人源化的抗-CXCR5抗体、其衍生物及它们的应用制造技术

本发明专利技术涉及与CXCR5特异性结合并能例如抑制CXCR5功能的人源化抗体。本发明专利技术还包括该抗体治疗或预防与CXCR5相关的疾病或障碍的用途。

【技术实现步骤摘要】
人源化的抗-CXCR5抗体、其衍生物及它们的应用本申请为2008年8月27日提交的、专利技术名称为“人源化的抗-CXCR5抗体、其衍生物及它们的应用”的PCT申请PCT/US2008/074381的分案申请，所述PCT申请进入中国国家阶段的日期为2010年4月27日，申请号为200880113572.3。专利
本专利技术涉及抗CXCR5的抗体及其在改善、治疗或预防哺乳动物包括人类的疾病或障碍中的用途，这些疾病或障碍源自不适宜的CXCR5活性或代谢或者例如病原体对CXCR5活性或代谢的不恰当或不正常的使用。目的抗体可阻断配体例如CXCL13与其受体例如CXCR5的结合。本专利技术还披露了含有目的抗体及其衍生物的预防、免疫治疗和诊断组合物，以及它们在预防或治疗哺乳动物包括人类的疾病的方法中的用途，这些疾病是由CXCR5+细胞例如B淋巴细胞的不适宜的代谢和/或活性引起的。这类疾病包括由炎症引起或以炎症为特征的自身免疫缺陷和疾病，例如其中CXCR5发生上调的类风湿性关节炎(RA)。专利技术背景CXCR5也被称为伯基特淋巴瘤受体(BLR1)、CD185、MDR15和MGC117347。它是G蛋白偶联受体，也是CXC趋化因子受体家族的成员。其中一个配体是BLC，也称为CXCL13，它是B细胞的化学引诱物。未加工的CXCR5前体长度为372个氨基酸，分子量为42KD。CXCR5参与了B细胞在特定解剖间隔内的迁移和定位。基因敲除的小鼠缺乏外周淋巴结，具有较少的派伊尔斑和降低的B细胞水平。专利技术概述本专利技术提供了特异结合CXCR5的新的人源化和人抗体以及它们的片段和衍生物。一部分所述抗体及其CXCR5结合片段经改造可防止链内二硫键的形成，从而产生在体内生产和使用过程中稳定的分子。其它目的抗体经改造可使与FcR的结合最小化。某些令人感兴趣的CXCR5抗体与CXCL13竞争结合CXCR5。其它抗体降低CXCR5活性。本专利技术包括所述抗体的可变重链和轻链的氨基酸序列及其对应的核酸序列。本专利技术的另一实施方案包括所述抗体的互补决定区(CDR)序列，以得到包括一个或多个CDR区域或源自CDR的区域的结合分子，它们保留了母体分子结合CXCR5的能力，其中CDR得自母体分子。目的抗体可以是防止CXCL13或其它配体结合到CXCR5+细胞例如B细胞的抗体。本专利技术的另一实施方案包括携带有本专利技术所述抗体序列的细胞系和载体。本专利技术的另一实施方案是所述抗体在制备用于治疗与CXCR5功能和代谢有关的疾病和障碍的药物或组合物中的用途。本专利技术的另一实施方案是这些抗体在治疗与非典型或异常的CXCR5生物学和功能相关的障碍中的用途。本文还叙述了其它特点和优点，将在以下的专利技术详述中显现。专利技术详述本专利技术不局限于本文所述的具体方法学、实验方案、细胞系、载体或试剂，这是因为它们可发生变动，而不偏离本专利技术的精神和范围。而且，本文所使用的术语仅为了举例说明具体实施方案的目的，并非意在限制本专利技术的范围。除非另有定义，否则本文所使用的所有技术和科学术语和任何首字母缩略词的含义与本专利
普通技术人员通常理解的含义相同。实施本专利技术时可使用任何与本文所述类似或等同的方法和材料，本文仅叙述了示例性的方法、设备和材料。出于叙述和披露可能与本专利技术一同使用和可能在本专利技术中使用的所报道的蛋白质、酶、载体、宿主细胞和方法学的目的，本文所提及的所有专利和出版物都整体引入本文作为参考。但是，本文任何部分都不能理解为承认以下观点：由于先前的专利技术而使本专利技术无权声称早于这些披露内容。在教导制备和使用CXCR5相关的方法和目的产物之前，提供了一些术语和短语的下列非限制性定义来指导技术人员。“CXCR5”涉及在淋巴细胞、尤其是B细胞、特别是原初B细胞中天然存在的已知分子；涉及从这些细胞分离出的分子；涉及使用已知材料和方法并使用编码CXCR5的核酸经重组制备的分子；以及涉及CXCR5的某些部分，例如胞外(EC)结构域，其保留了与实施本专利技术有关的特点和性质，例如结合CXCL13。可溶的CXCR5分子可基本上由CXCR5的EC区域组成，一般包括该分子的前60个氨基酸，即CXCR5的氨基末端部分。CXCR5是非混杂受体。CXCL13是CXCR5的配体，在基底细胞例如滤泡树突状细胞和淋巴组织中为组成型表达。CXCL13特异吸引B细胞和一个T细胞的小亚组(其称为B辅助性滤泡T细胞(TFH))。考虑到免疫系统中的T细胞和B细胞群体之间有许多互相作用，这点可能并不出人意料。而且，活化的T细胞诱导或上调CXCR5表达。已发现淋巴细胞浸润到三级异位生发中心(GC)与预先具有这类非典型的淋巴结样结构的某些疾病的病情加重和耐受崩溃紧密相关。使用体内鼠模型，例如CXCR5-/-和CXCL13-/-小鼠，受体或配体的缺失导致GC精细结构由于T细胞和B细胞定位改变和可能的互相作用而发生变化。这些小鼠还可受到保护，防止发生严重的胶原诱导的关节炎(CIA)。由于CXCR5选择性地在与RA发病相关的成熟B细胞上表达，阻断该受体可调节受累个体的致关节炎的反应。使用生物制品(即抗TNFα和抗CD20抗体，利妥昔单抗)治疗类风湿性关节炎已表现为临床有效，具体而言，接受B细胞导向疗法的患者的临床体征和症状表现出长期改善。选择性地靶向于仅在成熟B细胞和B辅助性T细胞上表达的CXCR5，不会影响B细胞的发育或使患者免疫力受损。与利妥昔单抗不同的是，本专利技术抗体是不介导细胞毒性的中和抗体。“CXCR5疾病”是一种疾病、障碍、症状、异常等，其特征或诱因是CXCL13或其它CXCR5的配体过表达或水平升高、B细胞水平升高、B细胞活性水平升高、CXCR5水平升高或CXCR5代谢或活性异常。所谓“B细胞活性”是指高于正常B细胞水平，其可以是局部的，或是某种生物现象或B细胞功能的表现，例如抗体表达、Bruton酪氨酸激酶的存在或活性、CD19的表达或存在、B细胞活化因子的表达或存在等。就抗体链多肽序列而言，短语“基本相同”可理解为具有与参照多肽序列至少70％、80％、90％、95％或更多的序列同一性的抗体链。就核酸序列而言，该术语可理解为具有与参照核酸序列至少85％、90％、95％、97％或更高的序列同一性的核苷酸序列。术语“同一性”或“同源性”是指将候选序列中核苷酸碱基或氨基酸残基与相应序列进行比较，经序列比对和引入间隔(若有必要的话)以实现整段序列的最大相同百分数并且不把任何保守性取代视为序列同一性的一部分后，二者碱基或残基相同的比例。无论N端或C端延伸或插入均不应理解为降低同一性或同源性。用于比对的方法和计算机程序均可获得，并为本领域所熟知。可使用序列分析软件测定序列同一性。短语和术语抗体或抗原的“功能片段、变异体、衍生物或类似物”等以及它们的形式是具有与全长的目的抗体或抗原的生物活性性质相同的化合物或分子。例如，抗CXCR5抗体的功能片段或类似物是可结合CXCR5分子的片段或类似物，或是可防止或大幅降低配体例如CXCL13或激动本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.编码抗体的分离核酸，其中所述抗体特异性结合人CXCR5的胞外结构域，其中所述核酸包含编码多肽的核苷酸序列，其中所述多肽包含：/n(a)包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链可变结构域,和包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的重链可变结构域；/n(b)氨基酸序列RSSKSLLHSSGKTYLY(SEQ ID NO:58),RMSNLAS(SEQ ID NO:59),MQHLEYPYT(SEQ ID NO:60),GFSLIDYGVN(SEQ ID NO:61),VIWGDGTTY(SEQ ID NO:62),和IVY(SEQ ID NO:63):/n(c)包含SEQ ID NO:13,SEQ ID NO:14,或SEQ ID NO:15的氨基酸序列的轻链可变结构域,和包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列的重链可变结构域；/n(d)氨基酸序列RSSKSLLHSSGKTYLY(SEQ ID NO:58),RLSNLAS(SEQ ID NO:64),MQHLEYPYT(SEQ ID NO:60),GFSLIDYGVN(SEQ ID NO:61),VIWGDGTTY(SEQ ID NO:62),和IVY(SEQ ID NO:63)；/n(e)氨基酸序列RSSKSLLHSSGKTYLY(SEQ ID NO:58),RLSSNLAS(SEQ ID NO:65),MQHLEYPYT(SEQ ID NO:60),GFSLIDYGVN(SEQ ID NO:61),VIWGDGTTY(SEQ ID NO:62),和IVY(SEQ ID NO:63)；/n(f)包含SEQ ID NO:17,SEQ ID NO:19,或SEQ ID NO:21的氨基酸序列的可变轻链(VL),和包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的可变重链(VH)；/n(g)包含SEQ ID NO:30,SEQ ID NO:31,或SEQ ID NO:32的氨基酸序列的可变轻链,和包含SEQ ID NO:33或SEQ ID NO:34的氨基酸序列的可变重链；/n(h)氨基酸序列RSSKSLLHSSGKTYLY(SEQ ID NO:58), RMSNLA(SEQ ID NO:66),MQHLEYPYT(SEQ ID NO:60),GFSLIDYGVN(SEQ ID NO:61),VIWGDGTTY(SEQ ID N:62),和IVY(SEQ ID NO:63)；/n(i)氨基酸序列RSSKSLLHSSGKTYLY(SEQ ID NO:58),RLSNLA(SEQ ID NO:67),MQHLEYPYT(SEQ ID NO:60),GFSLIDYGVN(SEQ ID NO:61),VIWGDGTTY(SEQ ID NO:62),和IVY(SEQ ID NO:63)；/n(j)氨基酸序列RSSKSLLHSSGKTYLY(SEQ ID NO:58),RLSSLA(SEQ ID NO:68),MQHLEYPYT(SEQ ID NO:60),GFSLIDYGVN(SEQ ID NO:61),VIWGDGTTY(SEQ ID NO:62),和IVY(SEQ ID NO:63)；/n(k)包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列的可变轻链,和包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列的可变重链；/n(l)包含SEQ ID NO:39,SEQ ID NO:41,或SEQ ID NO:43的氨基酸序列的可变轻链,和包含SEQ ID NO:45或SEQ ID NO:47的氨基酸序列的可变重链；/n(m)包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列的可变轻链,和包含SEQ ID NO:56或SEQ ID NO:57的氨基酸序列的可变重链；或/n(n)氨基酸序列RSSKSLLHSSGKTYLYW(SEQ ID NO；69),RMSNLA(SEQ ID NO:66),MQHLEYPYT(SEQ ID NO:60),GFSLIDYGVN(SEQ ID NO:61),VIWGDGTTY(SEQ ID NO:62),和IVY(SEQ ID NO:63)。/n...

【技术特征摘要】
20070829 US 60/968,7921.编码抗体的分离核酸，其中所述抗体特异性结合人CXCR5的胞外结构域，其中所述核酸包含编码多肽的核苷酸序列，其中所述多肽包含：
(a)包含SEQIDNO:11的氨基酸序列的轻链可变结构域,和包含SEQIDNO:12的氨基酸序列的重链可变结构域；
(b)氨基酸序列RSSKSLLHSSGKTYLY(SEQIDNO:58),RMSNLAS(SEQIDNO:59),MQHLEYPYT(SEQIDNO:60),GFSLIDYGVN(SEQIDNO:61),VIWGDGTTY(SEQIDNO:62),和IVY(SEQIDNO:63):
(c)包含SEQIDNO:13,SEQIDNO:14,或SEQIDNO:15的氨基酸序列的轻链可变结构域,和包含SEQIDNO:16的氨基酸序列的重链可变结构域；
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(j)氨基酸序列RSSKSLLHSSGKTYLY(SEQIDNO:58),RLSSLA(SEQID...

【专利技术属性】
技术研发人员：R·李，V·米克尔，E·阿兰，N·鲁特施，B·卡莫隆，T·奥利吉诺，N·鲍里恩，
申请(专利权)人：塞诺菲安万特股份有限公司，
类型：发明
国别省市：法国;FR