一种高通量基因的编辑方法技术

本发明专利技术提供了一种高通量基因的编辑方法，属于基因工程技术领域；将标签序列1～11分别插入到pRGEB32载体的T‑DNA中，得到高通量基因敲除载体p32A1～p32A11；将tRNA和ccdB基因插入到pRGEB32以及p32A1～p32A11载体中，得到提高克隆准确率的基因敲除载体p32B0～p32B11。使用本发明专利技术提供的高通量基因敲除载体在水稻中进行大规模的基因敲除时，能够快速获得特定基因编辑的转基因株系，无需测序，仅通过PCR和PAGE的方法即可确定转基因株系的靶基因，大大缩减工作量和工作时间，靶位点编辑的效率达92.5％，双等位基因突变效率达82.1％。

【技术实现步骤摘要】
一种高通量基因的编辑方法
本专利技术属于基因工程
，尤其涉及一种高通量基因的编辑方法。
技术介绍
随着测序技术的快速发展，从低等微生物到高等动植物，越来越多的物种完成了全基因的测序，如何系统地解析基因组上各个基因位点在不同生物学过程中的功能则是生命科学研究更大的挑战。通过敲除目标基因，使其丧失功能，是目前研究特定基因功能最为常用的方法之一。近几年，CRISPR/Cas9基因组编辑技术出现，为分子生物学的研究提供了强大的技术支持。CRISPR/Cas(ClusteredRegularlyInterspacedShortPalindromicRepeats–CRISPRassociatednuclease)系统是存在于细菌和古细菌中的一种适应性免疫机制，能够特异地识别并降解入侵的噬菌体和外源质粒的DNA。其中来自于化脓链球菌Streptococcuspyogenes的Ⅱ型CRISPR/Cas9系统，被成功应用于许多物种的基因组编辑。CRISPR/Cas9基因组编辑系统由一条单链向导RNA-sgRNA和核酸酶Cas9蛋白两部分组成，sg本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高通量基因的编辑方法，其特征在于，包括以下步骤：/n1)将标签序列1～11分别插入到pRGEB32载体的T-DNA中，得到p32A1～p32A11载体；/n所述标签序列1～11的核苷酸序列依次如SEQ ID No.1～11所示；/n2)将tRNA片段和ccdB片段插入到步骤1)得到的pRGEB32载体和p32A1～p32A11载体中，得到基因敲除载体p32B0～p32B11；/n所述tRNA片段的核苷酸序列如SEQ ID No.12所示；/n所述ccdB片段的核苷酸序列如SEQ ID No.13所示；/n所述基因敲除载体p32B0是tRNA片段和ccdB片段插入到pRGEB32载体中得...

【技术特征摘要】
1.一种高通量基因的编辑方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)将标签序列1～11分别插入到pRGEB32载体的T-DNA中，得到p32A1～p32A11载体；
所述标签序列1～11的核苷酸序列依次如SEQIDNo.1～11所示；
2)将tRNA片段和ccdB片段插入到步骤1)得到的pRGEB32载体和p32A1～p32A11载体中，得到基因敲除载体p32B0～p32B11；
所述tRNA片段的核苷酸序列如SEQIDNo.12所示；
所述ccdB片段的核苷酸序列如SEQIDNo.13所示；
所述基因敲除载体p32B0是tRNA片段和ccdB片段插入到pRGEB32载体中得到；
所述基因敲除载体p32B1～p32B11是tRNA片段和ccdB片段依次插入到p32A1～p32A11载体中得到；
3)将所述步骤2)得到的CRISPR系统的基因敲除载体p32B0～p32B11进行高通量基因编辑。

【专利技术属性】
技术研发人员：谢卡斌，陈凯园，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42