新型抗EGFR抗体多肽制造技术

本公开提供抗EGFR的抗体多肽、编码该多肽的多核苷酸、包含该多肽的药物组合物及其用途。

Novel anti EGFR antibody peptide

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】新型抗EGFR抗体多肽优先权声明本专利申请要求于2018年3月19日提交的PCT申请号PCT/CN2018/079487的优先权的权益。
本专利技术总体上涉及新型抗人EGFR抗体多肽。
技术介绍
EGFR属于ERBB受体络氨酸激酶超级家族。EGF结合EGFR会导致酪氨酸磷酸化以及受体与其他家族成员的二聚化，从而导致不受控制的增殖增强。EGFR在多种类型的癌症中过度表达，EGFR及其家族成员是调控癌细胞生长、信号转导、分化、粘附、迁移和生存的复杂信号级联的主要贡献者。因此，EGFR及其家族成员已成为抗癌治疗的具吸引力的候选者。美国食品和药物管理局已经批准了两款EGFR靶向的抗体，西妥昔单抗(爱必妥)和帕尼单抗(维克替比)，用于治疗多种实体癌症，包括结直肠癌、头颈癌、非小细胞肺癌、胰腺癌。这些抗体阻断配体与EGFR的结合和下游信号，从而介导抗肿瘤免疫反应。这些抗体还诱导EGFR的内化和降解，从而导致信号终止。单域抗体(sdAb)是一种包含一个单体可变抗体结构域的抗体。与全抗体一样，可以选择性结合特定抗原。单域抗体比由两条蛋白重链和两条轻链组成的常见抗体小很多。第一个单域抗体是从驼类中发现的重链抗体中设计出来的(Hamers-CastermanC,AtarhouchT,MuyldermansS,RobinsonG,HamersC,SongaEB,BendahmanN,HamersR(1993)不含轻链的天然抗体.Nature363(6428):446–448.)，这些被称为VHH片段。现在，大多数单域抗体的研究是基于重链可变结构域的。单域抗体具有很多优点。例如，它们通常展现出高的溶解度和稳定性，并且可以很轻易的在酵母、植物和哺乳动物细胞中生产(HarmsenMM,DeHaardHJ(2007)驼类单域抗体片段的特性、生产和应用.ApplMicrobiolBiotechnol77(1):13–22.)。此外，它们具有良好的热稳定性和良好的组织穿透性。并且它们还具有成本效益。单域抗体的优点使得它们适用于许多的生物技术和治疗应用。例如，它们可用于治疗疾病，包括但不限于癌症、传染性疾病、炎症和神经退行性疾病。虽然抗EGFR的抗体已经开发出来，但作为治疗药物，抗EGFR抗体仍有改进的空间。因此，本领域希望开发新的抗EGFR抗体，特别是针对EGFR的单域抗体。
技术实现思路
在本专利技术中，本公开中的冠词“一个(a)”、“一个(an)”和“这个(the)”是指该条的语法宾语中的一个或多个(即，至少一个)。例如，“一种抗体”指一种或多种抗体。本专利技术提供了新型抗EGFR单克隆抗体、其氨基酸和核苷酸序列及其用途。一方面，本专利技术提供了一种包含可特异性结合EGFR(例如人类EGFR)的重链可变结构域的抗体多肽，，其中所述重链可变结构域包含：选自由SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5和SEQIDNO:6所组成的组中1、2或3个重链互补性决定区(CDR)序列。在某些实施例中，所述重链可变结构域包括选自由以下所组成的组中的重链可变区：a)所述重链可变区，包含选自SEQIDNO:1、SEQIDNO:2和SEQIDNO:3中的1、2或3个CDR序列；以及b)所述重链可变区，包含选自SEQIDNO:4、SEQIDNO:5和SEQIDNO:6中的1、2或3个CDR序列。在某些实施例中，所述重链可变结构域包含选自由SEQIDNO:7、SEQIDNO:9、SEQIDNO:11和SEQIDNO:13所组成组中的重链可变区及其同源序列，所述同源序列具有至少80％的序列同一性，而与EGFR保持特定的结合亲和力。在某些实施例中，本公开提供的抗体多肽还进一步包含一种或多种氨基酸残基替代或修饰，而与EGFR保持特定的结合亲和力。在某些实施例中，至少一种替代或修饰是在一个或多个CDR序列中，和/或在一个或多个VH序列中，但不在任何CDR序列中。在某些实施例中，所述抗体多肽是单域抗体或重链抗体。在某些实施例中，所述重链可变结构域来源于VHH结构域。在某些实施例中，所述抗体多肽进一步包含免疫球蛋白恒定区，可选的是人Ig的恒定区，或者可选的是人IgG的恒定区。在某些实施例中，所述抗体多肽是被分离的。在某些实施例中，所述重链可变结构域是驼类源的或是人源化的。在某些实施例中，所述抗体多肽是纳米体。在某些实施例中，本公开提供的抗体多肽可特异性结合人EGFR，通过流式细胞术测定其EC50值不超过1nM。在某些实施例中，本公开提供的抗体多肽可特异性结合人EGFRvIII，通过流式细胞术测定其EC50值不超过2.5nM。在某些实施例中，本公开提供的抗体多肽可特异性结合食蟹猴EGFR，和/或鼠EGFR。在某些实施例中，本公开提供的抗体多肽与一个或多个共轭基团连接。在某些实施例中，所述共轭基团包含清除修饰剂、化学治疗剂、毒素、放射性同位素、镧系元素、发光标记、荧光标记、酶底物标记、DNA烷基化剂、拓扑异构酶抑制剂、微管蛋白粘合剂或其他抗癌药物。另一方面，本专利技术提供了一种抗体或其抗原结合片段，所述片段与前任一项权利要求所述的抗体多肽竞争相同的表位。本专利技术还提供了一种包含本公开提供的抗体多肽的药物组合物，包括抗体或其抗原结合片段，和药学可接受的载体。本专利技术还提供了一种编码本公开提供的抗体多肽的多核苷酸。在某些实施例中，本公开提供的多核苷酸包含选自由SEQIDNO:8、SEQIDNO:10、SEQIDNO:12和SEQIDNO:14所组成组中的核苷酸序列，和/或其具有至少80％序列同一性的同源序列，和/或其仅具有简并替代的变体。本专利技术还提供了一种包含本公开提供的多核苷酸的载体。本专利技术还提供了一种包含本公开提供的载体的宿主细胞。本专利技术还提供了一种表达本公开提供的抗体多肽的方法，包括在表达本公开提供的载体的条件下培养本公开提供的宿主细胞。本专利技术还提供了一种在将受益于EGFR活性调节的受试者中治疗疾病或病症的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的本公开所述抗体多肽或本公开所述的药物组合物。在某些实施例中，所述疾病或病症是EGFR相关疾病或病症。在某些实施例中，所述疾病或状况是癌症或炎症性疾病。在某些实施例中，所述癌症是结直肠癌、皮肤癌、头颈癌、非小细胞肺癌、胃肠道癌、胶质母细胞瘤、黑色素瘤、乳腺癌、宫颈癌、卵巢癌、子宫内膜癌、前列腺癌、肾癌、膀胱癌、食管癌、脑癌、肝癌、胰腺癌癌症、肝细胞癌或鳞状细胞癌，其中所述炎症性疾病为阿尔茨海默氏症、哮喘、特异反应性过敏、过敏、动脉粥样硬化、支气管哮喘、湿疹、肾小球肾炎、移植物抗宿主病、溶血性贫血、骨关节炎、银屑病、败血症、中风、组织和器官移植，血管炎、糖尿病视网膜病变或呼吸机引起的肺损伤。在某些实施例中，所述受试者是人类。...

【技术保护点】
1.一种包含特异性结合EGFR的重链可变结构域的抗体多肽，其中所述重链可变结构域包含：/n选自由SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ IDNO:6所组成的组中1、2或3个重链互补性决定区(CDR)序列。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180319 CN PCT/CN2018/0794871.一种包含特异性结合EGFR的重链可变结构域的抗体多肽，其中所述重链可变结构域包含：
选自由SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5和SEQIDNO:6所组成的组中1、2或3个重链互补性决定区(CDR)序列。


2.如权利要求1中所述的抗体多肽，其中所述重链可变结构域包含选自由以下所组成的组中的序列：
a)一个重链可变区，包含选自SEQIDNO:1、SEQIDNO:2和SEQIDNO:3中的1、2或3个CDR序列；以及
b)一个重链可变区，包含选自SEQIDNO:4、SEQIDNO:5和SEQIDNO:6中的1、2或3个CDR序列。


3.如权利要求1或2中所述的抗体多肽，其中所述重链可变结构域包含选自SEQIDNO:7、SEQIDNO:9、SEQIDNO:11和SEQIDNO:13所组成的组中的重链可变区及其同源序列，所述同源序列具有至少80％的序列同一性，而与EGFR保持特定的结合亲和力。


4.如前任一项权利要求所述的抗体多肽，进一步包含一种或多种氨基酸残基替代或修饰，而与EGFR保持特定的结合亲和力。


5.如权利要求4中所述的抗体多肽，其中至少一种替代或修饰是在一个或多个CDR序列中，和/或在一个或多个VH序列中，但不在任何CDR序列中。


6.如前任一项权利要求所述的抗体多肽，所述抗体是单域抗体或重链抗体。


7.如前任一项权利要求所述的抗体多肽，其中所述重链可变结构域来源于VHH结构域。


8.如前任一项权利要求所述的抗体多肽，进一步包含免疫球蛋白恒定区，可选的是人Ig的恒定区，或者可选的是人IgG的恒定区。


9.如前任一项权利要求所述的抗体多肽，所述抗体多肽是驼类源的或是人源化的。


10.如前任一项权利要求所述的抗体多肽，所述抗体多肽是纳米体。


11.如前任一项权利要求所述的抗体多肽，所述抗体多肽可特异性结合EGFR，通过流式细胞术测定其EC50值不超过1nM。


12.如前任一项权利要求所述的抗体多肽，所述抗体多肽可特异性结合人EGFRvIII，通过流式细胞术测定其EC50值不超过2.5nM。


13.如前任一项权利要求所述的抗体多肽，所述抗体多肽可特异性结合食蟹猴EGFR，和/或小鼠EGFR。


14.如前任一项权利要求所述的抗体多肽，所述抗体多肽与一个或多个共轭基团连接。


15.如权利要求14所述的抗体多肽，其中所述共轭基团包含清除修饰剂、化学治疗剂、毒素、放射性同位素、镧系元素、发光标记、荧光标记、酶底物标记、DNA烷基化剂、拓扑异构酶抑制剂、微管蛋白粘合剂或其他抗癌药物。


16.一种抗体多肽，与如前任一项权利要求所述的抗体多肽竞争相同的表位。


17.一种药物组合物，包含如前任...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈蕴颖，李竞，
申请(专利权)人：上海药明生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31