【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】纯化多糖的方法
[0001]本公开提供了一种从细胞和/或细胞裂解物中纯化多糖的方法。本公开进一步提供了一种制备多糖疫苗的方法。还提供了通过本文描述的方法制备的疫苗、递送系统、组合物和多糖。
技术介绍
[0002]病原性细菌通常具有包被多糖的细胞表面荚膜。以类似的方式，病原性真菌可以具有含有多糖的细胞壁。感染后，这些细菌和真菌多糖通过阻止宿主抗体附着到细胞上来干扰免疫应答。已发现，这些多糖是针对细菌或真菌病原体的有效疫苗。在某些情况下，将多种多糖缀合到一种疫苗调配物中以增加对多种血清型或菌株的保护和/或改进疫苗的有效性。另外，多糖已被用作非抗原特异性疫苗佐剂以增强疫苗的免疫原性。
[0003]用于疫苗调配物的多糖可以在培养生物体后从细菌或真菌中分离出来，然后从不期望的杂质中裂解和纯化多糖。典型的杂质可以包含细胞蛋白质、核酸、其它细胞组分和培养基的组分。通常，多糖可以带电，例如带正电荷或带负电荷，或是中性的。从杂质中分离每种类型的多糖可能需要不同的过程，例如不同的试剂和浓度、分离程序等。例如，美国专利第5,714,354...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种从细胞裂解物中纯化多糖的方法，所述方法包括：a.部分纯化包括多糖和杂质的所述细胞裂解物以获得澄清的粗裂解物；b.将所述澄清的粗裂解物与包括约100mM到约2M盐的中和溶液混合以形成中和裂解物；c.将所述中和裂解物与包括约0.1％v/v到约6％v/v的十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)的沉淀溶液混合以形成第一上清液和第一沉淀物；以及d.将所述第一沉淀物与所述第一上清液分离，其中所述多糖基本上位于所述第一上清液中。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述部分纯化所述细胞裂解物包括沉淀、离心、过滤或其组合。3.根据权利要求2所述的方法，其中所述过滤包括深度过滤、切向流过滤(TFF)、无菌过滤或其组合。4.根据权利要求1到3中任一项所述的方法，其中所述中和溶液包括约200mM到约1M的盐。5.根据权利要求4所述的方法，其中所述中和溶液包括约250mM到约650mM的盐。6.根据权利要求5所述的方法，其中所述中和溶液包括约300mM到约500mM的盐。7.根据权利要求6所述的方法，其中所述盐是NaCl、KCl、CH4Cl、NH4Cl、MgCl2、CaCl2、Na3PO4或其组合。8.根据权利要求1到7中任一项所述的方法，其中所述中和溶液包括约440mM的NaCl。9.根据权利要求1到8中任一项所述的方法，其中(b)中所述澄清的粗裂解物与所述中和溶液的所述混合与过滤步骤同时或在所述过滤步骤之前进行，其中所述过滤步骤在(c)之前。10.根据权利要求9所述的方法，其中(b)中的所述混合与所述过滤步骤同时进行。11.根据权利要求9或10所述的方法，其中所述过滤包括切向流过滤(TFF)。12.根据权利要求1到11中任一项所述的方法，其中所述沉淀溶液包括约0.2％v/v到约5％v/v的CTAB。13.根据权利要求12所述的方法，其中所述沉淀溶液包括约0.5％v/v到约4％v/v的CTAB。14.根据权利要求13所述的方法，其中所述沉淀溶液包括约1％v/v到约3％v/v的CTAB。15.根据权利要求1到14中任一项所述的方法，其中所述细胞裂解物包括带正电荷的多糖、中性多糖、带负电荷的多糖或其组合。16.根据权利要求1到15所述的方法，其中所述带正电荷的多糖、所述中性多糖、所述带负电荷的多糖或其组合基本上位于所述第一上清液中。17.根据权利要求1到16中任一项所述的方法，其中所述杂质基本上位于所述第一沉淀物中。18.根据权利要求1到17中任一项所述的方法，其中所述杂质包括多核苷酸。19.根据权利要求18所述的方法，其中所述多核苷酸是DNA、RNA或其组合。20.根据权利要求1到19中任一项所述的方法，其中(b)、(c)或两者中的所述混合通过振荡、搅拌或泵送进行。
21.根据权利要求1到20中任一项所述的方法，其中所述分离通过离心、过滤或其组合进行。22.根据权利要求1到21中任一项所述的方法，其进一步包括使所述第一上清液经受超滤、渗滤或其组合以产生渗余物和渗透物，其中所述多糖基本上位于所述渗余物中，并且所述CTAB基本上位于所述渗透物中。23.根据权利要求22所述的方法，其中所述超滤、渗滤或其组合是切向流过滤(TFF)。24.根据权利要求23或24所述的方法，其进一步包括使所述渗余物经受碳过滤。25.根据权利要求24所述的方法，其进一步包括使所述渗余物经受色谱法。26.根据权利要求1到21中任一项所述的方法，其进一步包括将碘化钾(KI)添加到所述第一上清液中以形成第二沉淀物和第二上清液，其中所述多糖基本上位于所述第二上清液中，并且所述CTAB基本上位于所述第二沉淀物中。27.根据权利要求1到26中任一项所述的方法，其中所述方法不包括在所述添加KI之前的色谱法步骤。28.根据权利要求27所述的方法，其进一步包括通过离心、过滤或其组合将所述第二上清液与所述第二沉淀物分离。29.根据权利要求28所述的方法，其进一步包括使所述第二上清液经受碳过滤。30.根据权利要求29所述的方法，其进一步包括使所述第二上清液经受色谱法。31.根据权利要求25或30所述的方法，其中所述色谱法包括陶瓷羟基磷灰石型(CHT)色谱法、疏水相互作用色谱法(HIC)或其组合。32.根据权利要求31所述的方法，其中所述色谱法包括CHT色谱法和HIC。33.根据权利要求32所述的方法，其中使用包括苯基的色谱柱或膜进行所述HIC。34.根据权利要求33所述的方法，在所述色谱法之后进行超滤、渗滤或其组合，以浓缩所述多糖。35.根据权利要求34所述的方法，其中所述超滤、渗滤或其组合是切向流过滤。36.根据权利要求1到35中任一项所述的方法，其中所述方法不包括在所述纯化期间所述细胞裂解物中含有的所述多糖大于10％的第一沉淀物。37.根据权利要求1到36中任一项所述的方法，其中所述带正电荷的多糖、所述中性多糖、所述带负电荷的多糖或其组合在所述纯化期间基本上不沉淀。38.根据权利要求1到37中任一项所述的方法，其中所述带正电荷的多糖、所述中性多糖、所...
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