一种枯草芽孢杆菌线性质粒系统的构建与应用技术方案

本发明专利技术公开了一种枯草芽孢杆菌线性质粒系统的构建与应用，属于枯草芽孢杆菌基因工程领域。本发明专利技术以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)作为表达宿主，通过在枯草芽孢杆菌内表达来源于枯草芽孢杆菌噬菌体phi29的基因组复制相关基因簇，从而实现线性质粒在胞内的复制与表达。通过更换不同的启动子，可以控制线性质粒的拷贝数与表达水平。经验证，应用该线性质粒系统表达绿色荧光蛋白，在摇瓶培养70h后未发生质粒丢失的情况，这种新型的表达工具为实现枯草芽孢杆菌高效稳定的基因表达，基因编辑，代谢工程改造等奠定了基础。

Construction and application of a linear plasmid system of Bacillus subtilis

【技术实现步骤摘要】
一种枯草芽孢杆菌线性质粒系统的构建与应用
本专利技术涉及一种枯草芽孢杆菌线性质粒系统的构建与应用，属于枯草芽孢杆菌基因工程领域。
技术介绍
枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)在自然界广泛分布，包括土壤表面，水环境和动物胃。作为革兰氏阳性菌的模型微生物，用于孢子形成机制和代谢调节的实验室研究。它是一种非致病微生物，不含内毒素，通常被美国食品和药物管理局(FDA)认可为安全的(GRAS)食品级微生物。此外，枯草芽孢杆菌具有许多优点，包括：生长速度快，培养时间短，培养要求低；分泌信号肽的系统十分高效，使得其分泌蛋白能力强，这对后续蛋白提取工艺提供了很大便利；其分子伴侣系统十分高效，使得其在表达大部分真核来源的蛋白时，可以使得蛋白仍然保持其原有构象和活性。枯草芽孢杆菌的优势使得其在发酵行业应用十分广泛，其被广泛用于工业酶生产，高附加值产品的生物合成。其表达系统在分泌和表达活性蛋白上的优点逐渐引起人们的关注,并有可能成为继大肠杆菌之后的重要的原核表达系统。然而，用于提高蛋白表达量的工具质粒却十分不稳定，容易发生丢失的情况，需要抗生素维持(Z本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基因表达系统，其特征在于，所述表达系统含有线性质粒，和(a)或(b)；所述线性质粒从5’端向3’端依次含有左复制原点、启动子、目的基因和右复制原点；所述左复制原点如SEQ ID NO.3所示，所述右复制原点如SEQ ID NO.4所示；其中，/n(a)为携带SEQ ID NO.1所示基因簇的质粒；/n(b)为在基因组上整合了SEQ ID NO.1所示基因簇的细胞。/n

【技术特征摘要】
1.一种基因表达系统，其特征在于，所述表达系统含有线性质粒，和(a)或(b)；所述线性质粒从5’端向3’端依次含有左复制原点、启动子、目的基因和右复制原点；所述左复制原点如SEQIDNO.3所示，所述右复制原点如SEQIDNO.4所示；其中，
(a)为携带SEQIDNO.1所示基因簇的质粒；
(b)为在基因组上整合了SEQIDNO.1所示基因簇的细胞。


2.根据权利要求1所述的基因表达系统，其特征在于，所述启动子为启动子Plytr或P43。


3.根据权利要求1所述的基因表达系统，其特征在于，所述携带SEQIDNO.1所示基因簇的质粒核苷酸序列如SEQIDNO.2所示；所述线性质粒的序列如SEQIDNO.5所示。


4.根据权利要求3所述的基因表达系统，其特征在于，所述线性质粒中编码绿色荧光蛋白基因替换为其它目的基因，所述其它目的基因为编码目的蛋白的基因，或参与微生物代谢调控的基因。


5.一种线性质粒，其特征在于，依次含有左复制原点、启动子、目的...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘延峰，堵国成，田荣臻，陈坚，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32