人凝血因子VIIa的纯化方法技术

本发明专利技术提供一种人凝血因子VIIa的纯化方法，采用阴离子交换层析，阴离子交换层析，疏水层析三步纯化，以及灭活病毒和除病毒过滤步骤，制备获得纯度、活性及安全性满足药用要求的人凝血因子VIIa。

【技术实现步骤摘要】
人凝血因子VIIa的纯化方法
本专利技术涉及生物医药
，具体涉及一种人凝血因子VIIa的纯化方法。
技术介绍
人凝血因子VII(FVII)是一种维生素K依赖的丝氨酸蛋白酶，其可以启动外源性凝血途径或通过活化人凝血因子IX而参与内源性凝血途径。FVII在肝脏中合成并分泌到血液中，以分子量大约为50,000Da的单链糖蛋白(酶原)形式在血液中循环。FVII酶原在位点R152-I153处被蛋白酶水解，生成由一个二硫键连接的双链分子，从而转变为活性形式FVIIa。临床研究表明，FVIIa对血小板减少症和血小板功能障碍、严重创伤、大面积外科手术的止血具有令人满意的治疗效果。早期的人凝血因子VII制剂以新鲜冰冻血浆为原料，经过硫酸钡吸附并通过多步层析纯化制得，随着DEAE-SephadexA-50凝胶的应用，逐步转变为以A-50凝胶吸附为主，经多步层析纯化制备。由于血浆中人凝血因子VII的含量极低，通常为200～400ng/ml，使得人凝血因子VII的制备非常困难，并且成本极高；同时血浆提取制备工艺复杂，批间差异较大，稳定性较差；另外，以血浆本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种人凝血因子VIIa的纯化方法，包括依次进行的以下步骤：/n1)阴离子交换层析；/n2)灭活病毒；/n3)阴离子交换层析；/n4)疏水层析；/n5)除病毒过滤；/n6)超滤换液；/n7)除菌过滤获得原液。/n

【技术特征摘要】
20190425 CN 20191033815781.一种人凝血因子VIIa的纯化方法，包括依次进行的以下步骤：
1)阴离子交换层析；
2)灭活病毒；
3)阴离子交换层析；
4)疏水层析；
5)除病毒过滤；
6)超滤换液；
7)除菌过滤获得原液。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括依次进行的以下步骤：
1)阴离子交换层析；
2)对步骤1)所得产物进行病毒灭活；
3)采用阴离子交换层析进一步纯化步骤2)所得产物；
4)采用疏水层析进一步纯化步骤3)所得产物；
5)对步骤4)所得产物进行除病毒过滤；
6)对步骤5)所得产物进行超滤换液；
7)对步骤6)所得产物进行除菌过滤获得原液。


3.根据权利要求1-2任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤1)中采用阴离子交换层析从细胞收获液中捕获目的蛋白，该步阴离子交换层析可选地包括(a)平衡阴离子交换材料，(b)淋洗阴离子交换材料，和(c)洗脱阴离子交换材料。


4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中采用S/D法进行病毒灭活。


5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤3)可选地包括(a)平衡阴离子交换材料，(b)淋洗阴离子交换材料，和(c)洗脱阴离子交换材料，其中平衡...

【专利技术属性】
技术研发人员：秦宇，陈梅梅，胡宏飞，刘世萍，刘翔，张入仁，魏京楠，张永波，姚跃，
申请(专利权)人：正大天晴药业集团股份有限公司，正大天晴药业集团南京顺欣制药有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32