精品肝素钠的分离提纯方法技术

本发明专利技术涉及精品肝素钠的分离提纯方法，包括以下步骤：S1、粗品肝素钠溶解：将粗品肝素钠与水进行混合，溶解过程加入氯化钠；S2、酶解过滤：选用两种酶，先使用第一种酶进行水解，后加热进行过滤；向过滤后的滤液中加入第二种酶，加热进行搅拌和过滤；S3、氧化脱色：向步骤S2得到的肝素钠中加入纯化水溶解，使用过氧化氢进行氧化脱色；S4、醇沉：向步骤S3得到的肝素钠沉淀物中加入纯化水溶解；S5、冻干：向步骤S4得到的肝素钠沉淀物中加入纯化水和1％氯化钠，将溶液加入冻干机进行冻干处理；S6：粉碎、包装：将冻干后的肝素钠进行粉碎，粉碎后进行包装。本发明专利技术效价回收率高、成品质量符合CP标准、EP标准、整个提纯方法能耗低，有效降低提纯成本。

【技术实现步骤摘要】
精品肝素钠的分离提纯方法
本专利技术涉及精品肝素钠的分离提纯方法。
技术介绍
肝素钠是一种由动物结缔组织产生的酸性粘多糖的硫酸酯类物质，具有强抗凝作用，是防止血栓栓塞性疾病的首选药物。其结构式如下：n＝4to50,R＝HorSO3Na,R'＝HorSO3NaorCO-CH3R2＝HandR3＝CO2NaorR2＝CO2NaandR3＝H肝素钠不仅有抗凝、抗血栓形成和调整血脂的作用，还有抗炎、抗过敏、抗病毒、抗癌等多种生物学功能。迄今还没有一种能够完全代替它的产品，它仍然是最重要的抗凝血和抗血栓的生化药物。目前，国内肝素钠提取方法主要有盐解法、碱解法、酶解法，其中以盐解和酶解法应用最为广泛。肝素是与其他黏多糖及蛋白质结合在一起的复合物的状态存在，用酶解法在中性偏碱的环境下酶解，使肝素与蛋白质分开，再经过树脂吸附、解吸附的方式/凝胶层析，将小分子肝素等物质分开，经沉淀，干燥得到肝素钠。现有技术中关于精品肝素钠提纯的专利，基本都采用酶解-树脂吸附-树脂洗脱-肝素钠沉淀-干燥的提取纯化方式。但目前通过树脂吸附和解吸附方式提纯，肝素损失严重，总的效价回收率非常低，同时工艺会产生废弃树脂，增加了环保压力，现有技术中也没有对肝素钠效价有效回收做具体研究。专利技术人对多篇中国公开专利文献进行特征分析，专利公开号和对应的提纯方法以列表方式呈现如下：公布号提纯方法CN103588902A盐解、吸附与洗脱、一次氧化、二次氧化CN110183550A复合蛋白酶、多次精制、树脂吸附CN102225973A酶解除蛋白、调酸除蛋白、超滤、真空干燥CN101649336A猪肠粘膜、酶解、树脂交换吸附CN1844165A树脂交换吸附、高锰酸钾氧化、超滤CN106977626A酶解、吸附、超滤浓缩CN103030715A胃蛋白酶，胰蛋白酶、絮凝沉淀、多次精制CN105440161A琼脂糖凝胶-抗凝血酶III层析CN108059687A超声波结晶CN110437345A催化裂解、调酸、氧化除蛋白对上述专利进行分析后得知，肝素钠精制提纯大部分采用树脂吸附或超滤，这就导致精品肝素钠收率偏低或收率稍高但质量达不到CP、EP标准，而且提纯过程中操作步骤相对繁琐，肝素过程损失较多，工艺所产固废、含盐废水较多。
技术实现思路
本专利技术提供了精品肝素钠的分离提纯方法，其效价回收率高、成品质量符合CP标准、EP标准、整个提纯方法能耗低、产生的固废、含盐废水很少、有效降低了提纯成本，解决了现有技术中存在的问题。本专利技术为解决上述技术问题所采用的技术方案是：精品肝素钠的分离提纯方法，包括以下步骤：S1、粗品肝素钠溶解：将粗品肝素钠与水进行混合，溶解过程加入氯化钠，至搅拌溶清；S2、酶解过滤：选用两种酶，先使用第一种酶进行水解，后加热至85-90℃，进行过滤，得到滤液；向过滤后的滤液中加入第二种酶，加热至85-90℃进行搅拌和过滤；酶解过滤后的料液加入乙醇，醇沉后虹吸上层清液；S3、氧化脱色：向步骤S2得到的肝素钠中加入纯化水溶解，使用过氧化氢进行氧化脱色，氧化后加入乙醇进行沉淀，虹吸上清液；S4、醇沉：向步骤S3得到的肝素钠沉淀物中加入纯化水溶解，加入1％肠衣盐，溶清，然后加入乙醇沉淀，虹吸上清液；S5、冻干：向步骤S4得到的肝素钠沉淀物中加入纯化水和1％氯化钠，搅拌溶清；将溶液加入冻干机进行冻干处理；S6：粉碎、包装：将冻干后的肝素钠进行粉碎，粉碎后进行包装。进一步的，步骤S1中粗品肝素钠与水的重量比为：1:7-9，溶解过程中加入的氯化钠重量为水量的1％。进一步的，步骤S2的两种酶从2709强碱性酶、1398蛋白酶、胰酶、水解蛋白酶中选取至少两种，胰酶在酶解前用胰酶激活剂激活低温保存备用。进一步的，步骤S2中两种酶的重量为粗品肝素钠重量的3％-5％。进一步的，步骤S2中酶解的温度控制在30-40℃、pH值控制在8-12之间、酶解时间每次10-12小时。进一步的，步骤S2乙醇选用纯化水量1.2-1.5倍体积的药用乙醇，醇沉时间10-12小时。进一步的，步骤S3的氧化脱色进行两次相同的重复处理。进一步的，步骤S4中的纯化水的用量为步骤S3得到肝素钠沉淀物的12-15倍重量份，乙醇选用1.5-1.8倍重量份的药用乙醇，醇沉时间为10-12小时。进一步的，步骤S5中，纯化水的用量为步骤S4得到肝素钠沉淀物的12-15倍重量份，溶液加入冻干机的合盘中，液位至标定刻度处，开启冻干机，按照冻干曲线进行冻干。进一步的，步骤S6中冻干后的肝素钠经粉碎机进行粉碎，使用至少60目的筛网进行过滤，环境湿度小于30％，使用双层聚乙烯袋进行包装。本专利技术采用上述结构的有益效果是，整个提纯方法的生产周期有效缩短，操作简便，适合工业批量生产；采用双酶解法去除蛋白质，得到的肝素钠纯度高，肝素钠效价回收率达到90-95％，较常规工艺提高30-50％，所产肝素钠成品效价可达180IU/mg以上，符合CP标准、EP标准；整个提纯方法产生的水耗、能耗有效降低、生产成本低，本专利技术方法避免用树脂吸附，不用盐水洗涤及洗脱，本方法比常规酶解工艺节省用盐量约80-90％，耗水量和废水排放量较常规工艺减也50％以上。具体实施方式为能清楚说明本方案的技术特点，下面通过具体实施方式，对本专利技术进行详细阐述。实施例11、向洁净的四口玻璃反应瓶中加入20粗品肝素钠(效价90IU/mg的猪肝素)140g纯化水，溶解过程中加入水量的1％的氯化钠，至搅拌溶清。2、向溶液中加入激活后的胰酶，升温至40℃，酶解12小时，过程调节pH值在8-12之间。3、酶解完毕，将料液加热至85-90℃，过滤。4、过滤完毕，将滤液降温至50℃，加入6g2709强碱性酶，酶解10小时，过程调节pH值在8-12之间。5、酶解完毕，将料液加热至85-90℃，过滤。6、滤液降温至35-40℃，向料液中加入210g药用乙醇，醇沉10-12小时，虹吸上层清液。7、向肝素钠沉淀物中加入300g纯化水搅拌溶清，室温下，6g加入15％过氧化氢。氧化脱色5小时。8、氧化完毕，450g的药用乙醇，沉淀10小时。9、虹吸上清液。10、重复步骤7、8、9；重复氧化脱色一次。11、向沉淀物中加入300g纯化水，加入3g肠衣盐，搅拌溶清。12、室温下，向料液中加入540g药用乙醇，沉时间12小时。13、虹吸上清液。14、向肝素钠沉淀物中加入300g纯化水，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.精品肝素钠的分离提纯方法，其特征在于，包括以下步骤：/nS1、粗品肝素钠溶解：将粗品肝素钠与水进行混合，溶解过程加入氯化钠，至搅拌溶清；/nS2、酶解过滤：选用两种酶，先使用第一种酶进行水解，后加热至85-90℃，进行过滤，得到滤液；向过滤后的滤液中加入第二种酶，加热至85-90℃进行搅拌和过滤；酶解过滤后的料液加入乙醇，醇沉后虹吸上层清液；/nS3、氧化脱色：向步骤S2得到的肝素钠中加入纯化水溶解，使用过氧化氢进行氧化脱色，氧化后加入乙醇进行沉淀，虹吸上清液；/nS4、醇沉：向步骤S3得到的肝素钠沉淀物中加入纯化水溶解，加入1％肠衣盐，溶清，然后加入乙醇沉淀，虹吸上清液；/nS5、冻干：向步骤S4得到的肝素钠沉淀物中加入纯化水和1％氯化钠，搅拌溶清；将溶液加入冻干机进行冻干处理；/nS6：粉碎、包装：将冻干后的肝素钠进行粉碎，粉碎后进行包装。/n

【技术特征摘要】
1.精品肝素钠的分离提纯方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、粗品肝素钠溶解：将粗品肝素钠与水进行混合，溶解过程加入氯化钠，至搅拌溶清；
S2、酶解过滤：选用两种酶，先使用第一种酶进行水解，后加热至85-90℃，进行过滤，得到滤液；向过滤后的滤液中加入第二种酶，加热至85-90℃进行搅拌和过滤；酶解过滤后的料液加入乙醇，醇沉后虹吸上层清液；
S3、氧化脱色：向步骤S2得到的肝素钠中加入纯化水溶解，使用过氧化氢进行氧化脱色，氧化后加入乙醇进行沉淀，虹吸上清液；
S4、醇沉：向步骤S3得到的肝素钠沉淀物中加入纯化水溶解，加入1％肠衣盐，溶清，然后加入乙醇沉淀，虹吸上清液；
S5、冻干：向步骤S4得到的肝素钠沉淀物中加入纯化水和1％氯化钠，搅拌溶清；将溶液加入冻干机进行冻干处理；
S6：粉碎、包装：将冻干后的肝素钠进行粉碎，粉碎后进行包装。


2.根据权利要求1所述的精品肝素钠的分离提纯方法，其特征在于，步骤S1中粗品肝素钠与水的重量比为：1:7-9，溶解过程中加入的氯化钠重量为水量的1％。


3.根据权利要求1所述的精品肝素钠的分离提纯方法，其特征在于，步骤S2的两种酶从2709强碱性酶、1398蛋白酶、胰酶、水解蛋白酶中选取至少两种，胰酶在酶解前用胰酶激活剂激活低温保存备用。


4.根据权利要求3所述的精品肝素...

【专利技术属性】
技术研发人员：李兴臣，姚洪雷，梁祺，李浩，徐发往，翟川川，
申请(专利权)人：山东辰龙药业有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37