一种PCCI-2U质粒及其构建方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种PCCI‑2U质粒及其构建方法和应用，所述的质粒命名为PCCI‑2U，质粒包括repE基因、sopA基因、sopB基因、sopC基因、ori2复制子、oriV复制子、原核转录终止子T3te和tonB终止子、trp基因和yeast 2μ复制子基因。本发明专利技术的提供的一种PCCI‑2U质粒及其构建方法和应用，在大肠杆菌中具有拷贝数低、容量大、稳定性高等特点，在酵母中依赖高拷贝的2μ复制子能稳定复制，具有编码色氨酸的TRP基因，可以利用SC‑rtp半合成培养基进行筛选。本发明专利技术的PCCI‑2U可用长基因的酵母内组装，用于长片段基因、结构复杂基因的克隆、筛选、测序和基因组的构建等基因工程领域。

【技术实现步骤摘要】
一种PCCI-2U质粒及其构建方法和应用
本专利技术属于生物技术及基因工程领域，具体涉及一种能够在单拷贝和中拷贝之间切换、大容量、高稳定性的酵母-大肠穿梭载体PCCI-2U质粒的构建方法和应用。
技术介绍
现代生物学建立以来，从解码一个人的基因组计划的人类基因组计划，到分析人群差异性的HapMap，再到利用基因组围剿疾病的GWAS以及现在的精准医疗，在基因组巨大的宝藏之中，人类的探索从未停止。现在科学家已经有能力从头建构或者重编程大肠杆菌或者酵母的基因组。基因组组装技术基于大规模基因组数据分析,发现新型的或隐藏的生物活性物质合成基因簇。利用基因组装技术,可提高或激活沉默的生物合成基因簇在微生物中的表达,从而合成潜在的、有价值的生物活性物质。TAR(转化重组技术)是利用酿酒酵母体内高效的同源重组系统实现多个具有末端重叠序列的DNA片段的一步组装方法，它不仅能够方便地将较短的DNA片段组装成较长的DNA片段，甚至还能够实现整个基因组的组装。2016年3月，测序和合成生物学先驱CraigVenter及其同事们宣布，他们重编码了支原体细本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种pCCI-2U质粒，其特征在于，包括repE基因、sopA基因、sopB基因、sopC基因、ori2复制子、可经诱导使质粒拷贝数提高至10个拷贝的oriV复制子、抗生素抗性基因以及原核转录终止子T3te和tonB，所述原核转录终止子T3te和tonB位于克隆位点两端；/n所述pCCI-2U质粒中，自5’端第1bp～30bp为终原核转录终止子T3Te，58bp～135bp为多克隆位点区域，155bp～186bp为原核转录终止子tonB，200bp～1156bp为Trp基因，1901bp～3243bp为2μ复制子基因，3388bp～4047bp为氯霉素基因，5008bp～5622bp为or...

【技术特征摘要】
1.一种pCCI-2U质粒，其特征在于，包括repE基因、sopA基因、sopB基因、sopC基因、ori2复制子、可经诱导使质粒拷贝数提高至10个拷贝的oriV复制子、抗生素抗性基因以及原核转录终止子T3te和tonB，所述原核转录终止子T3te和tonB位于克隆位点两端；
所述pCCI-2U质粒中，自5’端第1bp～30bp为终原核转录终止子T3Te，58bp～135bp为多克隆位点区域，155bp～186bp为原核转录终止子tonB，200bp～1156bp为Trp基因，1901bp～3243bp为2μ复制子基因，3388bp～4047bp为氯霉素基因，5008bp～5622bp为oriV基因，6008bp～6763bp为repE基因，7342bp～8517bp为sopA基因，8517bp～9488bp为sopB基因，9561bp～10034bp为sopC基因。


2.如权利要求1所述的一种PCCI-2U质粒，其特征在于：所述PCCI-2U质粒包括trp基因和yeast2μ复制子基因，所述PCCI-2U质粒在酵母中以高拷贝的特点维持，所述PCCI-2U质粒具有编码色氨酸的TRP基因。


3.如权利要求1所述的一种PCCI-2U质粒，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：开雷，杜攀，苏万凯，
申请(专利权)人：江苏赛索飞生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32