用于基因高效率表达的氧化葡萄糖酸杆菌穿梭载体制造技术

本发明专利技术公开了用于基因高效率表达的氧化葡萄糖酸杆菌穿梭载体，属于基因工程领域。本发明专利技术筛选了氧化葡萄糖酸杆菌内源质粒可能的复制蛋白，并利用该类内源复制蛋白构建一系列的穿梭载体，将其转入氧化葡萄糖酸杆菌内进行验证，发现其转化效率和广宿主质粒pBBR‑MCS相比有较大的提高；并将穿梭载体用于蛋白的表达，使氧化葡萄糖酸杆菌的L‑山梨糖产量比广宿主载体的表达量提高7.8％，并使底物转化时间缩短了27.2％。本发明专利技术大大提高了对氧化葡萄糖酸杆菌遗传改造的效率，实现对氧化葡萄糖酸杆菌遗传改造的不同需求。

【技术实现步骤摘要】
用于基因高效率表达的氧化葡萄糖酸杆菌穿梭载体
本专利技术涉及用于基因高效率表达的氧化葡萄糖酸杆菌穿梭载体，属于基因工程领域。
技术介绍
氧化葡萄糖酸杆菌是是一种严格需氧的革兰氏阴性菌，属于葡萄糖菌属，醋酸杆菌科，该类细菌主要栖息于高糖环境，如水果，花卉和蜂蜜中。葡萄糖酸杆菌具有以下几个特征使其在工业上应用广泛:(1)能快速且不完全氧化糖、醇类底物生成相应的醛、酮和酸；(2)膜结合脱氢酶催化活性位点一般位于周质空间，进行催化反应时底物不需要跨膜运输，而相应的产物则直接分泌到培养基中；(3)催化反应具有高度的区域选择性和立体选择性。氧化葡萄糖酸杆菌的特征决定了其在工业生产中的重要的应用，例如生产维生素C(vitaminC)，L-酒石酸(L-tartaricacid)，二羟基丙酮(DHA)，米格列醇(miglitol)和5-酮基-果糖(5-ketofructose)等。质粒是一种独立于染色体之外的可以自主复制或双链环状DNA分子，它一般含有独特的复制子结构，其决定了该质粒在细胞内的稳定性和拷贝数等性质。质粒在遗传工程领域是作为基因的克隆或者表本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.穿梭载体，其特征在于，所述穿梭载体上含有如SEQ ID NO.1～15所示的基因。/n

【技术特征摘要】
1.穿梭载体，其特征在于，所述穿梭载体上含有如SEQIDNO.1～15所示的基因。


2.根据权利要求1所述的穿梭载体，其特征在于，以pMD19-TSimpleVector载体为穿梭载体骨架。


3.根据权利要求1或2所述的穿梭载体，其特征在于，所述穿梭载体上具有如SEQIDNO.21～SEQIDNO.25任一所示的抗生素抗性基因。


4.重组微生物细胞，其特征在于，含有权利要求1～3任一所述的穿梭载体。


5.根据权利要求4所述的重组微生物细胞，其特征在于，宿主细胞是氧化葡萄糖酸杆菌，包括但不限于：氧化葡萄糖酸杆菌WSH-0...

【专利技术属性】
技术研发人员：周景文，陈坚，刘立，曾伟主，堵国成，李江华，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32