粗品肝素钠制备肝素钠和硫酸乙酰肝素钠的方法技术

本申请公开了一种粗品肝素钠制备肝素钠和硫酸乙酰肝素钠的方法，步骤包括：一、粗品肝素钠酶解：二、树脂吸附：三、树脂清洗：四、硫酸乙酰肝素钠的收集；五、肝素钠的收集。本发明专利技术申请的优点在于：一、分离过程中均采用物理分离的方法，这样不会破坏肝素和硫酸乙酰肝素的化学结构，从而有效提高产品活性，肝素钠的绵羊血浆活性可以达到130U/mg以上。二、本方法得到的肝素/硫酸乙酰肝素只需经过氧化脱色和乙醇分级沉淀，即可得到原料药级的肝素与硫酸乙酰肝素。三、工艺路线简单，工艺设备要求低，工艺简单，效率、收率、纯度高，有机溶剂的用量小，工艺放大容易，所需设备简单，处理量大，适合用于工业化生产。

【技术实现步骤摘要】
粗品肝素钠制备肝素钠和硫酸乙酰肝素钠的方法
本专利技术涉及生物医药
，具体涉及从粗品肝素钠中分离肝素钠和硫酸乙酰肝素钠的方法。
技术介绍
肝素(Heparin，HP)是临床上应用最广泛最为重要的抗凝剂。肝素和硫酸乙酰肝素(HeparanSulfate，HS，可视为低硫酸化的肝素)普遍存在于哺乳动物组织中，在哺乳动物组织中的合成遵从相同的路线：首先在核心蛋白丝氨酸的-OH上引入半乳糖，然后在半乳糖上依次连接上-木糖-木糖，在第二个木糖上开始合成肝素和/或硫酸乙酰肝素的前体多糖：重复的-4)D-GlcAβ(1-4)D-GlcNAcα(1-二糖单元；重复的二糖单元合成后，包括核心蛋白一起被转运到高尔基体，然后开始肝素和/或硫酸乙酰肝素的修饰过程：首先是在NDST酶的作用下GlcNAc的脱乙酰化和硫酸化，然后在C5差向异构酶的做用下D-GlcA转化为L-IdoA，并伴随L-IdoA的2-O硫酸化；然后是6位和3位的O-硫酸化。在肝素中有大约90％的GlcNAc被转化为N-硫酸根，硫酸乙酰肝素中的这一比例仅为40～50％；在成熟的肝素多糖链中，三硫本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.粗品肝素钠制备肝素钠和硫酸乙酰肝素钠的方法，其特征在于：包括以下步骤：/n一、酶解：先将原料粗品肝素钠溶解于纯化水中，加入氯化钠和碳酸钠，完全溶解后粗品肝素钠的浓度为60～140g/L，氯化钠的浓度为20～40g/L，碳酸钠的浓度为5～15g/L；加入2709碱性蛋白酶，酶解温度为40℃～60℃，酶用量为100～300万U/Kg粗品肝素钠，酶解结束后过滤得酶解液；/n二、树脂吸附：酶解液中加入大孔型强阴离子交换树脂，搅拌吸附，吸附过程中控制酶解液pH值在8～10；吸附结束后，分离吸附后的大孔型强阴离子交换树脂和不吸附溶液；/n三、树脂清洗：用氯化钠水溶液分次清洗吸附后的大孔型强阴离子交换树...

【技术特征摘要】
1.粗品肝素钠制备肝素钠和硫酸乙酰肝素钠的方法，其特征在于：包括以下步骤：
一、酶解：先将原料粗品肝素钠溶解于纯化水中，加入氯化钠和碳酸钠，完全溶解后粗品肝素钠的浓度为60～140g/L，氯化钠的浓度为20～40g/L，碳酸钠的浓度为5～15g/L；加入2709碱性蛋白酶，酶解温度为40℃～60℃，酶用量为100～300万U/Kg粗品肝素钠，酶解结束后过滤得酶解液；
二、树脂吸附：酶解液中加入大孔型强阴离子交换树脂，搅拌吸附，吸附过程中控制酶解液pH值在8～10；吸附结束后，分离吸附后的大孔型强阴离子交换树脂和不吸附溶液；
三、树脂清洗：用氯化钠水溶液分次清洗吸附后的大孔型强阴离子交换树脂，清洗用氯化钠水溶液的质量分数为3%～6%，清洗液并入第二步骤中的不吸附溶液中；
四、硫酸乙酰肝素钠的收集：浓缩不吸附溶液，将氯化钠的质量分数调节至2%～6%，加入乙醇沉淀，直至乙醇的质量分数为43%～55%，沉淀脱水后烘干，即得硫酸乙酰肝素钠；
五、肝素钠的收集：用氯化钠水溶液分次洗脱经第三步骤清洗的吸附后的大孔型强阴离子交换树脂，洗脱用的氯化钠水溶液的质量分数为10%～18%，合并洗脱液，浓缩，调节氯化钠的质量分数在2%～6%；加入乙醇沉淀，直至乙醇的质量分数为35%～50%，,沉淀脱水后烘干，即得高纯度肝素钠。


2.根据权利要求1所述的粗品肝素钠制备肝素钠和硫酸乙酰肝素钠的方法，其特征在于：原料粗品肝素钠从猪或羊小肠粘膜提取得到，绵羊血浆活性介于50～100U/mg之间。


3.根据权利要求1所述的粗品肝素钠制备肝素钠和硫酸乙酰肝素钠的方法，其特征在于：第一步骤，完全溶解后，粗品肝素钠溶解后的浓度优选为100g/L，氯化钠的浓度优选为30g/L，碳酸钠的浓度优选为5～15g/L。


4.根据权利要求1所述的粗品肝素钠制备肝素钠和硫酸乙酰肝素钠的方法，其特征在于：第一步骤中，酶用量优选为200万U/Kg粗品肝素钠；酶解温度优选为46～50℃；酶解时间不少于5小时。


5.根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙军亭，钱建根，周巧云，靳彩娟，金永生，姚亦明，
申请(专利权)人：苏州融析生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32