一种未分级肝素或低分子肝素物种来源的鉴别方法技术

本发明专利技术公开了一种未分级肝素或低分子肝素的物种来源鉴别方法，通过肝素中寡糖ΔⅠS和ΔⅡA

【技术实现步骤摘要】
一种未分级肝素或低分子肝素物种来源的鉴别方法


[0001]0001.本专利技术涉及生物医药
，尤其涉及一种未分级肝素或低分子肝素物种来源的鉴别方法。

技术介绍

[0002]0002.肝素(Heparin)和低分子肝素(Low Molecular Weight Heparin，LMWH)是临床上应用最广泛且最重要的抗凝剂，主要提取自猪、牛和羊的肠粘膜或肺。目前医用肝素的主要来源是猪的肠粘膜肝素，但牛、羊肝素在部分国家和地区(南美、东南亚与南亚)仍被广泛使用。未分级肝素(Unfractionated Heparin，UFH)指的是天然的大分子肝素，低分子肝素是以其解聚制备的小分子肝素，是临床主要的肝素制剂应用形式。
[0003]0003.众所周知，不同肝素物种来源的肝素在糖链组成和理化性质上存在差异，专利申请公布号为CN106243246B和CN105131153A的专利申请文献中，公布了多种来源未分级的肝素和相应制备的低分子肝素(依诺肝素(Enoxaparin))，它们在寡糖结构组成上，有着极为显著的差异。理化性质和生物学活性上，羊源(肠粘膜)的未分级肝素和低分子肝素(依诺肝素钠)与主流药典规定的猪肠粘膜肝素或低分子肝素(依诺肝素)相近，可以符合药典除种源外的其他指标要求，而牛源的肝素(牛肺肝素和牛肠粘膜肝素)却与猪源肝素相差巨大，尤其是因子(抗
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Xa和抗
‑
IIa)活性，无法符合药典对效价的要求。因此，猪、牛和羊源肝素及低分子肝素，应为“相似但不相同”的活性药物成分。
[0004]0004.医药工业上，控制肝素来源的方法有多种：一是从供应链角度，仅使用合法食用来源的猪肠粘膜生产肝素；二是从来料控制上，利用荧光定量PCR(Quantitative Real
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time PCR，Q
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PCR)技术测定粗品肝素原料中的猪DNA和反刍DNA含量，要求反刍DNA占比在0.5％以下；三是控制肝素生产环节，防止混淆和污染；四是在成品阶段，使用核磁共振等精密分析技术，鉴别肝素物种的细微差异。
[0005]0005.以上，我们可以发现，关于肝素种源的鉴别控制，最有利的分析技术是在粗品肝素原料阶段，使用Q
‑
PCR技术分析物料的物种DNA来源，其次是在成品阶段，使用复杂的精密分析设备鉴别二糖种类的细微差异。但是，Q
‑
PCR的使用前提是物料中的DNA不能被破坏，有些肝素粗品物料在生产中，生产商会无意或有意地使用双氧水等化学试剂进行处理，其可以将物种的DNA破坏，从而不能被Q
‑
PCR技术分析出来。而作为产品的医用未分级肝素和低分子肝素，均已经被氧化处理，因此Q
‑
PCR方法不再适合用于这些肝素终端产品的肝素物种来源鉴定。而核磁共振技术，不仅是仪器设备贵重，而且肝素或低分子肝素作为大分子多糖组合物，其氢/碳信号主要堆积在一起，难以分辨，一方面要依赖于分析样品的纯度，另一方面在特征的氮
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乙酰基的甲基氢信号和硫酸化区域氢信号上，本身各物种肝素的差异已较小，因此这些细微的差别，提供的信息有限，精度也低。
[0006]0006.综上，现有分析技术不适用于纯化后的未分级肝素或低分子肝素产品的肝素种源分析，因此，迫切需要准确、高效的分析技术用作肝素种源鉴别方法。

技术实现思路

[0007]0007.本专利技术所需解决的技术问题是：提供一种未分级肝素或低分子肝素物种来源的鉴别方法，该鉴别方法能够准确、高效的鉴别未分级肝素或低分子肝素物种来源。
[0008]0008.为解决上述问题，本专利技术采用的技术方案是：所述的一种未分级肝素或低分子肝素物种来源的鉴别方法是根据表1及样品中保留有肝素亲缘特征的ΔⅠS百分比、ΔⅡA
‑Ⅱ
Sglu百分比、ΔⅠS和ΔⅡA
‑Ⅱ
Sglu二者比值，鉴别判定样品物种来源，所述的鉴别方法的步骤为：
[0009]表1.未分级肝素或低分子肝素的物种来源判断标准表
[0010][0011](1)将样品中保留有肝素亲缘特征的ΔⅠS百分比与表1中ΔⅠS百分比条目下的各未分级肝素或低分子肝素物种来源类别进行对比：
[0012]样品中保留有肝素亲缘特征的ΔⅠS百分比在44.0％
‑
86.0％范围以内的，找出样品对应的未分级肝素或低分子肝素物种来源；
[0013]样品中保留有肝素亲缘特征的ΔⅠS百分比在44.0％
‑
86.0％范围以外的，鉴别判定该样品不属于未分级肝素或低分子肝素物种；
[0014](2)在找出的样品对应的未分级肝素或低分子肝素物种所在类别下，将样品中保留有肝素亲缘特征的ΔⅡA
‑Ⅱ
Sglu百分比及ΔⅠS/ΔⅡA
‑Ⅱ
Sglu比值分别与表1中样品对应的未分级肝素或低分子肝素物种所在类别下的ΔⅡA
‑Ⅱ
Sglu百分比及ΔⅠS/ΔⅡA
‑Ⅱ
Sglu比值进行对比：
[0015]样品中保留有肝素亲缘特征的ΔⅡA
‑Ⅱ
Sglu百分比在表1中样品对应的未分级肝素或低分子肝素物种所在类别下的ΔⅡA
‑Ⅱ
Sglu百分比范围内、或者样品中保留有肝素亲缘特征的ΔⅠS/ΔⅡA
‑Ⅱ
Sglu比值在表1中样品对应的未分级肝素或低分子肝素物种所在类别下的ΔⅠS/ΔⅡA
‑Ⅱ
Sglu比值范围内，鉴别判定步骤(1)中找出的样品对应的未分级肝素或低分子肝素物种来源准确；
[0016]样品中保留有肝素亲缘特征的ΔⅡA
‑Ⅱ
Sglu百分比在表1中样品对应的未分级肝素或低分子肝素物种所在类别下的ΔⅡA
‑Ⅱ
Sglu百分比范围外，且样品中保留有肝素亲缘特征的ΔⅠS/ΔⅡA
‑Ⅱ
Sglu比值在表1中样品对应的未分级肝素或低分子肝素物种所在类别下的ΔⅠS/ΔⅡA
‑Ⅱ
Sglu比值范围外，鉴别判定样品为非纯品物种来源的肝素。
[0017]0009.ΔⅠS(肝素分析中的标准二糖之一，为ΔUA2S
‑
(1
→
4)α
‑
GlcN(NS,6S))和ΔⅡA
‑Ⅱ
Sglu(为ΔUA
‑
(1
→
4)α
‑
GlcNAc(6S)
‑
(1
→
4)β
‑
GlcA
‑
(1
→
4)α
‑
GlcN(NS,6S))是肝素糖链中最为重要的寡糖之一，其非还原端的4,5不饱和糖醛酸结构，是因肝素糖链在样品分析时因酶解或降解作用形成。
[0018]0010.ΔⅠS的结构式为：
[0019][0020]ΔUA2S
‑
(1
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种未分级肝素或低分子肝素物种来源的鉴别方法，其特征在于：根据下表未分级肝素或低分子肝素物种来源判断标准表、样品中保留有肝素亲缘特征的ΔⅠS百分比、ΔⅡA
‑Ⅱ
Sglu百分比、ΔⅠS和ΔⅡA
‑Ⅱ
Sglu二者比值，鉴别判定样品物种来源，所述的鉴别方法的步骤为：(1)将样品中保留有肝素亲缘特征的ΔⅠS百分比与未分级肝素或低分子肝素物种来源判断标准表中ΔⅠS百分比条目下的各未分级肝素或低分子肝素物种来源类别进行对比：样品中保留有肝素亲缘特征的ΔⅠS百分比在44.0％
‑
86.0％范围以内的，找出样品对应的未分级肝素或低分子肝素物种来源；样品中保留有肝素亲缘特征的ΔⅠS百分比在44.0％
‑
86.0％范围以外的，鉴别判定该样品不属于未分级肝素或低分子肝素物种；(2)在找出的样品对应的未分级肝素或低分子肝素物种所在类别下，将样品中保留有肝素亲缘特征的ΔⅡA
‑Ⅱ
Sglu百分比及ΔⅠS/ΔⅡA
‑Ⅱ
Sglu比值分别与样品对应的未分级肝素或低分子肝素物种所在类别下的ΔⅡA
‑Ⅱ
Sglu百分比及ΔⅠS/ΔⅡA
‑Ⅱ
Sglu比值进行对比：样品中保留有肝素亲缘特征的ΔⅡA
‑Ⅱ
Sglu百分比在样品对应的未分级肝素或低分子肝素物种所在类别下的ΔⅡA
‑Ⅱ
Sglu百分比范围内、或者样品中保留有肝素亲缘特征的ΔⅠS/ΔⅡA
‑Ⅱ
Sglu比值在样品对应的未分级肝素或低分子肝素物种所在类别下的ΔⅠS/ΔⅡA
‑Ⅱ
Sglu比值范围内，鉴别判定步骤(1)中找出的样品对应的未分级肝素或低分子肝素物种来源准确；样品中保留有肝素亲缘特征的ΔⅡA
‑Ⅱ
Sglu百分比在样品对应的未分级肝素或低分子肝素物种所在类别下的ΔⅡA
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Sglu百分比范围外，且样品中保留有肝素亲缘特征的ΔⅠS/ΔⅡA
‑Ⅱ
Sglu比值在样品对应的未分级肝素或低分子肝素物种所在类别下的ΔⅠS/ΔⅡA
‑Ⅱ
Sglu比值范围外，鉴别判定样品为非纯品物种来源的肝素。2.根据权利要求1所述的一种未分级肝素或低分子肝素物种来源的鉴别方法，其特征在于：样品中保留有肝素亲缘特征的ΔⅠS百分比、ΔⅡA
‑Ⅱ
Sglu百分比、ΔⅠS和ΔⅡA
‑Ⅱ
Sglu二者比值这三种数据采用酶解
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强阴离子交换
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高效液相色谱分析、酶解
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反相离子对
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高效液相色谱分析、酶解
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毛细管电泳
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高效液相色谱分析、酶...

【专利技术属性】
技术研发人员：金永生，靳彩娟，陆晓华，周华，姚瑶，肖洋，钱建根，姚亦明，
申请(专利权)人：苏州融析生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：