【技术实现步骤摘要】
一种高活性高产的小牛皱胃凝乳酶及基因与菌株和应用
本专利技术属于基因工程
，更具体地，涉及一种高活性高产的小牛皱胃凝乳酶及编码基因、重组表达载体、重组表达菌株，以及它们的制备方法和应用。
技术介绍
凝乳酶是可使乳液凝结的一类酶的总称。主要应用于乳酪的制作中。完全意义上的凝乳酶最早在小牛皱胃中发现。它是一种天冬氨酸蛋白酶，可专一地切割乳中κ-酪蛋白的Phe105-Met106之间的肽键，破坏酪蛋白胶束结构并形成稳定的副κ-酪蛋白及亲水性糖肽。当κ-酪蛋白被水解后，在钙离子存在下通过κ-酪蛋白分子胶束表面亚基之间以疏水键和胶体磷酸钙相互作用的方式连接在一起而形成乳液的凝固体。凝乳酶是乳酪生产必须的酶种，被广泛地应用于奶酪和酸奶的制作，在乳制品用酶中占首要地位，其产值约占整个酶制剂总产值的15.0％。传统上，凝乳酶专指来源于未断奶小牛皱胃粘膜的一种蛋白酶。但由于乳制品行业对凝乳酶的需求量巨大，而资源又极为缺乏，因此，其它来源的且能使乳液凝结的蛋白酶均可称为凝乳酶。目前，凝乳酶的主要来源有：①动物源凝乳酶。凝乳酶最早来...
【技术保护点】
1.一种高活性高产的小牛皱胃凝乳酶BoCHY，其特征在于，所述凝乳酶BoCHY的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。/n
【技术特征摘要】
1.一种高活性高产的小牛皱胃凝乳酶BoCHY，其特征在于，所述凝乳酶BoCHY的氨基酸序列如SEQIDNO：1所示。
2.一种凝乳酶基因bochy，用于编码权利要求1所述的凝乳酶，其特征在于，所述凝乳酶基因bochy的碱基序列与SEQIDNO：2所示的碱基序列具有95％以上的同一性，优选地，所述凝乳酶基因bochy的碱基序列如SEQIDNO：2所示。
3.权利要求2所述的凝乳酶基因bochy的获取方法，其特征在于，包括如下步骤：通过定点突变的方法将原始凝乳酶第201位的丝氨酸突变为天冬酰胺，第267位的甲硫氨酸突变为赖氨酸，第271位的苏氨酸突变为脯氨酸。
4.一种重组表达载体，其特征在于，包括如权利要求2所述的凝乳酶基因bochy。
5.权利要求4所述的重组表达载体的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
将权利要求2所述的凝乳酶基因bochy分别用限制性内切酶EcoRI和NotI双酶切，得到具有粘性末端的凝乳酶基因bochy片段；
将毕赤酵母表达载体...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨江科，张柳群，刘桂子，
申请(专利权)人：武汉轻工大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42
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