有9个丝氨酸和7个苏氨酸，是潜在的糖基化位点。CD40的糖基化程度较高，糖基化后的相对分子量可高达40KD～50KD。
[0003]CD40L与CD40分子结合后，能使膜CD40分子交联和配基化，继而使CD40分子多聚化，构成CD40信号传导的结构基础和始动因素。通过CD40传导信号活化的NF-κB可激活磷酸络氨酸激酶(PTK)和丝氨酸/素氨酸激酶，这是CD40介导的B细胞活化的关键步骤。B细胞表面的CD40与CD40L结合后，可导致非受体型酪氨酸激酶(JAK3)和信号转导及转录激活因子3(STAT3)的络氨酸磷酸化，从而激活这两个信号转导分子。而JAK3-STAT3信号途径和TRAF信号转导途径，包括TNF受体相关因子2(TRAF2)介导的NF-κb和TRAF3的活化，协同参与了免疫球蛋白的类别转换。表达在CD
4+
T细胞表面的CD40L与未致敏的B细胞表面的CD40分子结合后，通过上述信号通路传递给B细胞中必要的活化信号，从而启动B细胞的增殖，类别转换以及分化成浆细胞。
[0004]CD40不但在正常的免疫细胞上表达，还可以在许多恶性细胞上表达。例如，CD40在以下疾病中过表达：B系NHL、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、多毛细胞白血病(HCL)、霍奇金病、多发性骨髓瘤以及膀胱癌、肾癌、卵巢癌、宫颈癌、乳腺癌、肺癌、鼻咽癌、恶性黑色素瘤等。
[0005]因此，开发CD40抗体有助于包括肿瘤在内的相关疾病治疗的辅助诊断。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是提供一种抗CD40抗体及其应用，为此，本专利技术采用的技术方案如下：
[0007]本专利技术第一方面提供一种抗CD40的抗体或其抗原结合部分，其重链可变区CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3和轻链可变区CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3分别包括SEQ ID NO:3-8所示的氨基酸序列。
[0008]在本专利技术的一些实施方案中，所述抗原结合部分选自Fab片段、Fab'片段、F(ab')2片段、Fv片段、scFv片段、Fd片段和单域抗体。
[0009]在本专利技术的一些实施方案中，重链可变区CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3和轻链可变区CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3分别由SEQ ID NO:3-8所示的氨基酸序组成。
[0010]本专利技术的第二方面提供编码本专利技术第一方面任一所述抗体或其抗原结合部分的基因，编码重链的基因包括SEQ ID NO.1所示核苷酸序列，编码轻链的基因包括SEQ ID NO.2所示核苷酸序列。
[0011]本专利技术的第三方面提供一种表达载体，包括本专利技术第二方面所述的基因。在本专利技术的一些实施方案中，所述载体为原核表达载体或真核表达载体。
[0012]本专利技术的第四方面提供一种宿主细胞，其含有本专利技术第三方面所述的表达载体。
[0013]在一些实施方案中，所述载体为原核表达载体，所述宿主细胞为原核细胞，如大肠杆菌。在另一些实施方案中，所述载体为真核表达载体，所述宿主细胞为真核细胞。
[0014]本专利技术第五方面提供本专利技术第一方面所述的抗体或其抗原结合部分在制备用于检测CD40蛋白的试剂盒中的应用。
[0015]在一些实施方案中，检测CD40蛋白的方法选自酶联免疫吸附法、蛋白质印迹法和流式细胞法。
[0016]本专利技术第六方面提供一种用于检测CD40蛋白的试剂盒，包括本专利技术第一方面所述的抗体或其抗原结合部分。
[0017]在一些实施方案中，所述试剂盒适用于选自酶联免疫吸附法、蛋白质印迹法和流式细胞法的检测方法。
[0018]本专利技术第七方面提供本专利技术第一方面所述的抗体或其抗原结合部分在制备用于促进B细胞增殖的试剂盒中的应用。
[0019]本专利技术第七方面提供一种用于促进B细胞增殖的试剂盒，包括本专利技术第一方面所述的抗体或其抗原结合部分。
[0020]在一些实施方案中，撰述抗体或其抗原结合部分能够与CD40结合，形成类似CD40L-CD40配受体的复合物，从而启动信号通路，促进B细胞增殖。进一步，还可刺激B细胞类别转换，分化成浆细胞。
[0021]本专利技术的有益效果
[0022]相对于现有技术，本专利技术具有以下有效效果：
[0023]本专利技术的抗CD40的兔单克隆抗体具有极高的特异性，解离平衡常数KD＝2.47
×
10-11
，在相关研究和应用领域有巨大的潜力和优势，比如应用于以CD40为靶点的治疗方案的伴随诊断中。
[0024]本专利技术的抗CD40的兔单克隆抗体与CD40结合，可以形成类似CD40L-CD40配受体结合，从而启动信号通路，促进B细胞增殖。进一步，还可刺激B细胞类别转换，分化成浆细胞。
附图说明
[0025]图1示出了本专利技术抗CD40抗体可促进B细胞增殖。A：对照组，B：实验组。
[0026]图2示出了利用抗CD40兔单克隆抗体通过酶联免疫吸附法检测CD40重组蛋白的结果。
[0027]图3示出了利用抗CD40兔单克隆抗体通过蛋白质印迹法检测CD40重组蛋白的结果。泳道1：1:500，泳道2：1:1000，泳道3：1:2000，泳道4：1:4000，泳道5：1:8000，泳道6：1:16000，泳道7：1:32000，tublin：微管蛋白。
[0028]图4示出了利用抗CD40兔单克隆抗体检测Raji细胞CD40蛋白的流式细胞检测结
果。左侧峰为加入兔同型对照的Raji细胞荧光强度峰，右侧峰为加入了抗CD40兔单克隆抗体的Raji细胞荧光强度峰。
[0029]图5示出了抗CD40兔单克隆抗体与CD40L竞争结合CD40的ELISA曲线。
具体实施方式
[0030]为了使本专利技术所解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。
[0031]实施例
[0032]以下例子在此用于示范本专利技术的优选实施方案。本领域内的技术人员会明白，下述例子中披露的技术代表专利技术人发现的可以用于实施本专利技术的技术，因此可以视为实施本专利技术的优选方案。但是本领域内的技术人员根据本说明书应该明白，这里所公开的特定实施例可以做很多修改，仍然能得到相同的或者类似的结果，而非背离本专利技术的精神或范围。
[0033]除非另本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗CD40的抗体或其抗原结合部分，其特征在于，其重链可变区CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3和轻链可变区CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3分别包括SEQ ID NO.3-8所示的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合部分，其特征在于，所述抗原结合部分选自Fab片段、Fab'片段、F(ab')2片段、Fv片段、scFv片段、Fd片段和单域抗体。3.编码权利要求1或2所述抗体或其抗原结合部分的基因，其特征在于，编码重链的基因包括SEQ ID NO.1所示核苷酸序列，编码轻链的基因包括SEQ ID NO.2所示核苷酸序列。4.一种表达载体，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡旻，李明振，蔡宁，潘丽，
申请(专利权)人：杭州百凌生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：