一种转基因玉米品系鉴定阳性质粒分子制造技术

本发明专利技术公开了一种转基因玉米品系鉴定阳性质粒分子。所述质粒分子为pYMID1‑1905和pYMID2‑1905，各含有10种转化体特异性序列，主要针对种获得安全证书转化体检测的标准质粒分子，由于Bt11×GA21属于复合事件，可分别使用Bt11和GA21单独的检测方法和质粒分子进行检测，该质粒分子可用作玉米转化体实时荧光PCR检测的阳性对照，也可作为普通PCR检测的阳性对照。

【技术实现步骤摘要】
一种转基因玉米品系鉴定阳性质粒分子
本专利技术属于转基因检测
，具体涉及一种转基因玉米品系鉴定阳性质粒分子。
技术介绍
玉米是我国重要的粮食和饲料用作物，在我国每年大约80％的玉米用于饲料行业，转基因玉米作为四大转基因作物之一，2018年全球转基因玉米种植面积已达5970万公顷，其中美国、巴西、阿根廷等国种植面积最大，占据全世界转基因玉米种植总面积的一半以上。从2004年起我国每年玉米的进口配额有720万吨，虽然总量不是非常大，但其仍然存在引入非授权品系的巨大风险；同时我国也是玉米种植大国，近年来玉米年产量均在2亿吨以上，巨大的市场需求使我国的转基因玉米研究非常活跃，不断有新品系进入田间试验阶段；同时还不能排除有个别组织或个人正在非法研制非授权的转基因玉米品系。由于转基因产品存在潜在的环境和食用安全风险，一旦发生非授权转基因作物的非法扩散事件，将扰乱正常贸易秩序，在消费者中引发恐慌情绪，对国民经济、生活产生一系列的恶劣影响。国际上关于非授权转基因作物的报道屡见不鲜，因此我国急需建立针对非授权转基因玉米的检测监管技术体系。经过十余年的转基因检测技术体系建设，我国已建立起完善的转基因玉米检测技术标准体系，但受原材料供应等方面的限制，用于日常检测的标准物质或标准样品的研制严重落后于检测方法的开发，导致在转基因检测过程中经常面临缺乏标准物质或标准样品的难题。通过研制转基因玉米检测的标准样品，包括筛查检测用标准样品和品系鉴定用标准样品，将进一步完善我国的转基因检测和监测技术标准体系，有效发挥标准方法在转基因生物安全监管中的作用。通过研制、使用转基因玉米筛查、品系鉴定阳性质粒分子和与之配套的检测方法，将大大提高我国对非授权转基因玉米产品非法扩散的检测、监测水平，为我国的转基因生物安全监管提供有效的技术支撑。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种转基因玉米品系鉴定阳性质粒分子。一种转基因玉米品系鉴定阳性质粒分子，所述质粒分子为pYMID1-1905和pYMID2-1905；所述pYMID1-1905是将转化体特异性序列3272、转化体特异性序列4114、转化体特异性序列5307、转化体特异性序列59122、转化体特异性序列Bt11、转化体特异性序列Bt176、转化体特异性序列BVLA430101、转化体特异性序列DAS-40278-9、转化体特异性序列GA21、转化体特异性序列MON87427和玉米内标准基因zSSIIb构建到pUC18质粒载体上得到；所述pYMID2-1905是将转化体特异性序列MON87460、转化体特异性序列MON89034、转化体特异性序列MIR604、转化体特异性序列MIR162、转化体特异性序列MON810、转化体特异性序列MON88017、转化体特异性序列MON863、转化体特异性序列NK603、转化体特异性序列T25、转化体特异性序列TC1507和玉米内标准基因zSSIIb构建到pUC18质粒载体上得到。所述转化体特异性序列3272、转化体特异性序列4114、转化体特异性序列5307、转化体特异性序列59122、转化体特异性序列Bt11、转化体特异性序列Bt176、转化体特异性序列BVLA430101、转化体特异性序列DAS-40278-9、转化体特异性序列GA21、转化体特异性序列MON87427的核苷酸序列分别如序列表SEQIDNO：1-SEQIDNO：10所示。所述转化体特异性序列MON87460、转化体特异性序列MON89034、转化体特异性序列MIR604、转化体特异性序列MIR162、转化体特异性序列MON810、转化体特异性序列MON88017、转化体特异性序列MON863、转化体特异性序列NK603、转化体特异性序列T25、转化体特异性序列TC1507的核苷酸序列分别如序列表SEQIDNO：11-SEQIDNO：20所示。所述玉米内标准基因zSSIIb的核苷酸序列分别如序列表SEQIDNO：21所示。所述检测材料转基因玉米包括转基因玉米作物和制品。扩增上述转化体特异性序列3272、转化体特异性序列4114、转化体特异性序列5307、转化体特异性序列59122、转化体特异性序列Bt11、转化体特异性序列Bt176、转化体特异性序列BVLA430101、转化体特异性序列DAS-40278-9、转化体特异性序列GA21、转化体特异性序列MON87427、转化体特异性序列MON87460、转化体特异性序列MON89034、转化体特异性序列MIR604、转化体特异性序列MIR162、转化体特异性序列MON810、转化体特异性序列MON88017、转化体特异性序列MON863、转化体特异性序列NK603、转化体特异性序列T25、转化体特异性序列TC1507和玉米内标准基因zSSIIb的引物及探针。本专利技术的有益效果：本专利技术的质粒分子包括2个，各含有10种转化体特异性序列，主要针对20种获得安全证书转化体检测的标准质粒分子，由于Bt11×GA21属于复合事件，可分别使用Bt11和GA21单独的检测方法和质粒分子进行检测，该质粒分子可用作玉米转化体实时荧光PCR检测的阳性对照，也可作为普通PCR检测的阳性对照。附图说明图1为本专利技术转基因玉米品系鉴定阳性质粒分子pYMID1-1905图谱。图2为本专利技术转基因玉米品系鉴定阳性质粒分子pYMID2-1905图谱。图3为测序的序列与预期DNA序列比对结果。图4为以pYMID1-1905为模板玉米内标准基因zSSIIb的荧光扩增曲线。图5为以pYMID1-1905为模板转化体3272的荧光扩增曲线。图6为以pYMID1-1905为模板转化体4114的荧光扩增曲线。图7为以pYMID1-1905为模板转化体5307的荧光扩增曲线。图8为以pYMID1-1905为模板转化体59122的荧光扩增曲线。图9为以pYMID1-1905为模板转化体Bt11的荧光扩增曲线。图10为以pYMID1-1905为模板转化体Bt176的荧光扩增曲线。图11为以pYMID1-1905为模板转化体BVLA430101的荧光扩增曲线。图12为以pYMID1-1905为模板转化体DAS-40278-9的荧光扩增曲线。图13为以pYMID1-1905为模板转化体GA21的荧光扩增曲线。图14为以pYMID1-1905为模板转化体MON87427的荧光扩增曲线。图15为以pYMID1-1905为模板玉米内标准基因zSSIIb、转化体3272、转化体4114、转化体5307、转化体59122、转化体Bt11的普通PCR扩增电泳图。图16为以pYMID1-1905为模板转化体Bt176、转化体BVLA430101、转化体DAS-40278-9、转化体GA21、转化体MON87427的普通PCR扩增电泳图。图17为以pYMID2-1905为模板转化体MON87460的荧光扩增曲线。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种转基因玉米品系鉴定阳性质粒分子，其特征在于，所述质粒分子为pYMID1-1905和pYMID2-1905；/n所述pYMID1-1905是将转化体特异性序列3272、转化体特异性序列4114、转化体特异性序列5307、转化体特异性序列59122、转化体特异性序列Bt11、转化体特异性序列Bt176、转化体特异性序列BVLA430101、转化体特异性序列DAS-40278-9、转化体特异性序列GA21、转化体特异性序列MON87427和玉米内标准基因zSSIIb构建到pUC18质粒载体上得到；/n所述pYMID2-1905是将转化体特异性序列MON87460、转化体特异性序列MON89034、转化体特异性序列MIR604、转化体特异性序列MIR162、转化体特异性序列MON810、转化体特异性序列MON88017、转化体特异性序列MON863、转化体特异性序列NK603、转化体特异性序列T25、转化体特异性序列TC1507和玉米内标准基因zSSIIb构建到pUC18质粒载体上得到。/n

【技术特征摘要】
1.一种转基因玉米品系鉴定阳性质粒分子，其特征在于，所述质粒分子为pYMID1-1905和pYMID2-1905；
所述pYMID1-1905是将转化体特异性序列3272、转化体特异性序列4114、转化体特异性序列5307、转化体特异性序列59122、转化体特异性序列Bt11、转化体特异性序列Bt176、转化体特异性序列BVLA430101、转化体特异性序列DAS-40278-9、转化体特异性序列GA21、转化体特异性序列MON87427和玉米内标准基因zSSIIb构建到pUC18质粒载体上得到；
所述pYMID2-1905是将转化体特异性序列MON87460、转化体特异性序列MON89034、转化体特异性序列MIR604、转化体特异性序列MIR162、转化体特异性序列MON810、转化体特异性序列MON88017、转化体特异性序列MON863、转化体特异性序列NK603、转化体特异性序列T25、转化体特异性序列TC1507和玉米内标准基因zSSIIb构建到pUC18质粒载体上得到。


2.根据权利要求1所述转基因玉米品系鉴定阳性质粒分子，其特征在于，所述转化体特异性序列3272、转化体特异性序列4114、转化体特异性序列5307、转化体特异性序列59122、转化体特异性序列Bt11、转化体特异性序列Bt176、转化体特异性序列BVLA430101、转化体特异性序列DAS-40278-9、转化体特异性序列GA21、转化体特异性序列MON87427的核苷酸序列分别如序列表SEQIDNO：1-SEQIDNO：10所示。


3.根据权利要求1所述转...

【专利技术属性】
技术研发人员：温洪涛，李夏莹，杨洋，陈子言，丁一佳，张秀杰，关海涛，张晓磊，张瑞英，
申请(专利权)人：黑龙江省农业科学院农产品质量安全研究所，农业农村部科技发展中心，
类型：发明
国别省市：黑龙江;23