检测单纯疱疹病毒I型抗体IgG的免疫胶体金试剂及制备方法技术

检测单纯疱疹病毒Ｉ型抗体ＩｇＧ的免疫胶体金试剂及制备方法，该试剂包括样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫和ＰＶＣ背衬，ＰＶＣ背衬一端依次粘附样品垫、结合垫，中间粘附硝酸纤维素膜，另一端粘附吸水垫。结合垫上包被了蛋白Ａ（或兔抗人ＩｇＧ）—胶体金标记物。硝酸纤维素膜上包被了单纯疱疹病毒Ｉ型特异性表面膜抗原和鸡抗蛋白Ａ（或羊抗兔ＩｇＧ）。该试剂是一种特异性强、敏感性高、简易快速、费用低廉、能现场检测，全过程只需３０分钟，操作人员无需专业培训，按说明书即可完成操作。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种检测抗体的免疫胶体金试剂，还涉及该试剂的制备方法。
技术介绍
现有用于检测单纯疱疹病毒I型抗体IgG的方法主要有酶联免疫吸附、放射免疫试验、免疫胶体金渗滤法、免疫印迹试验(WBA)等。酶联免疫吸附(EIA)方法的缺陷是需要专门的仪器设备如酶标仪来配合使用；检测操作人员需要经过专业培训；操作过程相对比较复杂，检测所需时间比较长；检测所需费用较高，不能实现单人份检测。免疫胶体金渗滤法的缺陷是操作过程相对比较复杂，不能实现一步操作；试剂需要低温保存；检测所需费用较高；检测所需时间比胶体金免疫层析法要长。放射免疫试验的缺陷是操作人员需要经过专业培训；操作过程复杂，要求高；试剂需要低温保存；由于试验涉及到放射性同位素，试验不是很安全，所以很少采用；检测费用较高；检测所需时间长。免疫印迹试验(WBA)的缺陷是操作人员需要经过专业培训；操作过程复杂，要求高；试剂需要低温保存；目前尚无商品化的HSV血清抗体的蛋白印迹检测试剂盒面世，这种方法仅限于某些专业实验室中进行；检测费用高；检测所需时间长。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了克服当前技术在推广使用中存在的缺陷，提供一种不需要特定仪器设备辅助的检测试剂，并且能有效地降低检测成本，减轻需检测人员的负担。同时提供该试剂的制备方法。，该试剂包括结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫和PVC背衬，PVC背衬一端依次粘附样品垫、结合垫，中间粘附硝酸纤维素膜，另一端粘附吸水垫。结合垫上包被了蛋白A(或兔抗人IgG)—胶体金标记物。硝酸纤维素膜上包被了单纯疱疹病毒I型特异性表面膜抗原和鸡抗蛋白A(或羊抗兔IgG)，具体由标记用的是蛋白A还是兔抗人IgG来决定。如果用蛋白A来标记胶体金，则用鸡抗蛋白A来作为控制线；如果用兔抗人IgG来标记胶体金，则用羊抗兔IgG来作为控制线。该试剂的制备方法包括以下步骤(1)制备兔抗人IgG提取人抗血清免疫家兔，纯化后得兔抗人IgG(如果使用蛋白A，直接购买)；(2)制备多克隆抗体用单纯疱疹病毒I型特异性表面膜抗原多次免疫家兔，提取抗血清免疫山羊，纯化后得羊抗兔IgG；(3)制备胶体金用柠檬酸三钠等还原剂将氯金酸还原成20nm～40nm的胶体金颗粒；(4)制备单克隆抗体胶体金标记将胶体金与蛋白A(或兔抗人IgG)按1∶0.005～0.015(ml/mg)比例混匀，使胶体金与蛋白A(或兔抗人IgG)形成稳定的胶体颗粒，通过纯化浓缩形成蛋白A(或兔抗人IgG)—胶体金标记物；(4)将蛋白A(或兔抗人IgG)胶体金标记物包被在胶体金结合垫上，将抗单纯疱疹病毒I型特异性表面膜抗原和鸡抗蛋白A(羊抗兔IgG)包被在硝酸纤维素膜的检测区和控制区，充分干燥。本专利技术的积极效果在于价格低廉，生产流程简单，成本低，检测的费用比使用其它检测方法都要便宜得多；检测速度快，全过程只需30分钟，可以实现自我检测；可以现场检测；特异性好、灵敏度高、重复性好；操作简便，快速定性，结果准确、快速，操作简便，无需冲洗过程和标准对照，可分批或单个样品及时检测；易于推广使用，操作人员无需专业培训，按说明书即可完成操作。具体实施例方式将PVC背衬一端依次粘附样品垫、结合垫，中间粘附硝酸纤维素膜，另一端粘附吸水垫。结合垫上包被了蛋白A(或兔抗人IgG)—胶体金标记物。硝酸纤维素膜上包被了单纯疱疹病毒I型特异性表面膜抗原和鸡抗蛋白A(或羊抗兔IgG)，具体由标记用的是蛋白A还是兔抗人IgG来决定。如果用蛋白A来标记胶体金，则用鸡抗蛋白A来作为控制线；如果用兔抗人IgG来标记胶体金，则用羊抗兔IgG来作为控制线。按以下步骤制备(1)制备兔抗人IgG提取人抗血清免疫家兔，纯化后得兔抗人IgG(如果使用蛋白A，直接购买)；(2)制备多克隆抗体用单纯疱疹病毒I型特异性表面膜抗原多次免疫家兔，提取抗血清免疫山羊，纯化后得羊抗兔IgG；(3)制备胶体金将100ml 0.01％氯化金用0.9ml 1％柠檬酸三钠还原成40nm大小的颗粒；(4)制备蛋白A--胶体金标记物用0.1mol/LK2CO3将胶体金溶液的pH值调至6.5左右，将胶体金溶液与单克隆抗体按100ml胶体金溶液中加入0.8mg蛋白A的比例混合均匀，使胶体金与抗体形成稳定的胶体金复合物，再通过多次离心、弃上清、清洗，通过纯化浓缩形成兔抗人IgG—胶体金标记物，冷藏备用；(5)用Biodot点膜机将蛋白A胶体金标记物喷涂在胶体金结合垫上，将抗单纯疱疹病毒I型特异性表面膜抗原和鸡抗蛋白A喷涂在硝酸纤维素膜的检测区和控制区，充分干燥；(6)将硝酸纤维素膜、胶体金结合垫、样品垫、吸水垫等依次粘在PVC背衬上；(7)将粘好的PVC材料切成一定宽度的试剂条，即制成检测单纯疱疹病毒I型抗体IgG的免疫胶体金试剂。在检测前先将样本和试剂条(板)放在室温条件下放置一段时间(10分钟)，使其恢复至室温；从铝箔袋中取出检测试剂条，按MARK线下箭头所示的方向将试剂条浸入样本溶液中，液面不得超过MARK线，5秒～8秒后取出，平放在操作台上；如果是试剂板从铝箔袋中取出检测试剂板，平放在操作台上，往加样孔中滴加3滴(约120ul)样品溶液(血清)；3分钟～15分钟内即可判断结果，30分钟后判断的结果为无效。结果判断如果样品中有要检测的“单纯疱疹病毒I型抗体IgG”存在，则检测线处出现红色条带，同时质控线上也出现红色条带，此时结果为阳性；如果样品中没有要检测的“单纯疱疹病毒I型抗体IgG”存在，则检测线处无条带出现，但质控线上出现红色条带，此时结果为阴性。如果质控线上没有红色条带出现，则产品无效。权利要求1.，该试剂包括样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫和PVC背衬，PVC背衬一端依次粘附样品垫、结合垫，中间粘附硝酸纤维素膜，另一端粘附吸水垫，其特征在于结合垫上包被了蛋白A(或兔抗人IgG)—胶体金标记物，硝酸纤维素膜上包被了单纯疱疹病毒I型特异性表面膜抗原和鸡抗蛋白A(或羊抗兔IgG)。2.根据权利要求1所述的，其特征在于该试剂的制备方法包括以下步骤(1)制备兔抗人IgG提取人抗血清免疫家兔，纯化后得兔抗人IgG(如果使用蛋白A，直接购买)；(2)制备多克隆抗体用单纯疱疹病毒I型特异性表面膜抗原多次免疫家兔，提取抗血清免疫山羊，纯化后得羊抗兔IgG；(3)制备胶体金用柠檬酸三钠等还原剂将氯金酸还原成20nm～40nm的胶体金颗粒；(4)制备单克隆抗体胶体金标记将胶体金与蛋白A(或兔抗人IgG)按1∶0.005～0.015(ml/mg)比例混匀，使胶体金与蛋白A(或兔抗人IgG)形成稳定的胶体颗粒，通过纯化浓缩形成蛋白A(或兔抗人IgG)—胶体金标记物；(4)将蛋白A(或兔抗人IgG)—胶体金标记物包被在胶体金结合垫上，将抗单纯疱疹病毒I型特异性表面膜抗原和鸡抗蛋白A(羊抗兔IgG)包被在硝酸纤维素膜的检测区和控制区，充分干燥。全文摘要，该试剂包括样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫和PVC背衬，PVC背衬一端依次粘附样品垫、结合垫，中间粘附硝酸纤维素膜，另一端粘附吸水垫。结合垫上包被了蛋白A(或兔抗人IgG)—胶体金标记物。硝酸纤维素膜上包被了单纯疱疹病毒I型特异性表面膜抗原和鸡抗蛋白A(或羊抗兔IgG)。该试剂是一种特异性强、敏感性高、简易快速、费用本文档来自技高网...

【技术保护点】
检测单纯疱疹病毒Ⅰ型抗体ＩｇＧ的免疫胶体金试剂及制备方法，该试剂包括样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫和ＰＶＣ背衬，ＰＶＣ背衬一端依次粘附样品垫、结合垫，中间粘附硝酸纤维素膜，另一端粘附吸水垫，其特征在于结合垫上包被了蛋白Ａ（或兔抗人ＩｇＧ）－胶体金标记物，硝酸纤维素膜上包被了单纯疱疹病毒Ⅰ型特异性表面膜抗原和鸡抗蛋白Ａ（或羊抗兔ＩｇＧ）。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张少恩，
申请(专利权)人：湖州瑞泽生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：33[中国|浙江]