本发明专利技术涉及新的人肿瘤抗原细胞膜蛋白ＤＥＲＬＩＮ－１以及其在筛选和／或制备用于治疗和／或诊断肿瘤的药物中的用途。其中，ＤＥＲＬＩＮ－１蛋白作为新的肿瘤治疗靶蛋白，其特征在于其作为肿瘤诊断和／或治疗中的靶蛋白的高效性以及特异性。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及新的人肿瘤抗原细胞膜蛋白DERLIN-1 、其结合配体 以及它们在筛选和/或制备用于治疗和/或诊断肿瘤的药物中的用途。
技术介绍
肿瘤是人类最常见的疾病之一，其死亡率在世界和我国的各种疾 病中分别排在第二位和第三位，严重影响着人类的健康。在我国随着 社会的发展，肿瘤的发病率还在逐年上升。我国目前有肿瘤患者约 450万人，死亡率在30%以上，而且每年新增的患者人数高达200万 人以上。有效地医治肿瘤已是科学研究中的当务之急。临床治疗肿瘤 的方法主要是手术切除和放、化疗，但是，放、化疗在杀死癌细胞的 同时，给人体正常细胞也带来了严重的损伤。此外，目前治疗恶性肿 瘤的手术，放疗，化疗三大常规治疗手段并没有明显的降低肿瘤的死 亡率，其5年生存率仅达10-30e/。，因此全世界各国均在始终不懈的 探索，力图寻找出更有效的治疗手段。随着对肿瘤研究的不断深入， 人们开始尝试采用生物方法针对肿瘤发展进程中的不同层面进行治 疗并且已经取得了一定效果，肿瘤的生物靶向治疗必将成为最有前景 和最活跃的领域。肿瘤的靶向治疗很重要，"靶向"是肿瘤治疗中必须遵守的原则， 高效、准确地命中肿瘤这个"耙"，实现有的放矢是肿瘤治疗的关键所 在。因此，找到高效、特异的靶点是肿瘤生物靶向治疗的关键。目前， 已经公开报道了一些肿瘤治疗耙点，它们或者参与了肿瘤的生长过 程，或者在肿瘤的转移、耐药性的诱导的过程中发挥作用，并且针对4所述的靶点也设计了一些新的药物，例如针对CD20分子的抗体类抗 淋巴瘤靶向药物Rituxan，针对EGFR的小分子化合物类抗肺癌耙向药 物Iressa。但是，目前开发的抗肿瘤药物对临床的需要来说仍然是远 远不够的，因此仍然亟需发展更多的抗体类抗肿瘤药物。现有技术中显示DERLIN-1是位于细胞内质网膜上的蛋白，它参 与了内质网内部错误折叠蛋白向胞浆中转运的过程(Yihong Yel, Yoko Shibatal, Chi Yun2， David Ron2 & Tom A. Rapoportl. A membrane protein complex mediates retro-translocation from the ER lumen into the cytosol NATURE. 2004; (429): 841-847)。由于人们仅仅 发现DERLIN-1位于内质网膜，且没有如上所述肿瘤靶标方面的研究， 因此目前本领域均认为该蛋白不能用作肿瘤治疗的靶点。
技术实现思路
本专利技术基于以下新发现DERLIN-1位于肿瘤的细胞膜上，并且 参与肿瘤的生长过程，因此可以作为肿瘤诊断和/或治疗中的靶点。一方面，本专利技术涉及细胞膜蛋白形式的DERLIN-1及其制备，其 中DERLIN-1蛋白的序列为SEQIDNO:l。另一方面，本专利技术涉及细胞膜DERLIN-1蛋白作为新的肿瘤诊断 和/或治疗耙点的用途。具体地，本专利技术的细胞膜DERLIN-1蛋白可 以作为肿瘤靶蛋白用来筛选用于治疗肿瘤的药物。本专利技术还涉及DERLIN-1蛋白结合配体，其在制备肿瘤诊断剂和 /或治疗药物中的用途，以及包含抗DERLIN-1蛋白的单克隆抗体的 肿瘤诊断剂和/或治疗药物。具体地，所述DERLIN-1蛋白结合配体 是抗DERLIN-1蛋白的单克隆抗体，其可获自稳定分泌抗DERLIN-1 单克隆抗体的杂交瘤细胞克隆HEC252/9F12，所述杂交瘤细胞于2007 年11月2日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号CGMCC No. 2242。此外，本专利技术还涉及利用DERLIN-1蛋白结合配体诊断和/或治 疗肿瘤的方法。附图说明图1显示DERLIN-1蛋白的氨基酸序列(SEQIDNO: 1)。 图2显示用DERLIN-1蛋白多克隆抗体通过免疫组化方法检测肿瘤组织及配对的癌旁正常组织中DERLIN-1蛋白表达情况。图3和4分别显示用活细胞免疫荧光法检测肿瘤细胞和正常永生化细胞中DERLIN-1蛋白基因的亚细胞定位的结果。图5显示用激光共聚焦法检测DERLIN-1蛋白在肿瘤细胞膜表面的表达的结果。图6显示用DERLIN-1蛋白多克隆抗体通过免疫组化方法检测正 常人体组织中DERLIN-1蛋白表达情况。图7是DERLIN-1蛋白多克隆抗体体内分布实验，显示DERLIN-1 蛋白特异分布于肿瘤细胞表面，而不在正常组织细胞表面图8是DERLIN-1蛋白单克隆抗体体内显影的分子影像学实验， 耙向DERLIN-1蛋白的抗体在荷瘤小鼠的显像可以确定肿瘤的部位 及大小。具体实施例方式根据本专利技术的第一个方面，本专利技术涉及细胞膜DERLIN-1蛋白 (SEQIDNO:l)及其制备，例如可通过重组方法进行制备。 一个优 选的实施方案中，细胞膜DERLIN-1蛋白通过如下方法制备并纯化 (1)构建^W"-7基因的cDNA的表达序列；6(2) 将所述cDNA克隆入表达载体，并将所述表达载体转入 原核细胞或真核细胞中；(3) 使DERLIN-1蛋白在所述的宿主细胞中表达； (4 )纯化所表达的DERLIN-1蛋白。其中，所述表达载体优选pET-30b载体或其他真核载体。所述宿主细胞是本领域常用的原核或真核宿主细胞，优选原核宿主细胞，例如 BL21E3细菌，中国仓鼠卵巢癌细胞CHO。所述的蛋白的纯化方法可 采用本领域常规的方法，例如参见Novagen公司编写的pET系统操作手 册。根据本专利技术的另一个方面，本专利技术涉及细胞膜DERLIN-1蛋白作 为新的肿瘤诊断和/或治疗靶点的用途。具体地，本专利技术的细胞膜 DERLIN-1蛋白可以作为肿瘤耙蛋白筛选用于诊断或治疗肿瘤的药 物。筛选药物的方法可以利用本领域技术人员已知的筛选方法，例如 参见"开发小肽，筛选新药"，王克夷等，中国生化药物杂志2003年 第24巻第1期，48-50页；"噬菌体随机肽库的应用"，免疫学杂志 2000年第5期第16巻，李华朱锡华等；"小分子活性肽筛选方法"， 《生命的化学》2004年24巻1期，第16-18页，罗以勤，王梁华， 焦炳华等。根据本专利技术上述筛选方法得到的抗肿瘤药物可以是例如单克隆抗体，或者与DERLIN-1蛋白结合的其他类型的分子，如多肽或 其他小分子药物等。此外，可以将一些治疗性物质偶联于与细胞膜 DERLIN-1蛋白具有高亲和力的耙向药物上以达到治疗的效果，如将 放射性核素偶联于抗DERLIN-1蛋白单克隆抗体上。根据本专利技术的又一方面，本专利技术涉及DERLIN-1蛋白结合配体， 在一个实施方案中，所述DERLIN-1蛋白结合配体是抗DERLIN-1蛋 白的单克隆抗体。本专利技术术语"DERLIN-1蛋白结合配体"与本领域7技术人员通常理解的那样，意指能与DERLIN-1蛋白高效特异性结合 的配体分子，包括例如单克隆抗体、多肽或者小分子化合物等肿瘤耙 向药物。在一个实施方案中，所述DERLIN-1蛋白结合配体是单克隆 抗体，其可获自稳定分泌抗DERLIN-1单克隆抗体的杂交瘤细胞克隆 HEC252/9F12，所述杂交瘤细胞于2007年11月2日保藏于中国微生 物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号CGMCC No. 2242。 在一个实施方案中，所述的单克隆抗体的制本文档来自技高网...
【技术保护点】
如ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１所示的细胞膜蛋白形式的ＤＥＲＬＩＮ－１蛋白。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：胡海，冉宇靓，杨治华，
申请(专利权)人：中国医学科学院肿瘤医院，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]
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