抗可溶性转铁蛋白受体抗体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种可溶性转铁蛋白受体抗体或其抗原结合片段，制备它们的方法，以及包含它们的试剂盒。本发明专利技术进一步涉及所述抗体或其抗原结合片段用于检测人血清中可溶性转铁蛋白受体含量的用途。蛋白受体含量的用途。蛋白受体含量的用途。

【技术实现步骤摘要】
抗可溶性转铁蛋白受体抗体及其应用


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其是涉及抗体及体外检测领域。具体而言，本专利技术涉及抗可溶性转铁蛋白受体抗体或其抗原结合片段，制备它们的方法，以及包含它们的试剂盒。本专利技术进一步涉及所述抗体或其抗原结合片段的应用。

技术介绍

[0002]转铁蛋白受体(transferrin receptor，TfR)是一种单次跨膜的糖蛋白，分子量约为190kDa。它由两个相同的、以二硫键桥连结在一起的次单元组成。蛋白质分解作用会使转铁蛋白受体成为可溶性转铁蛋白受体(soluble transferrin receptor，sTfR)。sTfR是存在血清中完整的转铁蛋白受体单体的截断形式，其缺少了转铁蛋白受体的前100个氨基酸。
[0003]组织细胞摄取铁是通过血液中携带铁的转铁蛋白与细胞表面的转铁蛋白受体介导的。铁以不同的方式分布于人体，只有约0.1％的铁在血液循环中被运输，它们与转铁蛋白结合，被运往目的地。转铁蛋白受体可介导结合了铁的转铁蛋白进入红细胞样细胞前体，即携带铁的转铁蛋白受体与细胞表面的转铁蛋白受体结合形成复合体，以胞饮的形式进入细胞。
[0004]研究表明血清中的sTfR浓度变化能比较准确地反映组织内转铁蛋白受体数目的变化。人体内80％的转铁蛋白存在于骨髓幼红细胞膜上，在幼红细胞成熟过程中，膜上的转铁蛋白逐渐被释放入血。当机体铁缺乏时，幼红细胞内缺铁，此时通过铁的转录后调节使转铁蛋白增多，sTfR水平明显升高。
[0005]采用重组sTfR蛋白作为免疫原，经免疫、筛选、鉴定后获得的特异性结合可溶性转铁蛋的白受体单克隆抗体，可应用于检测可溶性转铁蛋白受体含量。但是，目前国内市场尚未有特异性结合sTfR的单克隆抗体。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是提供高亲和力和高特异性的抗人可溶性转铁蛋白受体的单克隆抗体，为具有优良性质的鼠源抗体，其能够特异性识别和结合人血清中的可溶性转铁蛋白受体。
[0007]本专利技术的抗体
[0008]在一个方面，本专利技术提供了能够特异性结合可溶性转铁蛋白受体的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：
[0009](1)包含下述3个互补决定区(CDR)的重链可变区(VH)：
[0010](i)VH CDR1，其由选自下列的序列组成：SEQ ID NO.1或9所示的序列；
[0011](ii)VH CDR2，其由选自下列的序列组成：SEQ ID NO.2或10所示的序列；
[0012](iii)VH CDR3，其由选自下列的序列组成：SEQ ID NO.3或11所示的序列；
[0013]和/或，
[0014](2)包含下述3个互补决定区(CDR)的轻链可变区(VL)：
[0015](iv)VL CDR1，其由选自下列的序列组成：SEQ ID NO.4或12所示的序列；
[0016](v)VL CDR2，其由选自下列的序列组成：SEQ ID NO.5或13所示的序列；
[0017](vi)VL CDR3，其由选自下列的序列组成：SEQ ID NO.6或14所示的序列。
[0018]在最优先的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
[0019](1)SEQ ID NO.1所示的VH CDR1、SEQ ID NO.2所示的VH CDR2、SEQ ID NO.3所示的VH CDR3；SEQ ID NO.4所示的VL CDR1、SEQ ID NO.5所示的VL CDR2、SEQ ID NO.6所示的VL CDR3；或
[0020](2)SEQ ID NO.9所示的VH CDR1、SEQ ID NO.10所示的VH CDR2、SEQ ID NO.11所示的VH CDR3；SEQ ID NO.12所示的VL CDR1、SEQ ID NO.13所示的VL CDR2、SEQ ID NO.14所示的VL CDR3。
[0021]在另一个方面，本专利技术提供了能够特异性结合转铁蛋白的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，其中，
[0022]所述重链可变区包含SEQ ID NO.7或15所示的重链可变区中含有的3个CDR；并且，
[0023]所述轻链可变区包含SEQ ID NO.8或16所示的轻链可变区中含有的3个CDR。
[0024]在优选的实施方案中，所述重链可变区中含有的3个CDR，和/或所述轻链可变区中含有的3个CDR，由Chothia编号系统定义。
[0025]在优选的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
[0026](1)SEQ ID NO.7所示的重链可变区中含有的3个CDR；以及，SEQ ID NO.8所示的轻链可变区中含有的3个CDR；或
[0027](2)SEQ ID NO.15所示的重链可变区中含有的3个CDR；以及，SEQ ID NO.16所示的轻链可变区中含有的3个CDR。
[0028]在优选的实施方案中，所述重链可变区中含有的3个CDR和/或所述轻链可变区中含有的3个CDR由Chothia编号系统定义。
[0029]在另一个方面，本专利技术提供了能够特异性结合可溶性转铁蛋白受体的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：
[0030](1)重链可变区(VH)，其包含SEQ ID NO.7或15所示的氨基酸序列：
[0031]和，
[0032](2)轻链可变区(VL)，其包含SEQ ID NO.8或16所示的氨基酸序列。
[0033]在优选的实施方案中，所述的抗体或其抗原结合片段包含：
[0034](1)具有SEQ ID NO.7所示的序列的VH和具有SEQ ID NO.8所示的序列的VL；或
[0035](2)具有SEQ ID NO.15所示的序列的VH和具有SEQ ID NO.16所示的序列的VL。
[0036]在优选的实施方案中，本专利技术的抗体或其抗原结合片段进一步包含来源于哺乳动物(例如，鼠或人)免疫球蛋白的恒定区序列或其变体，所述变体与其所源自的序列相比具有一个或多个氨基酸的置换、缺失或添加。在优选的实施方案中，所述变体与其所源自的序列相比具有一个或多个氨基酸的保守置换。
[0037]在进一步的实施方案中，本专利技术的抗体是嵌合抗体、人源化抗体。在优选的实施方案中，本专利技术的抗原结合片段选自Fab、Fab
’
、(Fab
’
)2、Fv、二硫键连接的Fv、scFv、双特异抗体(diabody)和单域抗体(sdAb)。
[0038]在本专利技术中，抗体或其抗原结合片段可以包括这样的变体，所述变体与其所源自
的抗体或其抗原结合片段相比差异仅在于一个或多个(例如，至多20个、至多15个、至多10个、或至多5个氨基酸的保守置换)氨基酸残基的保守置换，或者与其所源自的抗体或其抗原结合片段具有至少85％、至少90％、至本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.抗体或其抗原结合片段，(1)包含下述3个互补决定区(CDR)的重链可变区(VH)：(i)VH CDR1，其由选自下列的序列组成：SEQ ID NO.1或9所示的序列；(ii)VH CDR2，其由选自下列的序列组成：SEQ ID NO.2或10所示的序列；(iii)VH CDR3，其由选自下列的序列组成：SEQ ID NO.3或11所示的序列；和/或，(2)包含下述3个互补决定区(CDR)的轻链可变区(VL)：(iv)VL CDR1，其由选自下列的序列组成：SEQ ID NO.4或12所示的序列；(v)VL CDR2，其由选自下列的序列组成：SEQ ID NO.5或13所示的序列；(vi)VL CDR3，其由选自下列的序列组成：SEQ ID NO.6或14所示的序列。2.权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于：包含：(1)SEQ ID NO.1所示的VH CDR1、SEQ ID NO.2所示的VH CDR2、SEQ ID NO.3所示的VH CDR3；SEQ ID NO.4所示的VL CDR1、SEQ ID NO.5所示的VL CDR2、SEQ ID NO.6所示的VL CDR3；或(2)SEQ ID NO.9所示的VH CDR1、SEQ ID NO.10所示的VH CDR2、SEQ ID NO.11所示的VH CDR3；SEQ ID NO.12所示的VL CDR1、SEQ ID NO.13所示的VL CDR2、SEQ ID NO.14所示的VL CDR3。3.权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于：所述重链可变区包含SEQ ID NO.7或15所示的重链可变区中含有的3个CDR；并且，所述轻链可变区包含SEQ ID NO.8或16所示的轻链可变区中含有的3个CDR。4.权利要求3所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于：所述重链可变区中含有的3个CDR，和/或，所述轻链可变区中含有的3个CDR，由Chothia编号系统定义。5.权利要求3所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于：所述抗体或其抗原结合片段包含：(1)SEQ ID NO.7所示的重链可变区中含有的3个CDR；以及，SEQ ID NO.8所示的轻链可变区中含有的3个CDR；或(2)SEQ ID NO.15所示的重链可变区中含有的3个CDR；以及，SEQ ID NO.16所示的轻链可变区中含有的3个CDR。6.权利要求5所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于：所述重链可变区中含有的3个CDR和/或所述轻链可变区中含有的3个CDR由Chothia编号系统定义。7.抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：(1)重链可变区(VH)，其包含SEQ ID NO.7或15所示的氨基酸序列：和，(2)轻链可变区(VL)，其包含SEQ ID NO.8或16所示的氨基酸序列。8.权利要求7所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于：所述抗体或其抗原结合片段包含：(1)具有SEQ ID NO.7所示的序列的VH和具有SEQ ID NO.8所示的序列的VL；或(2)具有SEQ ID NO.15所示的序列的VH和具有SEQ ID NO.16所示的序列的VL。9.权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于：所述抗体或其抗原结合片段
还包含：(1)人免疫球蛋白的重链恒定区(CH)或其变体，所述变体与其所源自的序列相比具有一个或多个氨基酸的置换、缺失或添加；和(2)人免疫球蛋白的轻链恒定区(CL)或其变体，所述变体与其所源自的序列相比具有至多20个氨基酸的保守置换。10.权利要求9所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于：所述重链恒定区是IgG重链恒...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴振兴，赖思慧，王剑，
申请(专利权)人：宁波赛珀生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：