生产目标蛋白质的宿主细胞制造技术

一种经改造的真核宿主细胞，以产生异源目标蛋白质(POI)，该真核宿主细胞经过基因修饰，以减少三种不同内源宿主细胞蛋白质(HCP)中至少一种的产生，以及它在生产POI的方法中的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】生产目标蛋白质的宿主细胞
本专利技术涉及在真核宿主细胞中的蛋白质生产，该宿主细胞经改造，以减少宿主细胞培养物中的杂质。
技术介绍
真核细胞培养物中产生的蛋白质作为诊断剂和治疗剂已变得越来越重要。基于此目的，需要对细胞进行改造和/或选择，以产生异常高水平的目标的重组或异源的蛋白质。细胞培养条件的优化对于重组或异源的蛋白质的成功商业化生产很重要。从宿主细胞释放的副产物作为宿主细胞蛋白质(HCP)，并在培养物中积累，给重组或异源蛋白质的纯化带来困难，或者可能对产品功效或患者安全性构成风险。除哺乳动物宿主细胞外，酵母和丝状真菌通常被用作生物制药的蛋白质、以及大宗化学品(bulkchemicals)的生产宿主。甲基营养型酵母(例如巴斯德毕赤酵母(Pichiapastoris))，因有效分泌异源蛋白质而闻名。巴斯德毕赤氏酵母已被重新分类为一个新的属Komagataella，并分为三个物种：K.pastoris、K.phaffii和K.pseudopastoris。通常地，用于生物技术应用的菌株属于两个建议的物种，K.pastoris和K.phaff本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种经改造以产生异源目标蛋白质(POI)的真核宿主细胞，对所述真核宿主细胞进行基因修饰，以减少至少一种内源宿主细胞蛋白质(HCP)的产生，所述内源宿主细胞蛋白质(HCP)选自由第一HCP(HCP1)、第二HCP(HCP2)和第三HCP(HCP3)组成的组，其中/na)如果宿主细胞是Komagataella phaffii，则HCP1包含被识别为SEQ ID NO:1的氨基酸序列，或者如果是其他物种，则其为宿主细胞内源的同源序列；/nb)如果宿主细胞是Komagataella phaffii，则HCP2包含被识别为SEQ ID NO:3的氨基酸序列，或者如果是其他物种，则其为宿主细胞内源的同...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180212 EP 18156329.71.一种经改造以产生异源目标蛋白质(POI)的真核宿主细胞，对所述真核宿主细胞进行基因修饰，以减少至少一种内源宿主细胞蛋白质(HCP)的产生，所述内源宿主细胞蛋白质(HCP)选自由第一HCP(HCP1)、第二HCP(HCP2)和第三HCP(HCP3)组成的组，其中
a)如果宿主细胞是Komagataellaphaffii，则HCP1包含被识别为SEQIDNO:1的氨基酸序列，或者如果是其他物种，则其为宿主细胞内源的同源序列；
b)如果宿主细胞是Komagataellaphaffii，则HCP2包含被识别为SEQIDNO:3的氨基酸序列，或者如果是其他物种，则其为宿主细胞内源的同源序列；以及
c)如果宿主细胞是Komagataellaphaffii，则HCP3包含被识别为SEQIDNO:5的氨基酸序列，或者如果是其他物种，则其为宿主细胞内源的同源序列。


2.根据权利要求1所述宿主细胞，其中所述至少一个HCP是HCP1，并且可选地，是HCP2和/或HCP3。


3.根据权利要求1或2所述宿主细胞，所述宿主细胞被进一步基因修饰，以减少另外的HCP的产生，所述HCP为HCP4，其中
a)如果宿主细胞是Komagataellaphaffii，则HCP4包含被识别为SEQIDNO:7的氨基酸序列，或者如果是其他物种，则其为宿主细胞内源的同源序列。


4.根据权利要求1-3中任一项所述宿主细胞，其中每一个同源序列的特征在于，与相应氨基酸序列具有至少50％的序列同一性。


5.根据权利要求1-4中任一项所述宿主细胞，其中通过宿主细胞基因组的一种或多种基因修饰，对宿主细胞进行基因修饰，所述基因修饰包括中断、取代、缺失或敲除(i)一种或多种内源多核苷酸或其中一部分；或(ii)表达控制序列，优选地，其中所述表达控制序列选自由启动子、核糖体结合位点、转录或翻译起始和终止序列、增强子和激活子序列组成的组。


6.根据权利要求5所述宿主细胞，其中通过所述一种或多种基因修饰，敲除编码所述至少一种HCP中的任一种的基因。


7.根据权利要求1至6中任一项所述宿主细胞，与未经所述修饰的宿主细胞相比，所述宿主细胞被基因修饰，以使得所述至少一种HCP中的任一种的量减少至少50％(mol/mol)，优选地，通过敲除编码所述至少一种HCP中的任一种的基因。


8.根据权利要求1至7中任一项所述宿主细胞，所述宿主细胞包含表达盒，所述表达盒包含与编码所述POI的核苷酸序列可操作地连接的一个或多个调控核酸序列，其中所述一个或多个可操作连接的序列与POI编码序列不是天然地相关。


9.根据权利要求1至8中任一项所述宿主细胞，其中所述POI是肽或蛋白质，所述肽或蛋白质选自由抗原结合蛋白质、治疗性蛋白质、酶、肽、蛋白质抗生素、毒素融合蛋白质、...

【专利技术属性】
技术研发人员：K·克拉斯，J·格拉哈姆，S·霍斯维亚克，C·基齐亚克，
申请(专利权)人：龙沙有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH