一种显著提升斑块消化制备高质量单细胞悬液的方法技术

本发明专利技术公开了一种显著提升单细胞悬液质量的动脉斑块消化的方法，包括胶原蛋白水解酶Ⅰ、胶原蛋白水解酶Ⅱ、胶原蛋白水解酶Ⅳ、胶原蛋白水解酶Ⅺ、氯化钙、脱氧核糖核酸酶I、磷酸缓冲盐溶液、牛血清白蛋白溶液、RPMI 1640细胞培养液。本发明专利技术同时公开了其在消化斑块组织中的应用前景。本发明专利技术主要针对斑块组织进行消化处理而发明专利技术，通过几种酶的组合，可将斑块组织消化成为活性比例较高单细胞悬液，在单细胞基础上研究斑块组织的生物学反应，从而避免出现存在许多钙化细胞碎片、组织杂质等影响单细胞测序上机或后续数据分析结果的情况。

【技术实现步骤摘要】
一种显著提升斑块消化制备高质量单细胞悬液的方法
本专利技术涉及斑块消化的方法领域，具体涉及斑块组织消化的方法以制备高质量单细胞悬液及其应用。
技术介绍
《中国心血管病报告2018》显示，中国心脑血管疾病患病率及死亡率仍处于持续上升阶段，心脑血管疾病死亡在居民疾病死亡构成中居首位。目前，心脑血管疾病已成为重大的公共卫生问题，而动脉粥样硬化的控制与心脑血管疾病的防治息息相关。动脉粥样硬化是心脑血管疾病的主要病理基础，高血压、吸烟和高同型半胱氨酸血症等危险因素均会引起机体产生动脉粥样硬化，甚至由于母体的高胆固醇血症，最早在胎儿主动脉中就能观察到动脉粥样硬化的初级状态“脂质条纹”，动脉粥样硬化的发病机制是多因素的，因此，要实现斑块逆转、延缓发病进程极为复杂。随着科学研究技术的不断更新，尤其在生命科学领域，新的研究方法迭代推陈出新，现在研究过程中需要将动脉斑块组织消化成单细胞悬液，以便通过单细胞测序的方法，分析斑块组织里细胞分类、细胞分群、细胞亚群、细胞表型转换、细胞迁移等，揭示动脉粥样硬化发生发展过程中的时空信息。在单个细胞群体水平上进行分析研究，可以本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种酶组合，其特征在于，所述酶组合包含：胶原蛋白水解酶Ⅰ、胶原蛋白水解酶Ⅱ、胶原蛋白水解酶Ⅳ、胶原蛋白水解酶Ⅺ；/n优选地，胶原蛋白水解酶Ⅰ、胶原蛋白水解酶Ⅱ、胶原蛋白水解酶Ⅳ、胶原蛋白水解酶Ⅺ的浓度比例是1：1：1：1；/n更优选地，所述酶组合包含脱氧核糖核酸酶Ⅰ。/n

【技术特征摘要】
1.一种酶组合，其特征在于，所述酶组合包含：胶原蛋白水解酶Ⅰ、胶原蛋白水解酶Ⅱ、胶原蛋白水解酶Ⅳ、胶原蛋白水解酶Ⅺ；
优选地，胶原蛋白水解酶Ⅰ、胶原蛋白水解酶Ⅱ、胶原蛋白水解酶Ⅳ、胶原蛋白水解酶Ⅺ的浓度比例是1：1：1：1；
更优选地，所述酶组合包含脱氧核糖核酸酶Ⅰ。


2.一种消化液，包含权利要求1所述的酶组合。


3.根据权利要求2所述的消化液，其特征在于，所述消化液包含RPMI1640细胞培养液。


4.根据权利要求3所述的消化液，其特征在于，所述消化液的酶组合中胶原蛋白水解酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅺ浓度均为1mg/mL，脱氧核糖核酸酶I浓度为200U/mL。


5.根据权利要求4所述的消化液，其特征在于，所述消化液包含氯化钙。


6.根据权利要求4所述的消化液，其特征在于，所述消化液中氯化钙终浓度为10mM。


7.一种消化颈动脉斑块的方法，其特征在于，所述方法包括使用权利要求1所述的酶组合或使用权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱尚明，吉训明，张永彪，石小峰，成军，裴葆青，谷涌泉，刘会生，
申请(专利权)人：北京航空航天大学，
类型：发明
国别省市：北京;11