检测莱克多巴胺药物残留的胶体金试纸卡制造技术

本实用新型专利技术提供了一种检测试纸卡，包括底板、附着在底板上依次紧密相连的样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜和吸水垫，结合物释放垫的部分区域覆盖于样品吸收垫之下。在反应膜层上具备包被有莱克多巴胺－载体蛋白偶联物构成的检测线和包被有羊抗鼠ＩｇＧ构成指质控线；结合物释放垫包被有莱克多巴胺的胶体金标记物。采用本实用新型专利技术试纸卡是可以延长检测结果观察时间，样品吸收垫也可以将检测液体充分吸收与金标抗体完全接触充分反应，再层析至反应膜上进行反应，可以有效的减少误差。还可以防止检测样本中一些干扰成份使金标抗体中的蛋白失去活性，影响金标抗体与包被原的结合。（*该技术在2018年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本技术属于兽药残留的免疫化学速测
，具体涉及一 种检测试纸卡。
技术介绍
莱克多巴胺(Ract叩amine )属于(3-兴奋剂。|3-兴奋剂是营养重 分配剂一种，是一类结构和功能类似肾上腺素和去甲肾上腺素的苯乙 醇胺类衍生物，它可以加快畜禽生长速度，降低酮体脂肪含量，提高 痩肉率。在欧盟P-兴奋剂已被禁止用于家禽的生长促进剂，我国在《禁 止在饲料和动物饮用水中使用的药物品种目录》中也有明文规定。但 由于莱克多巴胺属于非处方药，且价格远低于克仑特罗，因此其非法 应用者不断增多。本方法为莱克多巴胺单克隆抗体酶联免疫快速检测 试剂盒，可用于尿样、动物组织(肌肉、肝脏等)中的残留检测。目前莱克多巴胺残留常用的检测方法有两种。 一种是色谱分析， 如气相色谱法(GC),由于复杂的仪器设备和繁瑣的过程，不适合现 场监控和大量样本筛查。另一种为免疫学方法，如酶联免疫吸附法 (ELISA)。它的缺点是检测时间长，费用较高，不利于在基层单位 推广使用。而且，这两种方法都需要专业技术人员进行操作。
技术实现思路
本技术的目的在于针对上述不足提供一种敏感度高、成本 低、操作简单、检测时间短的试纸卡。本技术的试纸卡包括底板、附着在底板上依次紧密相连的样 品吸收垫、结合物释放垫、反应膜和吸水垫，与常规试纸卡不同的是， 其中的结合物释放垫不是完全覆盖在样品吸收垫之下，而是部分区域 覆盖于样品吸收垫之下，优选结合物释放垫的二分之一区域覆盖于样品吸收垫之下。这样做的好处是可以延长检测结果观察时间，样品吸收垫也可以 将检测液体充分吸收与金标抗体完全接触充分反应，再层析至反应膜 上进行反应，可以有效的减少误差。还可以防止检测样本中一些干扰 成份使金标抗体中的蛋白失去活性，影响金标抗体与包被原的结合。所述反应膜上分别包被有莱克多巴胺-载体蛋白偶联物构成的检 测线印迹"I "和包被羊抗鼠IgG构成的质控线印迹"I "。从而可 以用于莱克多巴胺残留的检测。本技术试纸卡的底板为可PVC板或者是其它硬质而不吸水 的材料；反应膜可为硝酸纤维素膜或者醋酸纤维素膜；样品吸收垫可 由玻璃棉或聚酯材料制成；结合物释放垫可由纤维制成，结合物释放 垫层包被有抗体-胶体金结合物。在样品吸收垫与结合物释放垫及吸 水层上覆盖有保护膜，在玻璃棉和纤维层一侧约0.4cm处喷制样品标 记线。偶联莱克多巴胺金标载体蛋白可用卵血清蛋白、或人血清白蛋 白、牛血清白蛋白、血蓝蛋白等，在反应膜上的检测线印迹和质控线 的对照印迹组合排列可为"II "。本技术具有有益的积极效果，莱克多巴胺快速检测试纸卡具 备下列各项有点l.特异性强，敏感度高。莱克多巴胺快速检测试纸卡以胶体金标 记高亲和力的单克隆为基础制备而成，金标抗体中金颗粒与抗体分子 之间无价健形成，二者通过异性电荷间的范德华力相结合，胶体金对 单克隆特异性和亲和力影响很小，且具有较高的标记率。因此，快速 检测试纸卡具有较高的特异性和敏感性。可检测5ng/ml。2.搡作简便快速。使用快速检测试纸卡时无需任何其它试剂，只 要将样品用滴管滴入试剂卡孔内，滴加3滴(约100微升)，加后计时, 5~8min内观察结果。3.显示检测结果形象、直观准确。快速检测试纸卡以显示红线色"I "及"II "印迹作为检测的阳性和阴性标记，即在硝酸纤维素膜上显 示一条红线"I "印迹表示在被检测样品液中含有莱克多巴胺，两条红 线"ll"印迹表示在被检测样品中不含莱克多巴胺，结果判定形象、直 观、准确、简单明了，不容易出现阴性和假阳性误判。4. 成本低，投资少。使用快速检测试纸条，不需另配仪器设备及 其他试剂，使现场检测一步到位，成本低廉，投资少，见效快。5. 易于大范围推广应用。快速检测试纸卡操作简单，人人都可操 作，能较好满足不同层次人员的需要，如专业化验、海关检疫、卫生 防疫、质量监测、动物产品加工、集化养殖到个体养殖等，具有广阔 的巿场前景和较大的经济、社会效益。附图说明图l为莱克多巴胺快速检测试纸卡结构示意图，其中，1、样品吸 收垫；2、结合物释放垫；3、反应膜；4、吸水垫；5、检测线；6、 质控线；7、底板；图2为莱克多巴胺快速检测试纸卡俯视结构示意图，其中8-l和8-2 是覆盖在试纸卡两端的保护膜，9为标记线；图3为莱克多巴胺快速检测试纸卡阴性(图3."、阳性(图3.b)、 无效(图3.c)显色示意图，其中T质控区，C为检测区。具体实施方式实施例l试纸条的组装参见图l、图2:样品吸收垫l用玻璃棉制成，结合物释放垫层2 为吸附有莱克多巴胺的金标载体蛋白标记物的纤维层，根据可按下面 制备方法，制备包被有莱克多巴胺金标抗体纤维层，简称莱克多巴胺 胶体金标记物，3为反应膜层，本实施例采用硝酸纤维素膜，4吸水 垫为吸水材料层制成，5为检测区包被有莱克多巴胺-载体蛋白偶联 物，6为质控区包被有羊抗鼠IgG构成指质控线，7为PVC背衬为支持 层，用塑料薄片条制成，在PVC背衬上按顺序粘附硝酸纤维素膜、吸水垫、结合物释放垫和样本垫，将样本垫覆盖在结合物释放垫二分之一处，8-l为白色保护膜，覆盖在样品吸收垫和结合物释放垫上，在 样品吸收垫和结合物释放垫交界处对应保护膜8-l位置偏向于样品吸 收垫一方0.5cm处印有标记线9， 9的右端印有箭头及max字样，滤纸 层4即为吸水层(手柄端)上覆盖有浅蓝色保护膜8-2。要制成莱克多巴胺快速检测试纸卡首先需制备偶联莱克多巴胺 载体蛋白，制备检测线，制备胶体金，用于制备金标抗体纤维，其次 须制备羊抗鼠IgG抗体，用于制作质控线。以下是相关材料的制备方 法1.莱克多巴胺载体蛋白的偶联l.l制备莱克多巴胺半抗原莱克多巴胺半抗原6g莱克多巴胺，12g琥珀酸酐和8.7ml三乙 基氨用100ml吡啶溶解。回流一小时。减压蒸馏去溶剂，残余物用5 %NaHC03水溶液溶解，用乙醚洗涤两次，然后用H2S04进行酸化(pH 到2.0)，用水洗涤固形物(为三氯乙基半琥珀酸酯)两次，用氯仿-乙烷使其结晶(产量约75%,熔点(88℃~89℃)。取2.5g半琥珀酸 酯溶于6.5ml亚硫酰氯中，65℃加热30分钟。减压蒸发，干燥l小时 (高度真空条件下)。将上述产物溶于15mlN，N-二甲基-乙酸乙酰胺 中，室温搅拌2小时。65匸真空蒸发后，用异丙醇使结晶析出来，用 溶于二甲基甲酰胺中的锌和醋酸解离三氯乙酯，得到莱克多巴胺-半琥动酸酯。1.2莱克多巴胺半抗原与载体蛋白的偶联取EDC100mg，用pH8.0的10mmol/LPBS液1.5mL使之充分溶 解(I液)。取莱克多巴胺半琥珀酸酯25mg，用0.5mlDMF溶解(II 液)。取HSA80mg，溶于2ml 10mmol/L PBS ( PH8.0 )液中(III液)。 将II液与III液混合，在磁力搅拌下逐滴加入I液(余下0.5ml)。室温 下避光搅拌l小时，逐滴加入余下的I液。4度搅拌12小时。静置10小时(4度)。用蒸馏水使之充分透析(约48小时)。 1.3莱克多巴胺-载体偶联物的鉴定将载体蛋白、莱克多巴胺半抗原、莱克多巴胺-载体蛋白偶联物 用pH7.4的PBS配成0.5mg/ml的溶液，以0.01mol/LpH7.4 PBS调零，用 紫外分光光度计在本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测莱克多巴胺药物残留的胶体金试纸卡，包括底板、附着在底板上依次紧密相连的样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜和吸水垫，其特征在于，结合物释放垫的部分区域覆盖于样品吸收垫之下。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：何方洋，沈建忠，万宇平，冯才伟，冯才茂，赵正苗，吴小平，朱亮，汪善良，
申请(专利权)人：北京望尔生物技术有限公司，北京望尔康泰生物技术有限公司，
类型：实用新型
国别省市：11[中国|北京]