目标核酸的检测方法及该检测方法中所使用的容器技术

本发明专利技术提供目标核酸的检测方法及该检测方法中所使用的容器。本发明专利技术的目的在于提供不使用杂交法即可简便且高精度地检测目标核酸的方法以及该检测方法中所使用的容器。在本发明专利技术的目标核酸的检测方法中，所述目标核酸在检测对象的核酸上结合有种类不同的第一配体（３１）和第二配体（３２），其特征在于具有以下工序：制备结合有多个与第一配体（３１）特异性结合的第一受体（３３１）的第一微粒（３３）和结合有多个与第二配体（３２）特异性结合的第二受体（３４１）的第二微粒（３４）的工序；在底面具有沉降物捕获部的容器内混合可能含有目标核酸（３０）的试样、第一微粒（３３）和第二微粒（３４）的工序；和在混合工序后，观测由连接的目标核酸（３０）与第一微粒（３３）和第二微粒（３４）构成的凝集物以及／或第一微粒（３３）和第二微粒（３３）的沉降物在容器底面的捕获分布的工序。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及对检测对象有无核酸或核酸浓度进行检测的方法及该检测 方法中所使用的容器。
技术介绍
作为检测试样中存在的特定目标核酸的代表性技术，已知有利用杂交 法的技术(参照专利文献l)。该方法是能够利用探针从含有多种核酸的试样中检测仅存在非常少量的DNA或RNA的目标核酸的技术。另一方面，还已知通过使试样中存在的特定的目标分子凝集来进行检测的方法。作为该方法中检测进行凝集反应而获得的凝集物的容器，至今已提出了各种容器。例如提出了可以通过目测来判定凝集物的凝集模式的容器(参照专利文献2)。专利文献l:日本特开平7-51099号公报 专利文献2:日本特公昭63-60854号公报但是，核酸本质上具有有时非特异性地进行杂交的问题。例如在目标 核酸具有与非目标核酸相类似的碱基序列时，往往难以选择性地从试样中 仅检测目标核酸。因此，在专利文献1所记载的方法中，具有未必能够以 高精度检测目标核酸的问题。另外，专利文献2所记载的容器用于红细胞的检测。由于核酸与红细 胞的分子大小及结构大大不同，因此具有无法将该容器直接用于目标核酸 的检测的问题。
技术实现思路
本专利技术是鉴于上述情况而完成的专利技术，其目的在于提供不使用杂交法 即可简便且高精度地检测目标核酸的方法及该检测方法中所使用的容器。 为了解决上述课题，本专利技术为如下构成。(1) 一种目标核酸的检测方法，所述目标核酸在检测对象的核酸上结 合有种类不同的第一配体和第二配体，所述检测方法的特征在于，具有以 下工序制备结合有多个与上述第一配体特异性结合的第一受体的第一微粒和 结合有多个与上述第二配体特异性结合的第二受体的第二微粒的工序；在底面具有沉降物捕获部的容器内混合可能含有上述目标核酸的试 样、上述第一微粒和第二微粒的工序；和，在上述混合工序后，观测由借助于第一配体与第一受体的结合和第二 配体与第二受体的结合而分别连接的上述目标核酸与上述第一微粒和第二 微粒构成的凝集物以及/或上述第一微粒和第二微粒的沉降物在上述容器 底面的捕获分布的工序。(2) —种目标核酸的检测方法，所述目标核酸在检测对象的核酸上结 合有种类不同的第一配体和第二配体，所述检测方法的特征在于，具有以 下工序制备在底面上结合有多个与上述第一配体特异性结合的第一受体的容 器的工序；制备结合有多个与上述第二配体特异性结合的第二受体的磁性微粒的 工序；向上述容器内添加可能含有上述目标核酸的试样和上述磁性微粒的工 序；和，在该添加工序后，从上述容器外侧向上述磁性微粒施加磁力并观测该 容器底面的磁性微粒的分布的工序。(3) —种目标核酸的检测方法，其特征在于，上述(1)所述的检测 方法和上述(2)所述的检测方法均进行。(4) 一种目标核酸的检测方法，其特征在于，在上述(1) ~ (3)任 一项所述的目标核酸的检测方法中，将使用含有浓度已知的目标核酸的试 样(1)时的观测结果、使用不含该目标核酸的试样(2)时的观测结果和 使用可能含有该目标核酸的试样(3)时的观测结果进行比较，确认上述试 样(3)中目标核酸的有无或浓度。(5) —种目标核酸的检测方法，其特征在于，在上述(1) ~ (3)任7一项所述的目标核酸的检测方法中，将使用含有己知的不同浓度的目标核 酸的试样时的观测结果和使用可能含有该目标核酸的试样(4)时的观测结 果进行比较，确认上述试样(4)中目标核酸的有无或浓度。(6) 如上述(1) ~ (5)任一项所述的目标核酸的检测方法，其特征在于，上述配体选自亲水性有机化合物、地高辛配基、荧光素、Alexa、异 硫氰酸荧光素(FITC)、 2， 4-二硝基苯酚(DNP)、四甲基罗丹明(TAMRA)、 氨基酸残基数为6以上的多肽、2个以上单糖结合而成的糖链、生物素、蛋 白质、聚组氨酸、HA、谷胱甘月太S-转移酶(GST)、由序列号1表示氨基 酸序列构成的肽(Flag)以及它们的衍生物。(7) 如上述(1) (6)任一项所述的目标核酸的检测方法，其特征 在于，上述目标核酸为使用结合有第一配体的第一引物和结合有第二配体 的第二引物并通过聚合酶链反应法而制备的。(8) 如上述(1) (6)任一项所述的目标核酸的检测方法，其特征 在于，上述目标核酸为使用第一引物引入至少1个结合有第一配体的核苷 酸，同时使用第二引物引入至少1个结合有第二配体的核苷酸并同时通过 聚合酶链反应法而制备的。(9) 如上述(1) (8)任一项所述的目标核酸的检测方法，其特征 在于，上述目标核酸为多个不同的种类，这些目标核酸中的第一和第二配 体中的至少一方在每种目标核酸中都不同。(10) 如上述(1) (9)任一项所述的目标核酸的检测方法，其特征 在于，上述目标核酸为生物体来源。(11) 如上述(1)和(3) ~ (10)任一项所述的目标核酸的检测方法， 其特征在于，上述第一和第二微粒的粒径为0.1 10jim，且光学上能够相互 区分。(12) 如上述(1) ~ (11)任一项所述的目标核酸的检测方法，其特 征在于，多个上述容器设置在同一板上，且各容器的容量为(U 0.5ml。(13) 如上述(1)和(3) ~ (12)任一项所述的目标核酸的检测方法， 其特征在于，上述容器的沉降物捕获部在形成研钵状的底面上以同心圆状 配置有径向截面为锯齿状的多个凹凸，从中心向外侧由峰连接到谷的第一 倾斜面的长度(h)为0.2 2(Him，从中心向外侧由谷连接到峰的第二倾斜面的长度(1)为0.5~50i_im，连接峰和中心的直线与水平面所成的角度(e,) 为15~45。。(14) 如上述(1)和(3) ~ (12)任一项所述的目标核酸的检测方法， 其特征在于，上述容器的沉降物捕获部在形成研钵状的底面上独立地设置 有多个凹部，且底面与水平面所成的角度(e2)为15 45°。(15) 如上述(14)所述的目标核酸的检测方法，其特征在于，上述 凹部的开口部直径(L)为0.05 100(im、深度(d)为0.03 60(im。(16) —种目标核酸的检测方法，其特征在于，上述(13)所述的检 测方法和上述(14)或(15)所述的检测方法均进行。(17) 如上述(2) (10)和(12)任一项所述的目标核酸的检测方 法，其特征在于，上述磁性微粒的粒径为0.1 20pm。(18) 如上述(2) ~ (10)、 (12)和(17)任一项所述的目标核酸的 检测方法，其特征在于，上述容器的底面为大致半球面状或大致圆锥面状， 底面与水平面所成的角度(G3)为15 45°。(19) 一种目标核酸的检测用容器，其用于上述(1)禾B (3) ~ (12) 任一项所述的目标核酸的检测方法中，其特征在于，在形成研钵状的底面 上以同心圆状配置有径向截面为锯齿状的多个凹凸，从中心向外侧由峰连 接到谷的第一倾斜面的长度(h)为0.2 20jim，从中心向外侧由谷连接到 峰的第二倾斜面的长度(1)为0.5 50(im，且连接峰和中心的直线与水平面 所成的角度(9。为15~45°。(20) —种目标核酸的检测用容器，其用于上述(1)和(3) ~ (12) 任一项所述的目标核酸的检测方法中，其特征在于，在形成研钵状的底面 上独立地设置有多个凹部，且底面与水平面所成的角度(e2)为15~45°。(21)本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种目标核酸的检测方法，所述目标核酸在检测对象的核酸上结合有种类不同的第一配体和第二配体，所述检测方法的特征在于，具有以下工序：　制备结合有多个与所述第一配体特异性结合的第一受体的第一微粒和结合有多个与所述第二配体特异性结合的第二受体 的第二微粒的工序；　在底面具有沉降物捕获部的容器内混合可能含有所述目标核酸的试样、所述第一微粒和第二微粒的工序；和，　在所述混合工序后，观测由借助于第一配体与第一受体的结合和第二配体与第二受体的结合而分别连接的所述目标核酸与所述 第一微粒和第二微粒构成的凝集物以及／或所述第一微粒和第二微粒的沉降物在所述容器底面的捕获分布的工序。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：谷上恭央，桥渡贤图，
申请(专利权)人：奥林巴斯株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]