【技术实现步骤摘要】
一种从人血浆中纯化人凝血因子Ⅶ的方法
本专利技术涉及生物工程
,尤其涉及一种从人血浆中纯化人凝血因子Ⅶ的方法。
技术介绍
凝血因子是参与血液凝固过程的蛋白质组分,血浆中参与血液凝固的凝血因子有十几种,其中,人凝血因子Ⅶ是外源性凝血途径中引发凝血联级反应的起始因子,是由肝细胞合成的维生素K依赖性具有丝氨酸蛋白酶水解作用的酶原。人凝血因子Ⅶ除治疗凝血因子Ⅶ缺乏症之外在血友病患者治疗中也被广泛研究应用,目前,血友病患者治疗正面临严峻的挑战,由于长期输注凝血因子产品的患者中高达20%患者对凝血因子Ⅷ或凝血因子Ⅸ产生凝血因子抑制物。从上世纪临床研究发现,以血浆为原料的人凝血酶原复合物(PCC)能有效治疗产生抑制物的患者;1996年由NOVONordiskA/B推出了活化重组凝血因子Ⅶ在欧洲上市,用于产生凝血因子Ⅶ或凝血因子Ⅸ抑制物的血友病患者及出血紊乱症患者的治疗,两种药物在临床应用上具有良好的治疗效果且副作用极低。人凝血因子Ⅶ临床上常用于血友病人及创伤性出血患者,随着医保范围的逐渐扩大,凝血因子Ⅶ药物用量将不断增长,人凝血因子Ⅶ较稳定,但在制备过程中,又包括病毒灭活或去除的方法,导致凝血因子Ⅶ的效价下降。因此,如何提供一种能够提高人凝血因子Ⅶ比活,提高血浆利用率,降低污染的人凝血因子Ⅶ制备工艺,成为本领域技术人员首要解决的技术问题。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种人凝血因子Ⅶ制备工艺,提高人凝血因子Ⅶ比活,提高血浆利用率,降低污染,以更好的解决
技术介绍
指出的问题。为了实现 ...
【技术保护点】
1.一种从人血浆中纯化人凝血因子Ⅶ的方法,其特征在于,包括以下步骤:/n(1)去冷胶血浆/n将新鲜冰冻血浆融化,在0-3℃的温度环境下连续离心,去除冷胶,上清即为去冷胶血浆,然后对去冷胶血浆进行过滤,得到澄清的去冷胶血浆;/n(2)第一次阴离子交换层析/n将过滤后得到的去冷胶血浆进行第一次阴离子交换层析,使含Ⅶ因子的目的蛋白吸附在阴离子凝胶填料柱中,用谷氨酸钠洗脱液将吸附在凝胶填料中的含Ⅶ因子的目的蛋白解吸附,得到含人凝血因子Ⅶ粗品,再用盐洗去除结合在填料上的非目的Ⅶ因子蛋白质,得到洗脱收集液;/n(3)洗脱液过滤、调节制品电导率、pH值/n将第一次阴离子交换层析得到的含人凝血因子Ⅶ洗脱液的pH值调整为6.50~7.50,电导率值调整为12~17mS/cm,并且进行过滤,过滤后得到第二次阴离子交换层析样品;/n(4)第二次离子交换层析/n将第二次阴离子交换层析样品进行TMAE凝胶层析,使含Ⅶ因子的蛋白吸附在TMAE凝胶填料柱中,用不同离子强度溶液洗脱下来。/n
【技术特征摘要】
1.一种从人血浆中纯化人凝血因子Ⅶ的方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)去冷胶血浆
将新鲜冰冻血浆融化,在0-3℃的温度环境下连续离心,去除冷胶,上清即为去冷胶血浆,然后对去冷胶血浆进行过滤,得到澄清的去冷胶血浆;
(2)第一次阴离子交换层析
将过滤后得到的去冷胶血浆进行第一次阴离子交换层析,使含Ⅶ因子的目的蛋白吸附在阴离子凝胶填料柱中,用谷氨酸钠洗脱液将吸附在凝胶填料中的含Ⅶ因子的目的蛋白解吸附,得到含人凝血因子Ⅶ粗品,再用盐洗去除结合在填料上的非目的Ⅶ因子蛋白质,得到洗脱收集液;
(3)洗脱液过滤、调节制品电导率、pH值
将第一次阴离子交换层析得到的含人凝血因子Ⅶ洗脱液的pH值调整为6.50~7.50,电导率值调整为12~17mS/cm,并且进行过滤,过滤后得到第二次阴离子交换层析样品;
(4)第二次离子交换层析
将第二次阴离子交换层析样品进行TMAE凝胶层析,使含Ⅶ因子的蛋白吸附在TMAE凝胶填料柱中,用不同离子强度溶液洗脱下来。
2.根据权利要求1所述的一种从人血浆中纯化人凝血因子Ⅶ的方法,其特征在于,所述步骤(1)和步骤(3)中,过滤时用孔径为0.22um的滤芯进行过滤。
3.根据权利要求1所述的一种从人血浆中纯化人凝血因子Ⅶ的方法,其特征在于,所述步骤(2)中,第一次阴离子交换层析用的交换凝胶为UniGel-80Q。
4.根据权利要求1所述的一种从人血浆中纯化人凝血因子Ⅶ的方法,其特征在于,所述步骤(2)包括第一次阴离子交换层析的层析前准备:用含0.01mol/L~0.02mol/L枸橼酸钠和0.1mol/L~0.15mol/L氯化钠的缓冲液平衡凝胶填料,缓冲液的pH为6.80~7.80,处理后,待上样。
5.根据权利要求1所述的一种从人血浆中纯化人凝血因子Ⅶ的方法,其特征在于,所述步骤(2)中,在层析前,对过滤后的血浆进行处理,调整血浆电导率10~13mS/cm、pH值为7.00~...
【专利技术属性】
技术研发人员:肖岚,张海梦,李凯旋,滕世超,张宝献,张建璀,刘余江,
申请(专利权)人:华兰生物工程重庆有限公司,
类型:发明
国别省市:重庆;50
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