一种提高枯草芽孢杆菌乙酰氨基葡萄糖产量的方法技术

本发明专利技术公开了一种提高枯草芽孢杆菌乙酰氨基葡萄糖产量的方法，本发明专利技术敲除验证得到关键磷酸酶YwpJ能够催化GlcNAc‑6‑P发生去磷酸化作用生成GlcNAc，通过过表达磷酸酶YwpJ，降低胞内磷酸糖的过量积累，消除了过量积累的磷酸糖对细胞的毒性作用，有效将磷酸糖分泌到胞外，从而使细胞生长得到改善；并进一步敲除GlcNAc合成前体降解途径关键基因murQ、nagBB，阻断前体物质的降解，减少碳流的浪费，使碳流更多的转化成产物，最终重组菌株FMIP34的GlcNAc产量达到26.1g/L，提高了61.1％，GlcNAc转化率达到0.483g/g葡萄糖。

【技术实现步骤摘要】
一种提高枯草芽孢杆菌乙酰氨基葡萄糖产量的方法
本专利技术涉及一种提高枯草芽孢杆菌乙酰氨基葡萄糖产量的方法，属于代谢工程

技术介绍
乙酰氨基葡萄糖是生物体内的一种单糖，广泛存在于细菌、酵母、霉菌、植物以及动物体内。在人体中，乙酰氨基葡萄糖是糖胺聚糖二糖单元的合成前体，其对修复和维持软骨及关节组织功能具有重要作用。枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)是一种被广泛用作食品酶制剂及重要营养化学品的生产宿主，其产品被FDA认证为“generallyregardedassafe”(GRAS)安全级别。因此，运用代谢工程手段构建重组枯草芽孢杆菌是生产食品安全级乙酰氨基葡萄糖的有效途径。以往构建的重组枯草芽孢杆菌SFMI(ΔnagPΔgamPΔgamAΔnagAΔnagBΔldhΔptaΔglmSribozyme-trp-P43-anti-pfkA-glmMglmSribozymesRNA-anti-pgiglmSribozymeM9sRNA)主要是针对碳代谢、氮代谢、以及途径平衡等问题进行改造。改造B.subtilis合成Glc本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种提高枯草芽孢杆菌乙酰氨基葡萄糖产量的方法，其特征在于，包括如下步骤：在生产乙酰氨基葡萄糖的枯草芽孢杆菌中过表达磷酸酶YwpJ，并敲除氨基葡萄糖6磷酸脱氨酶基因nagBB和乙酰胞壁酸6磷酸合成酶基因murQ。/n

【技术特征摘要】
1.一种提高枯草芽孢杆菌乙酰氨基葡萄糖产量的方法，其特征在于，包括如下步骤：在生产乙酰氨基葡萄糖的枯草芽孢杆菌中过表达磷酸酶YwpJ，并敲除氨基葡萄糖6磷酸脱氨酶基因nagBB和乙酰胞壁酸6磷酸合成酶基因murQ。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的磷酸酶YwpJ的编码基因如GeneID:936907。


3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的生产乙酰氨基葡萄糖的枯草芽孢杆菌是在枯草芽孢杆菌SFMI(ΔnagPΔgamPΔgamAΔnagAΔnagBΔldhΔptaΔglmSribozyme-trp-P43-anti-pfkA-glmMglmSribozymesRNA-anti-pgiglmSribozymeM9sRNA)中过表达N-乙酰氨基葡萄糖乙酰化酶GNA1得到。


4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的枯草芽孢杆菌SFMI(ΔnagPΔgamPΔgamAΔnagAΔnagBΔldhΔptaΔglmSribozyme-trp-P43-anti-pfkA-glmMglmSribozymesRNA-anti-pgiglmSribozymeM9sRNA)是以B.subtilis168ΔnagPΔgamPΔgamAΔnagAΔnagBΔldhΔptaΔglmS5’UTR::lox72为宿主，通过删除glmS核酶，再进一步利用glmS核酶控制pfkA和glmM、利用glmS核酶突变体控制pgi获得。


5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的N-乙酰氨基葡...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘龙，卢健行，刘长峰，陈坚，堵国成，李江华，吕雪芹，牛腾飞，
申请(专利权)人：江南大学，山东润德生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32