一种玉米醇溶蛋白降解酶的制备方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种玉米醇溶蛋白降解酶的制备方法及其应用，属于分子生物学技术领域。本发明专利技术公开的一种玉米醇溶蛋白降解酶的制备方法，利用现代分子技术成功优化了玉米醇溶蛋白降解酶的基因序列，构建了能够在酵母体外表达玉米醇溶蛋白降解酶的表达载体pPICZαA‑ZDP，利用该载体和毕赤酵母能够制备玉米醇溶蛋白降解酶，进而为玉米醇溶蛋白降解酶在生产中的应用提供技术支撑。

【技术实现步骤摘要】
一种玉米醇溶蛋白降解酶的制备方法及其应用
本专利技术涉及分子生物学
，更具体的说是涉及一种玉米醇溶蛋白降解酶的制备方法及其应用。
技术介绍
玉米是目前反刍动物饲喂系统中精料的主要成分。淀粉约占玉米干物质的70％，是反刍动物的重要能量来源。反刍动物利用玉米淀粉的重要途径是利用瘤胃微生物对其降解。然而，尽管瘤胃环境较为复杂，存在广泛能够降解淀粉的微生物，但淀粉瘤胃消化率往往低于60％，对于干粉碎玉米通常会低于50％，而我国反刍动物养殖体系中用的最多的恰恰就是干粉碎玉米。瘤胃淀粉消化率不足会抑制瘤胃微生物蛋白合成，进而降低动物的生产性能。因此，提高淀粉的瘤胃消化率是优化淀粉能量供应和提高动物生产的重要举措。影响玉米淀粉瘤胃消化率的因素包括玉米的种类、刈割时间、淀粉组成(直链、支链淀粉比例)、加工方式以及玉米醇溶蛋白含量等。其中，近年来关于玉米中玉米醇溶蛋白含量对反刍动物瘤胃淀粉降解影响的研究备受关注。玉米醇溶蛋白是玉米胚乳中的主要贮存蛋白质，与淀粉颗粒以交联复合体的形式存在，不溶于水、低盐溶液以及瘤胃环境，但可溶于60％～95％的乙醇溶本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种玉米醇溶蛋白降解酶的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：/n(1)优化玉米醇溶蛋白降解酶基因；/n(2)构建重组表达载体pPICZαA-ZDP；/n(3)将重组表达载体pPICZαA-ZDP转化毕赤酵母，获得阳性克隆，进行培养；/n(4)将培养的菌液离心，获得培养上清液；进行亲和层析纯化，获得纯化的玉米醇溶蛋白降解酶。/n

【技术特征摘要】
1.一种玉米醇溶蛋白降解酶的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：
(1)优化玉米醇溶蛋白降解酶基因；
(2)构建重组表达载体pPICZαA-ZDP；
(3)将重组表达载体pPICZαA-ZDP转化毕赤酵母，获得阳性克隆，进行培养；
(4)将培养的菌液离心，获得培养上清液；进行亲和层析纯化，获得纯化的玉米醇溶蛋白降解酶。


2.根据权利要求1所述的一种玉米醇溶蛋白降解酶的制备方法，其特征在于，步骤(1)根据毕赤酵母的密码子偏好性和pPICZαA载体特点，对玉米醇溶蛋白降解酶基因进行优化，优化后的基因片段为SEQIDNO.1。


3.根据权利要求2所述的一种玉米醇溶蛋白降解酶的制备方法，其特征在于，步骤(2)构建重组表达载体pPICZαA-ZDP的具体步骤如下：利用EcoRI和XbaI限制性内切酶分别对玉米醇溶蛋白降解酶基因片段和表达质粒pPICZαA进行双酶切；胶回收玉米醇溶蛋白降解酶基因片段和pPICZαA质粒片段；取玉米醇溶蛋白降解酶目的片段4μl，T4连接酶和缓冲液5μl，纯化的pPICZαA载...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵向辉，刘婵娟，瞿明仁，潘珂，李艳娇，张文静，杨竹青，
申请(专利权)人：江西农业大学，
类型：发明
国别省市：江西;36