【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本申请一般地涉及il-2变体、包含il-2变体的融合蛋白和多肽复合物、用于生产其的方法及其用途。
技术介绍
0、专利技术背景
1、白细胞介素-2(il-2)是一种四α-螺旋束细胞因子，被鉴定为t细胞的生长因子，参与许多免疫细胞的生长和增殖[morgan da，ruscetti fw，and gallo r.selective invitro growth of t lymphocytes from normal human bone marrows.science 1976；193：1007-1008]。il-2主要由激活的t细胞产生。il-2的生物活性由三个跨膜受体亚基介导：il-2rα(cd25)、il-2rβ(cd122)和共同γ链(cd132)。nk细胞和稳态t细胞表达il-2rβ和γ，并且只有调节性t细胞(treg)和激活的t细胞除il-2rβ和γ以外还表达il-2rα。il-2rα促进il-2向其他2个亚基的递送，并且il-2rβ/γ通过stat5相关途径转导激活信号。treg和激活的t细胞上的il-2rα/β/γ三聚体作为il-2的高亲和力受体发挥作用(kd～10-11m)，并且il-2rβ/γ(在nk细胞和稳态t细胞上)是中等亲和力受体(kd～10-9m)[takeshita t，asaoh，ohtani k，et al.cloning of the gamma chain of the human il-2receptor.science1992；257：379-382]。高亲和力受体对于以较低浓度
2、已经在各种临床试验中测试了il-2及其变体。il-2在癌症免疫疗法中显示出良好的功效，但其毒性特征限制了其功效和应用。重组il-2显示出短半衰期和严重的副作用，如血管渗漏综合征(vls)。已经开发了il-2变体来减轻这些问题，然而它们遇到了包括降低的功效或升高的免疫原性在内的问题。
3、近年来，使用抗pd(l)1抗体等免疫检测点抑制剂和其他免疫调节药物的癌症免疫疗法取得了突破性进展。然而，相当一部分癌症患者仍然对现有的癌症免疫疗法具有抗性或难治性。il-2作为一种t细胞和nk细胞调节性细胞因子，有可能增强现有疗法诱导的应答，所述现有疗法如对检查点(pd1、pd-l1、ctla4、lag-3等)或肿瘤相关抗原的治疗性抗体(利妥昔单抗(rituximab)、曲妥珠单抗(trustuzumab)、达雷木单抗(daratumumab)等)。
4、treg细胞在维持免疫稳态和自身耐受方面发挥着关键作用，在控制过敏和自身免疫性疾病的发展方面至关重要。il-2能够通过高亲和力il-2受体的信号传导来诱导treg细胞的增殖。因此，用il-2疗法扩增treg群体有可能平衡和限制炎症性疾病中的致病性t细胞。目前，il-2疗法正在针对炎症性疾病的临床试验中进行测试，包括移植物抗宿主病、1型糖尿病和系统性红斑狼疮[yec，brand d和zheng s.g.targeting il-2：an unexpectedeffect in treating immunological diseases.sig transduct target ther 2018]。然而，现有的il-2分子仍然具有快速清除和潜在毒性的缺陷。
5、因此，治疗性il-2仍需进一步探索和优化，以生成具有强大功效和有限毒性的理想药物分子。基于il-2的疗法可以满足免疫肿瘤学和自身免疫性疾病治疗领域的巨大医疗需求。
6、本公开提供了效力降低的il-2变体及其il-2融合蛋白，其可作为具有改善的治疗功效的新型免疫治疗剂。
技术实现思路
0、专利技术概述
1、本公开提供了这些和其他目的，在广义上涉及提供具有改善功效的蛋白质的化合物、方法、组合物和制品。本公开提供的益处广泛适用于治疗和诊断领域，并且可以联合与多种靶标反应的抗体来使用。
2、本专利技术涉及人il-2变体、包含il-2变体的融合蛋白和多肽复合物。本文用独特的方法对il-2进行工程化，以产生对il-2rβ/γc、il-2rα或两者以及组合的il-2rα/β/γc复合物的亲和力减弱的变体。尽管被减弱，所述il-2变体仍然保留对il-2rα、il-2rβ/γc和组合的il-2rα/β/γc复合物的结合能力。与对il-2rα或il-2rβ/γc相比，il-2变体可对il-2rα/β/γc复合物具有更高的亲和力。
3、所述il-2变体表现出不同的效力和毒性。因此，所述il-2变体可以作为癌症和自身免疫性疾病的新型免疫治疗剂，作为独立疗法或与其他治疗选择相组合。此外，il-2变体可以作为自身免疫和其他炎症性疾病的免疫调节剂。
4、在一些方面，本公开提供了il-2变体，其中il-2变体对il-2ra、il-2rβ和共同γ链中的至少一种具有经修饰的或降低的结合亲和力，并且具有与seq id no：1所示的氨基酸序列相比包含一个或多个突变的氨基酸序列，所述突变选自c末端截短、在位置28处的取代、在位置32处的取代、在位置38处的取代、在位置42处的取代、在位置52处的取代、在位置72的取代、在位置76处的取代、在位置78处的取代、在位置82处的取代、在位置110处的取代、在位置111处的取代、在位置122处的取代、在位置125处的取代、在位置127处的取代、在位置128处的取代和在位置129处的取代及其任意组合。
5、在一些实施方案中，c末端截短选自1至20个氨基酸的截短，例如20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸的截短。
6、在一些实施方案中，在位置28处的取代选自由以下组成的组：i28a、i28e、i28g、i28v、i28f、i28m、i28w、i28p、i28q、i28k、i28s、i28t、i28n、i28d、i28r、i28h、i28l和i28y。
7、在一些实施方案中，在位置32处的取代选自由以下组成的组：k32a、k32e、k32g、k32v、k32f、k32m、k32w、k32p、k32q、k32i、k32s、k32t、k32n、k32d、k32r、k32h、k32l和k32y。
8、在一些实施方案中，在位置38处的取代选自由以下组成的组：r38w、r38f、r38y、r38a、r38v、r38g、r38s、r38t、r38l、r38i、r38h、r38k、r38q、r38n、r38d、r39e、r38m和r38p。
9、在一些实施方案中，在位置42处的取代选自由以下组成的组：f42g、f42v、f42i、f42m、f42w、f42p、f42q、f42k、f42a、f42s、f42t、f42e、f42n、f42d、f42r、f42h、f42l和f42y。
10、在一些本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种白细胞介素-2(IL-2)变体，其中所述IL-2变体对IL-2Rα、IL-2Rβ和共同γ链中的至少一种具有经修饰的结合亲和力，并且具有与SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列相比包含C末端截短的氨基酸序列。
2.权利要求1的IL-2变体，其中所述C末端截短选自1至20个氨基酸的截短，例如20、15、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸的截短。
3.权利要求1或2的IL-2变体，其中所述氨基酸序列与SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列相比，进一步包含一个或多个取代。
4.权利要求3的IL-2变体，其中所述取代选自在位置28处的取代、在位置32处的取代、在位置38处的取代、在位置42处的取代、在位置52处的取代、在位置76处的取代、在位置78处的取代、在位置82处的取代、在位置110处的取代、在位置111处的取代、在位置122处的取代、在位置125处的取代、在位置127处的取代、在位置128处的取代、在位置129处的取代及其任意组合。
5.权利要求4的IL-2变体，其中所述取代选自：
6.权利要求1或2
7.权利要求1-5中任一项的IL-2变体，其中所述IL-2变体的氨基酸序列选自：
8.权利要求1-5中任一项的IL-2变体，其中所述IL-2变体的氨基酸序列选自：
9.前述权利要求中任一项的IL-2变体，其中对IL-2Rα、IL-2Rβ和共同γ链中的至少一种的结合亲和力是通过SPR或通过FACS结合分析来测量的。
10.一种融合蛋白，其包含与非IL-2部分可操作地连接的前述权利要求中任一项的IL-2变体。
11.权利要求10的融合蛋白，其中非IL-2部分选自PEG、脂质、Fc区、人血清白蛋白(HSA)和抗HSA部分，例如Fc区。
12.权利要求10-11中任一项的融合蛋白，其为单体、二聚体或多聚体。
13.权利要求12的融合蛋白，其包含两条氨基酸链，其中：
14.权利要求13的融合蛋白，其中所述融合蛋白中包含的IL-2变体具有相同或不同的氨基酸序列。
15.权利要求13或14的融合蛋白，其中所述Fc区是IgG1、IgG2、IgG4Fc区、接枝的Fc区或其变体。
16.一种多肽复合物，其包含IL-2部分、抗原结合部分和Fc区，其中：
17.权利要求16的多肽复合物，其包含两条重链和一条轻链，其中所述抗原结合部分是Fab，并且
18.权利要求16的多肽复合物，其包含两条链，其中所述抗原结合部分是VHH，并且
19.权利要求16的多肽复合物，其包含两条重链和两条轻链，其中所述抗原结合部分是Fab，并且
20.权利要求16的多肽复合物，其包含两条链，其中所述抗原结合部分是VHH，并且
21.权利要求16的多肽复合物，其包含两条重链和两条轻链，其中所述抗原结合部分是Fab，并且
22.权利要求16的多肽复合物，其包含两条链，其中所述抗原结合部分是VHH或scFv，以及
23.权利要求16-22中任一项的多肽复合物，其中所述抗原结合部分特异性结合靶抗原，所述靶抗原选自PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、LAG3、TIM-3、TIM4、4-1BB、OX-40、OX-40L、GITR、A2aR、TIGIT、CD96、PVRIG、CD226、5T4、VISTA、VSIG3、VSIG4、ICOS、CD28、CD3、CD4、CD8、CD45、CD44v6、CD27、CD47、SIRPAα、SLAMF7、CD24、Siglec10、Siglec15、Siglec8、VSIR、VSIG4、PSGL-1、C5AR1、BTN1A1、BTN3A1、CD70、RANKL、CSF1R、CSF2RB、TNFRSF1/1a/1b、BDCA2、BTLA、C5aR、NKG2A、NKG2D、NKp30、NKp46、CD16a、CD56、CD166、FCGR3、CD2、Neurophilin-1、CCR8、CCR2、CCR4、CCR5、CCR6、CCR7、CCR8、GCGR、CXCR2、CXCR4、CXCR5、CALCRL、ETAR、GLP1R、CX3CR1、GPR1、GPR17、GPR20、GPR30、GPR34、GPR-65、GPCR78、GPRC5D、GPR84、LGR4、LGR5、VEGF、VEGFR、HER2、HER3、Trop2、pCA...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种白细胞介素-2(il-2)变体，其中所述il-2变体对il-2rα、il-2rβ和共同γ链中的至少一种具有经修饰的结合亲和力，并且具有与seq id no:1所示的氨基酸序列相比包含c末端截短的氨基酸序列。
2.权利要求1的il-2变体，其中所述c末端截短选自1至20个氨基酸的截短，例如20、15、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸的截短。
3.权利要求1或2的il-2变体，其中所述氨基酸序列与seq id no:1所示的氨基酸序列相比，进一步包含一个或多个取代。
4.权利要求3的il-2变体，其中所述取代选自在位置28处的取代、在位置32处的取代、在位置38处的取代、在位置42处的取代、在位置52处的取代、在位置76处的取代、在位置78处的取代、在位置82处的取代、在位置110处的取代、在位置111处的取代、在位置122处的取代、在位置125处的取代、在位置127处的取代、在位置128处的取代、在位置129处的取代及其任意组合。
5.权利要求4的il-2变体，其中所述取代选自：
6.权利要求1或2的il-2变体，其中所述il-2变体的氨基酸序列选自seq id no:2-10所示的氨基酸序列以及具有至少95％同一性的其同源序列。
7.权利要求1-5中任一项的il-2变体，其中所述il-2变体的氨基酸序列选自：
8.权利要求1-5中任一项的il-2变体，其中所述il-2变体的氨基酸序列选自：
9.前述权利要求中任一项的il-2变体，其中对il-2rα、il-2rβ和共同γ链中的至少一种的结合亲和力是通过spr或通过facs结合分析来测量的。
10.一种融合蛋白，其包含与非il-2部分可操作地连接的前述权利要求中任一项的il-2变体。
11.权利要求10的融合蛋白，其中非il-2部分选自peg、脂质、fc区、人血清白蛋白(hsa)和抗hsa部分，例如fc区。
12.权利要求10-11中任一项的融合蛋白，其为单体、二聚体或多聚体。
13.权利要求12的融合蛋白，其包含两条氨基酸链，其中：
14.权利要求13的融合蛋白，其中所述融合蛋白中包含的il-2变体具有相同或不同的氨基酸序列。
15.权利要求13或14的融合蛋白，其中所述fc区是igg1、igg2、igg4fc区、接枝的fc区或其变体。
16.一种多肽复合物，其包含il-2部分、抗原结合部分和fc区，其中：
17.权利要求16的多肽复合物，其包含两条重链和一条轻链，其中所述抗原结合部分是fab，并且
18.权利要求16的多肽复合物，其包含两条链，其中所述抗原结合部分是vhh，并且
19.权利要求16的多肽复合物，其包含两条重链和两条轻链，其中所述抗原结合部分是fab，并且
20.权利要求16的多肽复合物，其包含两条链，其中所述抗原结合部分是vhh，并且
21.权利要求16的多肽复合物，其包含两条重链和两条轻链，其中所述抗原结合部分是fab，并且
22.权利要求16的多肽复合物，其包含两条链，其中所述抗原结合部分是vhh或scfv，以及
23.权利要求16-22中任一项的多肽复合物，其中所述抗原结合部分特异性结合靶抗原，所述靶抗原选自pd-1、pd-l1、pd-l2、ctla-4、lag3、tim-3、tim4、4-1bb、ox-40、ox-40l、gitr、a2ar、tigit、cd96、pvrig、cd226、5t4、vista、vsig3、vsig4、icos、cd28、cd3、cd4、cd8、cd45、cd44v6、cd27、cd47、sirpaα、slamf7、cd24、siglec10、siglec15、siglec8、vsir、vsig4、psgl-1、c5ar1、btn1a1、btn3a1、cd70、rankl、csf1r、csf2rb、tnfrsf1/1a/1b、bdca2、btla、c5ar、nkg2a、nkg2d、nkp30、nkp46、cd16a、cd56、cd166、fcgr3、cd2、neurophilin-1、ccr8、ccr2、ccr4、ccr5、ccr6、ccr7、ccr8、gcgr、cxcr2、cxcr4、cxcr5、calcrl、etar、glp1r、cx3cr1、gpr1、gpr17、gpr20、gpr30、gpr34、gpr-65、gpcr78、gprc5d、gpr84、lgr4、lgr5、vegf、vegfr、her2、her3、trop2、pcad、erα、egfr、de2-7 egfr、egfrviii、psma、psca、psa、tag-72、sez6、sez6l、sez6l2、sema4d、dll3、gd2、gpc3、klb、klrb1、klrg1、gpc1、pcsk9、epcam、p-钙粘蛋白、caludin 6、caludin 18.2、fgfr2b、fgfr3、fgfr4、muc1、muc13、muc16、muc17、mucl3、folra、tfr、tf、tfr、tfpi、c-met、ny-eso-1、gucy2c、liv-1、整联蛋白αvβ6、整联蛋白α10β1、整联蛋白α3、整联蛋白α5β4、整联蛋白αvβ3、整联蛋白αvβ8、ror1、ror2、prlr、ptk7、b7-h3、连接素-4、netg1、ax1、cd147、lrrc15、napi2b、steap1、ly6g6d、lypd1、macro、mertk、mica、micb、msln、mkars、g12d、cdh3、cdh6、cdh17、apla2、caix、cd46、cd47、cldn6、epha3、fucosyl-gm1、itga3、激肽释放酶、misrii、足糖萼蛋白、ron、robo1、pauf、pla2、足糖萼蛋白、prlr、ptk7、tm4sf1、tmeff2、treakr、trem-1、trem-2、uparap、tyrp1、kaag1、ru2as、cd146、cd63、内皮糖蛋白、globo h、igf-1r、tem1、tem8、tax1bp3、adam-9、enpp3、epha2、epha3、fcrh5、napi3b、tweak、dlk1、sort1、sstr2、steap1、cd25、cd39、garp、lrrc33、lair1、lamp3、lap、lepr、lilrb1、lilrb2、lilrb4、rage、...
【专利技术属性】
技术研发人员：吴磊，徐建清，孙蒙蒙，王爽，顾继杰，
申请(专利权)人：上海药明生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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