一种表达COVID-19抗原的表达载体及基因工程乳酸菌口服疫苗的构建方法技术

本发明专利技术公开了一种表达COVID‑19抗原的表达载体及基因工程乳酸菌口服疫苗的构建方法，该方法以COVID‑19的SP1或RBD蛋白为免疫原，并融合树突状细胞诱导肽DCpep，利用食品级乳酸菌作为免疫抗原传递载体，最终构建表达COVID‑19抗原的基因工程乳酸菌口服疫苗，本发明专利技术方法使用方便、安全，无应激反应。

【技术实现步骤摘要】
一种表达COVID-19抗原的表达载体及基因工程乳酸菌口服疫苗的构建方法
本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种重组乳酸菌疫苗株及其制备方法和用途，特别涉及一种表达COVID-19抗原的表达载体及基因工程乳酸菌口服疫苗、其构建方法以及在防治COVID-19肺炎中的用途。
技术介绍
新型冠状病毒(CoV)命名为COVID-19。新型冠状病毒和SARS病毒一样，也是通过利用S蛋白结合人体细胞表面的ACE2蛋白进入细胞的，只不过二者的S蛋白同源性比较低，只有76.47％。新冠病毒S蛋白结构如图5所示。上海巴斯德研究所的科学家通过计算机模型，评估了新型冠状病毒和SARS病毒的S蛋白与人类ACE2分子相互作用的能力。结果发现，虽然新型冠状病毒的S蛋白与ACE2之间的作用力低于SARS病毒，但是仍然非常强大。新冠肺炎表现出的传染性明显强于SARS。中国团队基于更大规模的数据评估的R0值3.77，基本明确了新冠肺炎的传染性强于SARS。由于目前没有针对COVID-19的特效抗病毒治疗药物和疫苗，所以将COVID-19的SP1蛋白本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种表达COVID-19抗原的表达载体，其特征在于：所述表达COVID-19抗原的表达载体是通过将COVID-19抗原SP1或RBD序列以及树突状细胞诱导肽DCpep基因连接到乳酸菌表达载体pNZ8148上得到的。/n

【技术特征摘要】
20200330 CN 20201023583121.一种表达COVID-19抗原的表达载体，其特征在于：所述表达COVID-19抗原的表达载体是通过将COVID-19抗原SP1或RBD序列以及树突状细胞诱导肽DCpep基因连接到乳酸菌表达载体pNZ8148上得到的。


2.根据权利要求1所述的表达COVID-19抗原的表达载体，其特征在于：所述乳酸菌表达载体pNZ8148为食品级表达载体，该乳酸菌表达载体pNZ8148经改造具有翻译增强子序列和大肠杆菌转录终止子序列，其利用NcoI和HindIII对乳酸菌表达载体pNZ8148进行双酶切，与T7g10-PgsA-MCS-rrnBT1T2序列连接，构建组成型乳酸菌分泌表达载体，命名为pNZ-T7g10-PB，其中T7g10为翻译增强子序列，其核苷酸序列如SEQIDNO.1所示，PgsA的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示，MCS为多克隆酶切位点，至少包括SpeI和XbaI酶切位点。


3.一种权利要求1所述的表达COVID-19抗原的表达载体的构建方法，其特征在于具体步骤为：
步骤S1：通过基因合成，合成经过密码子优化的COVID-19抗原SP1-DCpep或RBD-DCpep基因序列，SP1-DCpep基因的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示，RBD-DCpep基因序列如SEQIDNO.4所示；
步骤S2：将基因SP1-DCpep或RBD-DCpep连接到pMD19-T载体上，得到的重组载体命名为pMD-SP1-DCpep或pMD-RBD-DCpep；
步骤S3：乳酸菌分泌型表达质粒pNZ-T7g10-PB的构建，在质粒pNZ8148的基础上进行改造，利用NcoI和HindIII对质粒pNZ8148进行双酶切，与T7g10-PgsA-MCS-rrnBT1T2序列连接，构建了组成型乳酸菌分泌表达载体，命名为pNZ-T7g10-PB，其中T7g10为翻译增强子序列，其核苷酸序列如SEQIDNO.1所示，PgsA的核苷酸序列如SEQID...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜玉钦，李伟，赵杰，徐桂清，马春华，
申请(专利权)人：河南师范大学，新乡益曼生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：河南;41