一种检测单纯疱疹病毒I型IgM抗体的化学发光试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种检测单纯疱疹病毒Ⅰ型ＩｇＭ抗体的化学发光试剂盒，包括阴性、阳性对照品，抗人μ链单克隆抗体包被的固相载体，中和抗原，酶标记的单纯疱疹病毒Ⅰ型抗体，化学发光底物液和浓缩洗涤液。其中，所述的酶为碱性磷酸酶，所述的化学发光底物液含有１，２－二氧乙烷类衍生物。使用本发明专利技术试剂盒检测单纯疱疹病毒Ⅰ型ＩｇＭ抗体，操作简便，灵敏度高，特异性好，与其他检测方法检验结果相符合。本发明专利技术还公开了一种检测单纯疱疹病毒Ⅰ型ＩｇＭ抗体的化学发光试剂盒的制备方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及免疫分析医学领域，更具体地说，涉及一种一企测单纯疱渗病 毒I型IgM抗体的化学发光试剂盒及其制备方法。
技术介绍
单纯疱渗病毒(HSV)属于疱渗病毒的一种。该病毒的中心为DNA， 外有162个壳微粒组成衣壳，呈20面体，周围有含脂质的包膜，病毒颗粒 大小为150-200 nm。根据血清学、流行病学特点，单纯疱瘆病毒分为HSV-I 和HSV-II两型。临床表现以皮肤粘膜单纯疱渗病毒感染较常见，尤以唇单 纯疱渗、生殖器疱渗为代表。原发感染后，机体最先出现免疫球蛋白M (IgM),随后出现免疫球蛋 白A (IgA)及免疫球蛋白G (IgG)。抗体能防止病毒播散，但不能阻止复 发。检出特异性IgM阳性或双份血清特异性IgG抗体效价上升四倍或四倍以 上，可提示HSV近期感染。HSV主要引起疱渗性口腔炎、疱渗性角膜结膜炎、疱渗性脑膜炎、疱瘆 性外阴阴道炎、湿疹性疱渗、新生儿疱渗等。生殖器官以外部位的HSV感 染多由HSV-I型引起(占95%),而生殖器官的HSV感染，主要由HSV-II型 引起(占78%)。 IgM抗体阳性提示近期有HSV感染。IgG抗体阳性(效价无 变化)，说明既往感染过，且有一定免疫力。孕早期感染HSV者可导致流产，妊娠中、晚期感染者，可引起胎儿和 新生儿发病。单纯疱疹病毒抗体的检测方法主要有放射免疫分析法，荧光免疫分析法和酶联免疫分析法等。放射免疫分析虽然高灵敏、高特异，但存在有效期短、 具有放射性污染的缺点。荧光免疫分析法虽然特异性强、每丈感性高、速度快， 但非特异性染色问题尚未完全解决，结果判定的客观性不足，程序也比较复 杂。酶联免疫分析虽然灵牵文度高、特异性强，但存在内源性酶干扰、底物大 部分有毒或为致癌物质等缺点。化学发光免疫分析(Chemiluminescence Immunoassay, CLIA)是近十年 来在世界范围内发展非常迅速的非放射性免疫分析，是继放射免疫分析和酶 免疫分析之后发展起来的 一种超高灵敏度的微量测定技术。化学发光免疫分 析将抗原与抗体的高特异性免疫反应与高灵敏的化学发光检测技术相结合， 将化学发光物质标记抗原或抗体，再进行免疫结合反应，即可进行定性、定 量测定。该方法具有高灵敏度、检测范围宽、操作简便快速、标记物稳定、 无污染、仪器简单经济等优点。它是放射性免疫分析与普通酶免疫分析理想 的取代者，是目前免疫定量分析最理想的方法。用化学发光免疫分析方法4企测单纯疱渗病毒I型IgM抗体的原理是，将 待测样品加入到包被有抗人u链单克隆抗体的白色不透明微孔板中，随后加 入中和抗原与待测样品中的IgM抗体特异性结合，再加入酶标记的中和抗原 特异抗体形成固相抗人ia链单克隆抗体-IgM抗体-抗原-酶标抗体复合物，洗 涤去除未反应的游离成分。然后，加入上述酶的发光底物液，利用化学反应 释放的自由能激发中间体发光，从而检测样品中待测分子浓度。人免疫球蛋白的重链具有抗原特异性，其中IgM的重链为ji链亚型。特 异性IgM抗体的升高可作为近期感染的指标，因此IgM抗体的检出具有很 重要的临床意义。抗人n链单克隆抗体多用于捕获法检测IgM抗体，包被于 固相载体上，结合样品中的所有IgM。一般采用戊二醛偶联法将标记酶与抗体偶联。通过其醛基分别与酶和免 疫球蛋白上的氨基共价结合。待标记的抗体用戊二醛偶联法与碱性磷酸酶偶联，对磷酸緩沖液(PBS)充分透析，加入等体积甘油，-20。C以下保存备 用。一^:采用方阵法确定中和抗原和酶标抗体的浓度。待确定浓度的组分按 方阵以不同稀释度加入到固相包被载体中，根据相对发光强度(RLU)选择 适宜的浓度。试剂盒试剂中，常用的防腐剂有proclin300、 NaN3、硫柳汞等。 现有市场上检测单纯疱渗病毒I型IgM抗体的试剂盒多为酶联免疫分析 试剂盒，反应终止液为硫酸，具有腐蚀性，同时还存在内源性酶干扰、底物 大部分有毒或为致癌物质的缺点，吸光度的检测也易受到划痕等多种外在因 素的影响。
技术实现思路
为了克服酶联免疫分析受多种外在因素干扰、检测灵敏度低，底物大部 分有毒的不足，本专利技术提供了一种检测单纯疱渗病毒I型IgM抗体的化学发 光试剂盒，包含阴性、阳性对照品，抗人M链单克隆抗体包被的固相载体， 中和抗原，酶标记的单纯疱渗病毒I型抗体，化学发光底物液和浓缩洗涤液。 其中，所述的酶为石威性磷酸酶，所述的化学发光底物液含有1,2-二氧乙烷类 书亍生物。使用该试剂盒检测单纯疱渗病毒I型IgM抗体，操作简便，灵敏度高， 特异性好，与其他检测方法检验结果相符合。在上述技术方案的基础上，本专利技术还可以做如下改进 所述化学发光底物液含有(金刚烷)-l,2-二氧乙烷、3-(2'-螺旋金刚烷)-4-曱氧基_4—(3'-磷酰氧基)苯基-l、 2-二氧乙烷(AMPPD)、 3-(2'-(5"-氯)螺旋金 刚烷)_4-曱氧基-4-(3"-磷酰氧基)苯-1,2-二氧杂环丁烷(CSPD)或3-(2'-(5"-氯)螺旋金刚烷)-4-曱氧基-4-(3"-磷酰氧基-5"-氯)苯-l,2-二氧杂环丁烷(CDP-Star )。0.15-0.25 mol/L 16% (w/v) 0.4% (w/v) 0.1% ( v/v或w/v 1.5 ~ 4.0% ( v/v)，在上述技术方案的基础上，本专利技术还可以做如下改进 所述化学发光底物液含有Tris-HCl緩冲液NaClKC1防腐剂AMPPD、 CSPD或CDP-Star 其pH为7.0 ~ 7.5在上述技术方案的基础上，本专利技术还可以做如下改进所述化学发光底物液含有Tris-HCl緩冲液 0.15 ~ 0.25 mol/LNaCl 16% (w/v)KC1 0.4% (w/v)防腐剂 0.1% (v/v或w/\AMPPD 1.5 ~ 4% ( v/v)，其pH为7.0 ~ 7.5在上述技术方案的基础上，本专利技术优选优选方案为 所述化学发光底物液含有Tris- HC1NaClKC1proclin 300 ( SUPELCO ^>司生产) AMPPD0.2 mol/L 16% ( w/v) 0.4% (w/v) 0.1% (v/v) 2% ( v/v )，其pH为7.2在上述技术方案的基础上，本专利技术还可以做如下改进 所述的浓缩洗涤液含有NaCl 16% ( w/v)Tween-20 1% ( v/v )Tris-HCl緩沖液 0.2 mol/L,其pH为7.0 ~ 7.5本专利技术还提供了 一种检测单纯疱瘆病毒I型IgM抗体的化学发光试剂盒 的制备方法，包括以下步骤A、 阴性、阳性对照品的制备阴性对照品HSV-I IgM阴性人血清，56°C 1小时灭活，除菌过滤， 2-8。C保存。阳性对照品已确定的高滴度HSV-I IgM阳性人血清，56。C 1小时灭活 后，用含10% (v/v)新生牛血清，0.1% (v/v)防腐剂，pH7.2的0.02mol/L Tris-HCl緩冲液稀释，稀释比例为1:150， 2-8。C保存。B、 酶标记的单纯疱渗病毒I型抗体的制备酶标记的单纯疱渗病毒I型抗体的制备单纯疱渗病毒I型抗体用戊二 醛偶联法与碱性磷酸酶偶联，对0.01mol/L磷酸盐緩冲液充分透析，加入等 体积甘油，-20。C以下保存备用本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测单纯疱疹病毒Ｉ型ＩｇＭ抗体的化学发光试剂盒，包含阴性、阳性对照品，抗人μ链单克隆抗体包被的固相载体，中和抗原，酶标记的单纯疱疹病毒Ｉ型抗体，化学发光底物液和浓缩洗涤液，其特征在于，所述的酶为碱性磷酸酶，所述的化学发光底物液含有１，２－二氧乙烷类衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋冰飞，应希堂，宋胜利，胡国茂，郑金来，唐宝军，于尚永，
申请(专利权)人：北京科美东雅生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]