一种重组人组织型纤溶酶原激活剂的表达纯化方法技术

本发明专利技术提供了一种重组人组织型纤溶酶原激活剂的表达纯化方法，所述的表达纯化方法包括：通过自诱导培养系统诱导原核系统表达人组织型纤溶酶原激活剂蛋白质分子；利用丝氨酸蛋白酶亲和层析柱纯化原核系统表达的重组人组织型纤溶酶原激活剂；利用稀释透析技术对人组织型纤溶酶原激活剂蛋白质分子进行复性。本发明专利技术提供的重组人组织型纤溶酶原激活剂的表达纯化方法操作简单，成本低，蛋白质表达量大，蛋白产率高。

【技术实现步骤摘要】
一种重组人组织型纤溶酶原激活剂的表达纯化方法
本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种重组人组织型纤溶酶原激活剂的表达纯化方法。
技术介绍
组织型纤溶酶原激活剂又称组织型纤溶酶原激活物(tissue-typeplasminogenactivator，t-PA)或纤溶酶原激活因子(tissueplasminogenactivator)，是体内纤溶系统的生理性激动剂，在人体纤溶和凝血的平衡调节中发挥着关键性的作用。t-PA属于糖蛋白中的丝氨酸蛋白酶类，是人体特有的蛋白质，由527个氨基酸组成，其中包括35个半胱氨酸残基，它们参与形成17个二硫键，能够专一水解纤溶酶原，形成纤溶酶，激活纤溶系统，对于清除血管内不溶性纤维蛋白，保证血液循环畅通起重要作用，药用t-PA能高效地预防和治疗急性心肌梗死等血栓性疾病。目前对组织型纤溶酶原激活剂的研究多侧重于其突变体的研究，如CN103159860，CN107177611，CN103509772等，且以真核表达居多，如CN101717430，CN1468862。在现有技术中存在细胞株筛选困难，时间长，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种重组人组织型纤溶酶原激活剂的表达纯化方法，其特征在于，所述的表达纯化方法包括：通过自诱导培养诱导原核系统表达人组织型纤溶酶原激活剂蛋白质分子；/n所述的表达纯化方法还包括：利用丝氨酸蛋白酶亲和层析柱纯化原核系统表达的重组人组织型纤溶酶原激活剂；/n所述的表达纯化方法还包括：利用稀释透析技术对人组织型纤溶酶原激活剂蛋白质分子进行复性。/n

【技术特征摘要】
1.一种重组人组织型纤溶酶原激活剂的表达纯化方法，其特征在于，所述的表达纯化方法包括：通过自诱导培养诱导原核系统表达人组织型纤溶酶原激活剂蛋白质分子；
所述的表达纯化方法还包括：利用丝氨酸蛋白酶亲和层析柱纯化原核系统表达的重组人组织型纤溶酶原激活剂；
所述的表达纯化方法还包括：利用稀释透析技术对人组织型纤溶酶原激活剂蛋白质分子进行复性。


2.根据权利要求1所述的重组人组织型纤溶酶原激活剂的表达纯化方法，其特征在于，所述的自诱导培养基为ZYM-5052自诱导培养基，所述的ZYM-5052自诱导培养基为中性培养基，包括以下成分：








氮源N-Z-amine(％)
1-2


酵母提取物(％)
0.5-1


Na2HPO4(mM)
20-30


KH2PO4(mM)
20-30


NH4Cl(mM)
4-60


Na2SO4(mM)
3-6


MgSO4(mM)
1-3


甘油(％)
0.4-0.8


葡萄糖(％)
0.04-0.06


乳糖(％)
0.1-0.4






。


3.根据权利要求1所述的重组人组织型纤溶酶原激活剂的表达纯化方法，其特征在于，所述的丝氨酸蛋白酶亲和层析柱为BenzamidineSepharose4FF亲和层析柱。


4.根据权利要求1所述的重组人组织型纤溶酶原激活剂的表达纯化方法，其特征在于，所述的稀释透析技术为根据t-PA分子的摩尔消光系数计算初步纯化的蛋白质浓度，以BufferD稀释为0.1-0.3mg/mL，装入干...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄俊杰，王静，陈诗，熊心磊，邓霞飞，
申请(专利权)人：武汉人福药业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42