用于医疗用途的变体天冬酰胺酶多肽制造技术

提供了涉及具有增强的稳定性、药效学和/或降低的免疫原性的变体天冬酰胺酶多肽的各种实施方案。所述变体天冬酰胺酶多肽可以在包括人、犬科动物、猫科动物和马科动物的哺乳动物中用作治疗剂。物中用作治疗剂。物中用作治疗剂。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于医疗用途的变体天冬酰胺酶多肽
相关申请的交叉引用
[0001]本申请要求2018年4月19日提交的美国临时申请号62/660,189的优先权权益，将所述临时申请出于任何目的通过引用以其整体并入本文。序列表
[0002]本申请是与电子格式的序列表一起提交的。序列表以2019年4月15日创建、大小为42Kb的名为2019-04-15_01157-0013-00PCT_Seq_List_ST25.txt的文件提供。将在电子格式的序列表中的信息通过引用以其整体并入本文。


[0003]本公开文本涉及具有降低的免疫原性和增强的稳定性和药代动力学的变体天冬酰胺酶多肽，以及产生和使用所述变体天冬酰胺酶多肽的方法，例如，用于治疗人的急性成淋巴细胞性白血病和伴侣动物的淋巴瘤。

技术介绍

[0004]L-天冬酰胺酶(在本文中也称为天冬酰胺酶)的天然形式是由相同的亚基(每个亚基大约35kDa)构成的细菌酶，其催化L-天冬酰胺转化为天冬氨酸和氨。大肠杆菌(Escherichia coli或E.coli)天冬酰胺酶可以是同二聚体或同四聚体，而菊欧氏杆菌(Erwinia chrysanthemi或E.chrysanthemi)(也称为达旦迪基氏菌(Dickeya dadantii)、D.dadantii、菊迪基氏菌(Dickeya chrysanthemi)、D.chrysanthemi等)天冬酰胺酶是四聚体。天冬酰胺酶用于治疗患有急性成淋巴细胞性白血病(ALL)的患者以及患有淋巴瘤的狗和猫。一些白血病细胞不能合成天冬酰胺，并且依赖循环天冬酰胺来存活。作为治疗剂，天冬酰胺酶可以剥夺此类细胞的循环天冬酰胺，从而导致细胞死亡。正常细胞受天冬酰胺酶的影响较小，因为它们能够合成天冬酰胺。
[0005]遗憾的是，对天冬酰胺酶的超敏反应是普遍报道的不良事件，并且经常需要终止天冬酰胺酶治疗。当以治疗量引入人体时，天然大肠杆菌天冬酰胺酶可能具有免疫原性。针对天冬酰胺酶的抗体可以提高消除速率，并且中和抗体(如果存在的话)可以限制所述酶的有效性。

技术实现思路

实施方案1.一种变体菊欧氏杆菌(E.chrysanthemi)天冬酰胺酶多肽，其包含至少一个半胱氨酸取代。实施方案2.一种包含至少一个PEG可缀合氨基酸取代的变体菊欧氏杆菌天冬酰胺酶多肽，其中与对应的野生型菊欧氏杆菌天冬酰胺酶多肽相比，所述变体多肽在与PEG缀合时免疫原性或抗原性较低。实施方案3.一种变体菊欧氏杆菌天冬酰胺酶多肽，其在对应的野生型菊欧氏杆菌天冬酰胺酶多肽的免疫原性或抗原性位点处的或者在空间上附近的氨基酸位置处包含至少一
个PEG可缀合氨基酸取代。实施方案4.根据实施方案1至3中任一项所述的变体菊欧氏杆菌天冬酰胺酶多肽，其中所述至少一个半胱氨酸或所述至少一个PEG可缀合氨基酸是表面暴露的。实施方案5.根据实施方案3或4所述的变体菊欧氏杆菌天冬酰胺酶多肽，其中所述野生型天冬酰胺酶多肽中的免疫原性或抗原性位点在人或伴侣动物物种中引发免疫应答。实施方案6.根据实施方案5所述的变体菊欧氏杆菌天冬酰胺酶多肽，其中所述伴侣动物物种是犬科动物、猫科动物或马科动物。实施方案7.一种包含至少一个氨基酸取代的变体菊欧氏杆菌天冬酰胺酶多肽，其中被取代的氨基酸是表面暴露的。实施方案8.根据前述实施方案中任一项所述的变体菊欧氏杆菌天冬酰胺酶多肽，其中所述变体多肽缺少前导序列。实施方案9.根据前述实施方案中任一项所述的变体菊欧氏杆菌天冬酰胺酶多肽，其中所述至少一个半胱氨酸、所述至少一个氨基酸或所述至少一个PEG可缀合氨基酸的30％或更多是表面暴露的，如由标准蛋白质建模软件所确定的。实施方案10.根据前述实施方案中任一项所述的变体菊欧氏杆菌天冬酰胺酶多肽，其中所述至少一个半胱氨酸、所述至少一个氨基酸或所述至少一个PEG可缀合氨基酸的35％或更多、40％或更多、45％或更多、50％或更多、55％或更多、60％或更多、65％或更多、70％或更多、75％或更多、80％或更多、85％或更多、90％或更多或者95％或更多是表面暴露的，如由标准蛋白质建模软件所确定的。实施方案11.根据实施方案2至10中任一项所述的变体菊欧氏杆菌天冬酰胺酶多肽，其中所述至少一个PEG可缀合氨基酸或所述至少一个氨基酸是半胱氨酸、赖氨酸或PEG可缀合氨基酸衍生物。实施方案12.根据前述实施方案中任一项所述的变体菊欧氏杆菌天冬酰胺酶多肽，其中所述至少一个半胱氨酸、所述至少一个氨基酸或所述至少一个PEG可缀合氨基酸距所述免疫原性或抗原性位点35埃或更小，如由三维蛋白质结构分析所确定的。实施方案13.根据前述实施方案中任一项所述的变体菊欧氏杆菌天冬酰胺酶多肽，其中所述至少一个半胱氨酸、所述至少一个氨基酸或所述至少一个PEG可缀合氨基酸距所述免疫原性或抗原性位点或更小、或更小、或更小、或更小、或更小或者或更小，如由三维蛋白质结构分析所确定的。实施方案14.根据前述实施方案中任一项所述的变体菊欧氏杆菌天冬酰胺酶多肽，其包含与野生型天冬酰胺酶氨基酸序列诸如SEQ ID NO:2至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的氨基酸序列。实施方案15.根据实施方案2至6和8至14中任一项所述的变体菊欧氏杆菌天冬酰胺酶多肽，其中所述野生型菊欧氏杆菌天冬酰胺酶多肽包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列。实施方案16.根据实施方案3至6和8至15中任一项所述的变体菊欧氏杆菌天冬酰胺酶多肽，其中所述免疫原性或抗原性位点对应于SEQ ID NO:2的氨基酸位置41、72、265或288。实施方案17.根据前述实施方案中任一项所述的变体菊欧氏杆菌天冬酰胺酶多肽，其中所述至少一个半胱氨酸、至少一个氨基酸取代或所述至少一个PEG可缀合氨基酸取代位
于对应于选自SEQ ID NO:2的位置3、4、17、26、37、38、41、42、44、45、47、48、51、53、54、55、56、59、60、68、72、79、82、83、84、85、87、110、112、123、124、125、127、180、190、191、192、198、202、205、206、208、210、212、213、215、216、219、231、239、240、241、243、257、260、261、264、265、267、268、269、270、280、286、287、288、289、312、313、315、316、317、318和322的位置的位置处。实施方案18.根据实施方案2至17中任一项所述的变体菊欧氏杆菌天冬酰胺酶多肽，其中所述至少一个PEG可缀合氨基酸取代或所述至少一个氨基酸取代是位于对应于选自SEQ ID NO:2的位置3、4、17、26、37、38、41、42、44、45、47、48、51、53、54、55、56、59、60、68、72、79、82、83、84、85、87、110、112、123、124、125、127、180、190、191、192、198、202、本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种变体菊欧氏杆菌(E.chrysanthemi)天冬酰胺酶多肽，其包含至少一个半胱氨酸取代。2.一种包含至少一个PEG可缀合氨基酸取代的变体菊欧氏杆菌天冬酰胺酶多肽，其中与对应的野生型菊欧氏杆菌天冬酰胺酶多肽相比，所述变体多肽在与PEG缀合时免疫原性或抗原性较低。3.一种变体菊欧氏杆菌天冬酰胺酶多肽，其在对应的野生型菊欧氏杆菌天冬酰胺酶多肽的免疫原性或抗原性位点处的或者在空间上附近的氨基酸位置处包含至少一个PEG可缀合氨基酸取代。4.根据权利要求1至3中任一项所述的变体菊欧氏杆菌天冬酰胺酶多肽，其中所述至少一个半胱氨酸或所述至少一个PEG可缀合氨基酸是表面暴露的。5.根据权利要求3或4所述的变体菊欧氏杆菌天冬酰胺酶多肽，其中所述野生型天冬酰胺酶多肽中的免疫原性或抗原性位点在人或伴侣动物物种中引发免疫应答。6.根据权利要求5所述的变体菊欧氏杆菌天冬酰胺酶多肽，其中所述伴侣动物物种是犬科动物、猫科动物或马科动物。7.一种包含至少一个氨基酸取代的变体菊欧氏杆菌天冬酰胺酶多肽，其中被取代的氨基酸是表面暴露的。8.根据前述权利要求中任一项所述的变体菊欧氏杆菌天冬酰胺酶多肽，其中所述变体多肽缺少前导序列。9.根据前述权利要求中任一项所述的变体菊欧氏杆菌天冬酰胺酶多肽，其中所述至少一个半胱氨酸、所述至少一个氨基酸或所述至少一个PEG可缀合氨基酸的30％或更多是表面暴露的，如由标准蛋白质建模软件所确定的。10.根据前述权利要求中任一项所述的变体菊欧氏杆菌天冬酰胺酶多肽，其中所述至少一个半胱氨酸、所述至少一个氨基酸或所述至少一个PEG可缀合氨基酸的35％或更多、40％或更多、45％或更多、50％或更多、55％或更多、60％或更多、65％或更多、70％或更多、75％或更多、80％或更多、85％或更多、90％或更多或者95％或更多是表面暴露的，如由标准蛋白质建模软件所确定的。11.根据权利要求2至10中任一项所述的变体菊欧氏杆菌天冬酰胺酶多肽，其中所述至少一个PEG可缀合氨基酸或所述至少一个氨基酸是半胱氨酸、赖氨酸或PEG可缀合氨基酸衍生物。12.根据前述权利要求中任一项所述的变体菊欧氏杆菌天冬酰胺酶多肽，其中所述至少一个半胱氨酸、所述至少一个氨基酸或所述至少一个PEG可缀合氨基酸距所述免疫原性或抗原性位点或更小，如由三维蛋白质结构分析所确定的。13.根据前述权利要求中任一项所述的变体菊欧氏杆菌天冬酰胺酶多肽，其中所述至少一个半胱氨酸、所述至少一个氨基酸或所述至少一个PEG可缀合氨基酸距所述免疫原性或抗原性位点或更小、或更小、或更小、或更小、或更小、或更小或者或更小，如由三维蛋白质结构分析所确定的。14.根据前述权利要求中任一项所述的变体菊欧氏杆菌天冬酰胺酶多肽，其包含与野生型天冬酰胺酶氨基酸序列诸如SEQ ID NO:2至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至
少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的氨基酸序列。15.根据权利要求2至6和8至14中任一项所述的变体菊欧氏杆菌天冬酰胺酶多肽，其中所述野生型菊欧氏杆菌天冬酰胺酶多肽包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列。16.根据权利要求3至6和8至15中任一项所述的变体菊欧氏杆菌天冬酰胺酶多肽，其中所述免疫原性或抗原性位点对应于SEQ ID NO:2的氨基酸位置41、72、265或288。17.根据前述权利要求中任一项所述的变体菊欧氏杆菌天冬酰胺酶多肽，其中所述至少一个半胱氨酸、至少一个氨基酸取代或所述至少一个PEG可缀合氨基酸取代位于对应于选自SEQ ID NO:2的位置3、4、17、26、37、38、41、42、44、45、47、48、51、53、54、55、56、59、60、68、72、79、82、83、84、85、87、110、112、123、124、125、127、180、190、191、192、198、202、205、206、208、210、212、213、215、216、219、231、239、240、241、243、257、260、261、264、265、267、268、269、270、280、286、287、288、289、312、313、315、316、317、318和322的位置的位置处。18.根据权利要求2至17中任一项所述的变体菊欧氏杆菌天冬酰胺酶多肽，其中所述至少一个PEG可缀合氨基酸取代或所述至少一个氨基酸取代是位于对应于选自SEQ ID NO:2的位置3、4、17、26、37、38、41、42、44、45、47、48、51、53、54、55、56、59、60、68、72、79、82、83、84、85、87、110、112、123、124、125、127、180、190、191、192、198、202、205、206、208、210、212、213、215、216、219、231、239、240、241、243、257、260、261、264、265、267、268、269、270、280、286、287、288、289、312、313、315、316、317、318和322的位置的位置处的半胱氨酸。19.根据权利要求2至18中任一项所述的变体菊欧氏杆菌天冬酰胺酶多肽，其中所述至少一个氨基酸取代或所述至少一个PEG可缀合氨基酸取代是在对应于选自SEQ ID NO:2的位置4、17、26、37、38、41、42、44、45、51、53、54、55、56、59、60、68、79、82、83、84、85、87、112、123、124、125、127、180、190、191、192、198、202、205、206、208、210、212、213、215、216、231、239、240、241、257、260、261、264、267、268、270、280、286、287、288、289、312、313、315、316、317和322的一个或多个氨基酸位置的位置处的赖氨酸。20.根据前述权利要求中任一项所述的变体菊欧氏杆菌天冬酰胺酶多肽，其包含SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:9的氨基酸序列。21.根据前述权利要求中任一项所述的变体菊欧氏杆菌天冬酰胺酶多肽，其中所述变体菊欧氏杆菌天冬酰胺酶多肽被修饰，诸如唾液酸化或聚乙二醇化。22.一种四聚体，其包含根据前述权利要求中任一项所述的变体菊欧氏杆菌天冬酰胺酶多肽。23.一种变体天冬酰胺酶多肽，其在对应的野生型天冬酰胺酶多肽的未配对半胱氨酸残基处包含至少一个氨基酸取代，其中所述至少一个氨基酸取代包含除半胱氨酸之外的任何氨基酸。24.根据权利要求23所述的变体天冬酰胺酶多肽，其在对应的野生型天冬酰胺酶多肽的免疫原性或抗原性位点处的或者在空间上附近的氨基酸位置处包含至少一个半胱氨酸取代或在所述氨基酸位置处包含至少一对半胱氨酸取代。25.一种变体天冬酰胺酶多肽，其在氨基酸位置处包含至少一个半胱氨酸取代或至少一对半胱氨酸取代，其中与对应的野生型天冬酰胺酶多肽相比，所述变体多肽在与PEG缀合时免疫原性或抗原性较低。
26.一种变体天冬酰胺酶多肽，其在对应的野生型天冬酰胺酶多肽的免疫原性或抗原性位点处的或者在空间上附近的氨基酸位置处包含...

【专利技术属性】
技术研发人员：H，
申请(专利权)人：金德雷德生物科学股份有限公司，
类型：发明
国别省市：