生产具有降低宿主细胞蛋白水平的重组蛋白制造技术

用于生产具有低残余宿主细胞蛋白水平的重组蛋白的方法。所述方法包括利用其中用纯化标签标记特定宿主细胞蛋白的工程改造的宿主细胞系，其中所述纯化标签可用于从所述重组蛋白除去那些特定的宿主细胞蛋白。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】生产具有降低宿主细胞蛋白水平的重组蛋白领域本公开涉及用于生产具有降低宿主细胞蛋白污染水平的重组蛋白的方法。具体而言，所述方法包括在经工程改造以具有标记的宿主细胞蛋白的宿主细胞系中表达重组蛋白，其中所述标记的宿主细胞蛋白用纯化标签标记，使得所述纯化标签可用于在纯化所述重组蛋白期间从所述重组蛋白除去所述标记的宿主细胞蛋白。背景在重组蛋白生产期间，宿主细胞共同产生与正常细胞功能(诸如细胞生长、增殖、存活、基因转录、蛋白合成等)相关的内源蛋白。由于细胞死亡/凋亡/裂解，内源宿主细胞蛋白也可以被释放至细胞培养基中。在重组蛋白生产期间共表达的所有内源蛋白都称为宿主细胞蛋白(HCP)。HCP构成重组治疗性蛋白(诸如单克隆抗体)中存在的过程相关的杂质的主要部分。这些HCP杂质可以显著影响治疗性蛋白的效力和稳定性，以及引起免疫原性。此外，与治疗性蛋白共纯化的HCP可能难以除去，导致大量下游处理和生产成本增加。例如，已经估计，单克隆抗体生产成本的约80%是由于下游纯化过程。此外，为了满足法规要求，制造商必须表明最终产品中的宿主细胞蛋白的清除率达到1至100ppm的范围内的水本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于生产具有降低宿主细胞蛋白污染水平的重组蛋白产物的方法，所述方法包括：/na) 在经工程改造以具有至少一种标记的宿主细胞蛋白的哺乳动物细胞系中表达重组蛋白，其中所述至少一种标记的宿主细胞蛋白用至少一种纯化标签标记，且其中所述至少一种标记的宿主细胞蛋白功能上等同于未标记的亲本宿主细胞蛋白；和/nb) 在纯化所述重组蛋白以生产所述重组蛋白产物期间，使用所述至少一种标记的宿主细胞蛋白的至少一种纯化标签以从所述重组蛋白除去所述至少一种标记的宿主细胞蛋白，其中所述重组蛋白产物的残余宿主细胞蛋白水平低于由非工程改造的亲本哺乳动物细胞系产生的蛋白产物中的残余宿主细胞蛋白水平。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180504 US 62/6671981.用于生产具有降低宿主细胞蛋白污染水平的重组蛋白产物的方法，所述方法包括：
a)在经工程改造以具有至少一种标记的宿主细胞蛋白的哺乳动物细胞系中表达重组蛋白，其中所述至少一种标记的宿主细胞蛋白用至少一种纯化标签标记，且其中所述至少一种标记的宿主细胞蛋白功能上等同于未标记的亲本宿主细胞蛋白；和
b)在纯化所述重组蛋白以生产所述重组蛋白产物期间，使用所述至少一种标记的宿主细胞蛋白的至少一种纯化标签以从所述重组蛋白除去所述至少一种标记的宿主细胞蛋白，其中所述重组蛋白产物的残余宿主细胞蛋白水平低于由非工程改造的亲本哺乳动物细胞系产生的蛋白产物中的残余宿主细胞蛋白水平。


2.权利要求1的方法，其中所述至少一种标记的蛋白是必需蛋白。


3.权利要求2的方法，其中所述必需蛋白选自簇蛋白、基质金属蛋白酶-9、基质金属蛋白酶-14、基质金属蛋白酶-19、次黄嘌呤磷酸核糖基转移酶、分泌的酸性且富含半胱氨酸的蛋白、硫氧还蛋白或硫氧还蛋白还原酶。


4.权利要求1至3中任一项的方法，其中所述至少一种纯化标签选自荧光蛋白、His标签、多(His)标签、FLAG标签、Halo标签、AcV5标签、AU1标签、AU5标签、生物素羧基载体蛋白、钙调蛋白结合蛋白、几丁质结合结构域、E标签、E2标签、ECS标签、eXact标签、Glu-Glu标签、谷胱甘肽-S-转移酶、HA标签、HSV标签、KT3标签、麦芽糖结合蛋白、MAP标签、Myc标签、NE标签、NusA标签、PDZ标签、S标签、S1标签、SBP标签、Softag1标签、Softag3标签、Spot标签、Strep标签、SUMO标签、T7标签、串联亲和纯化(TAP)标签、V5标签、VSV-G标签或Xa标签。


5.权利要求1至4中任一项的方法，其中所述哺乳动物细胞系被工程改造以具有至少一个编码所述纯化标签的序列，其符合读框地整合至编码所述至少一种宿主细胞蛋白的染色体序列中。


6.权利要求5的方法，其中所述至少一个编码所述纯化标签的序列位于编码所述至少一种宿主细胞蛋白的染色体序列的5’末端和/或3’末端。


7.权利要求5或6的方法，其中使用靶向核酸内切酶介导的基因组修饰技术来将所述至少一个编码所述纯化标签的序列整合至所述染色体序列中。


8.权利要求7的方法，其中所述靶向核酸内切酶是CRISPR核糖核蛋白复合物或一对锌指核酸酶。


9.权利要求1至8中任一项的方法，其中所述哺乳动物细胞系是选自人胚胎肾细胞293(HEK293)细胞系、HT-1080人结缔组织系或PER.C6人胚胎视网膜细胞系的人细胞系。


10.权利要求1至8中任一项的方法，其中所述哺乳动物宿主细胞系是选自中国仓鼠卵巢(CHO)细胞系、幼仓鼠肾(BHK)细胞系、NS0小鼠骨髓瘤细胞系、Sp2/0小鼠骨髓瘤细胞系、C127小鼠乳腺细胞系或Vero非洲绿猴肾细胞系的非人细胞系。


11.权利要求1至8中任一项的方法，其中所述哺乳动物细胞系是CHO细胞系。


12.权利要求1至11中任一项的方法，其中所述重组蛋白选自抗体、抗体片段、疫苗、生长因子、细胞因子、激素或凝结因子。


13.权利要求1至12中任一项的方法，其中在纯化步骤期间通过亲和色谱、免疫亲和色谱、免疫沉淀或其组合从所述重组蛋白除去所述至少一种标记的宿主细胞...

【专利技术属性】
技术研发人员：T·博尔格舒尔特，J·马斯卡伦哈斯，M·齐尔曼，F·斯沃茨维尔德，K·凯泽，
申请(专利权)人：西格马奥尔德里奇有限责任公司，
类型：发明
国别省市：美国;US