包含OX40抗原结合位点的Fc结合片段制造技术

本申请涉及结合OX40的特异性结合成员。特异性结合成员包含位于该特异性结合成员的恒定结构域中的OX40抗原结合位点，并且可用于例如癌症和传染病的治疗中。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包含OX40抗原结合位点的Fc结合片段专利
本专利技术涉及结合OX40的特异性结合成员。所述特异性结合成员包含位于该特异性结合成员的恒定结构域中的OX40抗原结合位点，并且可用于例如癌症和传染病的治疗中。专利技术背景细胞信号传导是所有生物生命的重要组成部分，通常涉及与可溶性或细胞表面表达的配体相互作用的细胞表面受体。这种相互作用导致受体、配体或两者的变化。例如，配体结合可以在受体中诱导构象变化，从而使它们簇聚成二聚体或寡聚体。然后，这种簇聚效应导致细胞内信号传导途径的激活。有许多以此方式激活的受体，包括肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)的成员，例如OX40。OX40(也称为CD134和TNFRSF4)主要在活化的T细胞上表达，包括CD4+T细胞、CD8+T细胞、1型和2型T辅助细胞(Th1和Th2)和调节性T(Treg)细胞，并也在活化的自然杀伤细胞(NK)上表达。OX40及其在抗原呈递细胞(APC)上表达的配体OX40L的相互作用导致OX40受体簇聚。OX40L与其他肿瘤坏死因子(TNF)受体的大多数配体一样，以三聚体形式在细胞表面表达。OX40激活的假设模型是，OX40与细胞表面表达的三聚体OX40L的相互作用诱导了OX40受体的簇聚，该受体以单体或预形成的三聚体形式存在于细胞表面。OX40受体的这种簇聚作用激活了NFkB信号通路(Croft，2010)。NFkB信号通路的激活反过来又增加了T细胞激活、T细胞克隆扩增、T细胞分化和存活，并增强了记忆T细胞的生成。OX40/OX40L相互作用的主要作用是调节在初次免疫反应晚期中，效应(保护性或致病性)T细胞的数量的积累，从而在以后的时间再次遇到抗原时，增加在二次免疫反应中可用于反应的记忆T细胞的数量(Croft，2010)。OX40可以如上所述直接介导其对T细胞的作用，或通过增强炎症细胞因子(例如IL2和IFNγ)的产生间接介导其对T细胞的作用。OX40信号传导还可调节Treg细胞的功能，以消除其免疫抑制活性(Croft，2010年)。OX40激动剂的治疗功效已在小鼠肿瘤模型中得到证实。具体而言，已证明OX40激动剂(OX40L-Ig和抗OX40mAbOX86)在黑色素瘤、神经胶质瘤、乳腺癌和结肠癌、肉瘤、肾癌和前列腺癌的小鼠肿瘤模型中具有治疗效果(Weinberg等，2000；Morris等，2001；Ali等，2004；Sadun等，2008；Redmond等，2009)。OX40激动剂单一疗法的有效性似乎与肿瘤的免疫原性相关(Kjaergaard等，2000)，提示肿瘤特异性T细胞上的OX40表达需要肿瘤抗原充分启动，而免疫原性差的肿瘤无法提供足够的启动。抗OX40激动剂抗体的功效也正在临床试验中开展研究，既可以作为单一疗法，也可以与其他单克隆抗体(mAb)组合使用。抗OX40mAb作为单一疗法的临床测试包括对晚期癌症患者进行小鼠单克隆抗OX40mAb的I期研究，该研究显示出可接受的毒性问题，并在30例患者中有12例至少有一处转移病灶消退(Curti等，2013年)。一项针对晚期实体瘤患者的人源化抗OX40mAb(MEDI0562；MedImmune)的I期研究结果初步显示，没有剂量限制性毒性(DLT)，32例患者中有1例显示出客观反应(objectiveresponse)(Glisson等，2016)。如上所述，抗OX40mAb与其他mAb组合，用于癌症治疗也正在处于测试中。例如，抗OX40mAb与抗PD-L1mAb(度伐单抗，durvalumab)或抗CTLA4mAb(曲美木单抗，tremelimumab)的组合(临床试验.政府标识符：NCT02705482),正处于晚期实体瘤测试中。这些组合已在临床前模型中进行了测试，并显示出改善的肿瘤消退和生存率(Guo等人，2014；Redmond等人，2014)。抗OX40mAb(MOXR0916；基因泰克)作为单一疗法(NCT02219724)，以及与抗PD-L1mAb(阿特珠单抗，atezolizumab)(NCT03029832)组合用于治疗局部晚期或转移性实体瘤的临床试验正在测试中。目前正在评估人源化抗OX40mAb(GSK3174998；葛兰素史克)与抗PD-1mAb(派姆单抗，pembrolizumab)的组合，以治疗所选择的晚期或复发性实体瘤(NCT02528357)。人类抗OX40mAb(PF-04518600；辉瑞)已在治疗局部晚期或转移性癌症的临床试验中进行了测试，被证明具有良好的耐受性，并且在48例患者中有27例达到部分缓解(2例患者)或病情稳定(25例患者)(NCT02315066；El-Khoueiry等，2017)。该mAb也已与抗4-1BB激动剂mAb(PF-05082566/埃托米鲁单抗，utomilumab)(NCT02315066)和抗PD-L1mAb(阿维单抗，avelumab)(NCT02554812)组合进行测试，用于治疗局部晚期或转移性实体瘤。人IgG1抗OX40mAb(BMS-986178；百时美-施贵宝)正在与抗PD-1mAb(尼古鲁单抗，nivolumab)或抗CTLA-4mAb(伊匹单抗，ipilimumab)，或两者组合同时进行临床试验，以治疗晚期或已扩散的实体癌(NCT02737475)。专利技术说明本专利技术人进行了广泛的选择和亲和力成熟程序，以分离出一组抗体Fc区片段(FcabsTM)，其包含被工程化到其CH3结构域中的OX40抗原结合位点。Fcab分子由两条相同的多肽链组成，每条多肽链包含一个截短的铰链区，一个CH2结构域和一个CH3结构域。两条多肽链通过铰链区中的多个二硫键和CH3域中存在的疏水区连接在一起。如上所述，OX40配体与其受体OX40的初始连接引发了一系列事件，这些事件导致OX40受体簇聚，随后激活了NFkB细胞内信号传导途径，并随后引发了强效的T细胞活性。为了使治疗剂有效地实现活化，需要以模拟表面表达三聚体配体的方式将几种OX40单体桥接在一起。本专利技术人基于其结合OX40的能力分离出的抗OX40Fcab的子集，显示能够驱动T细胞表面上的OX40簇聚和活化。这是令人惊讶的，鉴于Fcab分子的恒定结构域(尤其是两个CH3结构域)之间的刚性结构和较小的分子距离，这与抗体分子在铰链区的已知柔性相反，所述柔性使得抗-OX40抗体分子的Fab臂能够移动并结合其靶标。鉴于Fcab分子恒定结构域结合位点的紧密几何结构，预计这些结合位点将无法诱导OX40分子的簇聚和激动作用，这可能最初不在T细胞表面附近。然而，与预期相反，本文所述的本专利技术人获得的结果清楚地表明，抗OX40Fcab能够在体外和体内诱导OX40的簇聚和活化。选择Fcab以高亲和力结合二聚体OX40，即预期以高亲和力结合OX40。对二聚体OX40的高亲和力被认为有利于诱导OX40簇聚和活化。如本文所指，“亲和力”可以指抗体分子与其同源抗原之间的结合相互作用的强度，通过KD测定。对于本领域技术人员而言显而易见的是，其中抗体分子能够与抗原形成多本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.结合OX40的特异性结合成员，其包含位于该特异性结合成员的CH3结构域中的OX40抗原结合位点，其中该OX40抗原结合位点包括以下特异性结合成员的第一、第二和第三序列：/n(i)FS20-22-49，分别在SEQ ID NO:43、54和71中列出；/n(ii)FS20-22-41，分别在SEQ ID NO:43、54和45中列出；/n(iii)FS20-22-47，分别在SEQ ID NO:43、54和62中列出；/n(iv)FS20-22-85，分别在SEQ ID NO:43、54和80中列出；或/n(v)FS20-22-38，分别在SEQ ID NO:43、44和45中列出；和/n其中第一、第二和第三序列分别位于特异性结合成员的CH3结构域的AB、CD和EF结构环中。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180712 GB 1811410.81.结合OX40的特异性结合成员，其包含位于该特异性结合成员的CH3结构域中的OX40抗原结合位点，其中该OX40抗原结合位点包括以下特异性结合成员的第一、第二和第三序列：
(i)FS20-22-49，分别在SEQIDNO:43、54和71中列出；
(ii)FS20-22-41，分别在SEQIDNO:43、54和45中列出；
(iii)FS20-22-47，分别在SEQIDNO:43、54和62中列出；
(iv)FS20-22-85，分别在SEQIDNO:43、54和80中列出；或
(v)FS20-22-38，分别在SEQIDNO:43、44和45中列出；和
其中第一、第二和第三序列分别位于特异性结合成员的CH3结构域的AB、CD和EF结构环中。


2.根据权利要求1所述的特异性结合成员，其中所述特异性结合成员包含分别在SEQIDNO：72、55、63、81和46中列出的特异性结合成员FS20-22-49、FS20-22-41、FS20-22-47、FS20-22-85或FS20-22-38的CH3结构域序列。


3.根据权利要求1或2所述的特异性结合成员，其中所述特异性结合成员包括下述特异性结合成员的序列：
(i)分别在SEQIDNO:74、57、65、83和48中列出的FS20-22-49、FS20-22-41、FS20-22-47、FS20-22-85或FS20-22-38；或
(ii)分别在SEQIDNO:76、59、67、85和50中列出的FS20-22-49、FS20-22-41、FS20-22-47、FS20-22-85或FS20-22-38。


4.一种结合OX40的特异性结合成员，其包含位于所述特异性结合成员的CH3结构域中的OX40抗原结合位点，其中所述OX40抗原结合位点包括下述特异性结合成员的第一、第二和第三序列：
(i)FS20-31-115，分别在SEQIDNO:122、142和133中列出；
(ii)FS20-31-108，分别在SEQIDNO:122、132和133中列出；
(iii)FS20-31-58，分别在SEQIDNO:91、92和93中列出；
(iv)FS20-31-94，分别在SEQIDNO:111、112和113中列出；
(v)FS20-31-102，分别在SEQIDNO:122、123和102中列出；或
(vi)FS20-31-66，分别在SEQIDNO：91、92和102中列出；和
其中第一、第二和第三序列分别位于特异性结合成员的CH3结构域的AB、CD和EF结构环中。


5.根据权利要求2或4所述的特异性结合成员，其中所述特异性结合成员包括如下所述的特异性结合成员FS20-31-115、FS20-31-108、FS20-31-58、FS20-31-94、FS20-31-102或FS20-31-66的CH3结构域序列，分别在SEQIDNO:143、134、94、114、124和103中列出。


6.根据权利要求4或5中任一项所述的特异性结合成员，其中所述特异性结合成员包括下述特异性结合成员的序列：
(i)分别在SEQIDNO:145...

【专利技术属性】
技术研发人员：M·图纳，M·加斯帕，S·乌伦布罗伊奇，K·埃弗雷特，D·巴菲特，
申请(专利权)人：F星贝塔有限公司，
类型：发明
国别省市：英国;GB