快速检测呋喃西林代谢物的胶体金层析试纸条的制备方法，属于检测技术领域。本发明专利技术是含有衬板和在衬板上依次衔接的样品垫、金标结合垫、包被膜、吸水垫组成，金标结合垫为吸附呋喃西林代谢物ＳＥＭ衍生物金标抗体的玻璃纤维棉，在包被膜上有用ＳＥＭ衍生物偶联载体蛋白的溶液印制的检测线（Ｔ），用羊抗兔ＩｇＧ溶液印制的控制线（Ｃ），两条线平行排列。该胶体金层析检测试纸条以胶体金标记高亲和力的多克隆抗体为基础制备而成，本试纸条特异性强，敏感性高，检出最低限量可达到５ｐｐｂ；简便、快速、时效性强，无需任何其它试剂和仪器，可现场操作，试纸条加入被检样品液后，在１５分钟内即可判定检测结果；结果显示形象、直观、准确；节省费用，适用范围广，便于推广。
【技术实现步骤摘要】
，属于检测技术 领域。技术背景硝基呋喃类抗生素(Nitrofiiran antibiotics)主要是指呋喃唑酮(Furazolidone)， 呋喃西林(Nitrofiirazone)，呋喃妥因(Furantoin)和呋喃它酮(Furaltadone)，为一类 广谱抗生素，对革兰阳性及阴性菌均有一定抗菌作用。呋喃西林(Furantoin)，是 一种人工合成的硝基呋喃类广谱抗菌药物，对多种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性 菌及某些原虫和真菌具有抑制或杀灭效果，而且药效稳定，在畜禽和水产养殖 中得到了广泛的应用。硝基呋喃类药物及其对应的代谢产物有呋喃唑酮(AOZ)、 呋喃它酮(AMOZ)、呋喃西林(SEM)和呋喃妥因(AHD)。硝基呋喃类药物在动物 体内代谢很快，在组织中结合的代谢产物滞留时间长。动物服用呋喃类药物后， 原药分子在动物体内迅速代谢，其在体内的稳定性不超过几小时；代谢的部分 化合物分子与细胞膜蛋白结合成为结合态，结合态可长期保持稳定，从而延缓 原药在体内的清除速度。而普通的食品加工方法(如烧烤、微波加工、烹调等) 难以使蛋白结合态呋喃唑酮残留物大量降解，食用含有该残留物的肉制品会对 人体产生一定的毒副作用。硝基呋喃类药物对畜禽有一定毒性，同时硝基呋喃类药物也是一类具有潜 在致癌和诱导有机体产生突变的物质。由于硝基呋喃类抗生素在体内代谢迅速， 而代谢产物与蛋白结合形成稳定化合物，但这些代谢物可以在弱酸性条件下(如 人类胃液的酸性条件)从蛋白质中释放出来，因此当人类吃了含有硝基呋喃类 抗生素残留的食品，这些代谢物就可以在人类的胃液的酸性条件下从蛋白质中 释放出来而被人体吸收，从而对人类健康造成严重的危害。1990年7月欧盟颁布2377/90/EEC条例，将硝基呋喃类药物及其代谢产物 列为A类禁用药物。自1995年起欧盟全面规定禁止使用呋喃类抗菌物质，在动 物源性食品中呋喃类残留物的检出限为不得检出。欧盟(EU)从1997年开始将 所有的硝基呋喃类抗生素全部列为违禁药物。2004年美国FDA公布了禁止在进 口动物源性食品中使用的ll种药物名单，其中包括呋喃西林和呋喃唑酮。我国 农业部文件农牧发 1号也规定动物源性食品中呋喃唑酮的检出限为不得 检出。目前国内外都对呋喃类物质的控制相当严格，各国对于测定的标准都有 明确的规定。尽管如此，但是由于其药效确切，价格低廉，目前在畜牧和水产3养殖中违禁使用现象仍较严重。由于呋喃类药物在动物体内快速代谢，代谢物与组织蛋白结合物在体内滞 留时间长，因此检测呋喃类药物残留的最佳方法是检测其代谢物而非检测原药。目前，检测呋喃西林代谢物(SEM)的方法主要有仪器分析法和酶联免疫分 析法(ELISA)。仪器分析法主要是有高效液相色谱(HPLC)、液相色谱一质谱法 (LC-MS)、液相色谱一串联质谱法(LC-MS/MS)。仪器分析法灵敏度高，结果准 确，但是样品需经一系列复杂的处理净化，繁琐费时，所需仪器设备价格昂贵， 而且只有特定的专业技术人员才能操作，不能进行现场检测，时效性差，难以 推广。ELISA法以竞争性酶联免疫反应为检测原理，縮短了检测时间，可以定 性定量检测。但ELISA方法需要配套的酶标仪和配套试剂，操作过程仍较复杂， 而且国内现处在研发阶段，进口国外产品价格昂贵，因而ELISA方法的应用受 到了较大限制。
技术实现思路
本专利技术的目的针对现有检测呋喃西林代谢物SEM的技术的不足和缺限，提供一种快速检测呋喃西林代谢物的金标层析试纸条的制备方法，使其能更加 快速、灵敏、简便地检测呋喃西林代谢物残留。本专利技术的技术方案 一种呋喃西林代谢物胶体金层析检测试纸条的制备方 法，含有衬板和在衬板上依次衔接的样品垫、金标结合垫、包被膜、吸水垫，金标结合垫为吸附呋喃西林代谢物SEM衍生物金标抗体的玻璃纤维棉，在包被 膜上有用SEM衍生物偶联载体蛋白的溶液印制的直线式隐形检测线T线，用羊 抗兔IgG溶液印制的直线式隐形控制线C线，两条线平行排列。所述的衬板为不吸水的韧性材料，选用硬质塑胶条，或不吸水硬纸条；所 述的样品垫选用玻璃纤维棉，或尼龙膜，或聚偏二氟乙烯膜，或聚酯膜；所述 的吸水垫选用吸水能力较强的吸水滤纸或滤油纸；所述的包被膜选用硝酸纤维 素膜或醋酸纤维素膜。所述的SEM衍生物金标抗体为胶体金标记的SEM衍生物多克隆抗体；所 述的偶联SEM衍生物的载体蛋白选用牛血清白蛋白BSA，或卵清蛋白OVA。本专利技术的有益效果本检测试纸条具有下列优点① 特异性强，敏感性高。该胶体金层析检测试纸条以胶体金标记高亲和力 的多克隆抗体为基础制备而成，金标抗体中金颗粒与抗体分子之间无共价键形 成，二者通过异性电荷间的范德华力相结合，胶体金标记对抗体的特异性和亲 和力影响很小，且具有较高的标记率。因此，试纸条具有较强的特异性和较高的敏感性，检出最低限量可达到5ppb。② 简便、快速、时效性强。使用胶体金层析检测试纸条和试纸卡，无需任何其它试剂和仪器，可现场操作，试纸条加入被检样品液后，在15分钟内即可判定检测结果。③ 结果显示形象、直观、准确。检测试纸条均以显示红色线T线和C线作为检测结果阳性和阴性标记，即在包被膜上显示一条红色线c线时，表示在被检样品中含有被检物，显示两条红色线T线和C线时，表示在被检样品中不含 被检物。结果判定形象、直观、准确，简单明了，不易出现假阳性和假阴性等 人为误判。④ 节省费用，适用范围广，便于推广。使用检测试纸条，比用仪器分析和 ELISA试剂盒的费用大幅下降。另外，试纸条的适用范围广，可满足不同层次 人员需要，包括专业检验，海关检疫，卫生检疫，质量监测，加工企业和养殖 场户等，便于推广应用，具有广阔的市场前景和明显的经济、社会效益。 附图说明图1、呋喃西林代谢物胶体金层析检测试纸条剖面结构示意图。 图2、呋喃西林代谢物胶体金层析检测试纸条俯视结构示意图。 具体实施例方式实施例l:制备呋喃西林代谢物检测试纸条。首先需要制备偶联呋喃西林代谢物衍生物载体蛋白，用于制备相应的检测 线(T线)和抗体；而且需要制备呋喃西林代谢物衍生物金标抗体，用于制备相应的金标抗体纤维棉；另外需要制备羊抗兔IgG抗体，用于制备控制线(C线)。 1、 SEM衍生物与载体蛋白偶联活性酯法将SEM对醛基苯甲酸衍生物(CPSEM)与载体蛋白BSA进行偶 联制备人工结合抗原CPSEM-BSA。具体制备方法如下(1) 取CPSEM 20.7mg (O.lmmol)， N-羟基琥珀酰亚胺NHS 17.25mg (0.15mmo1)， 二环己基碳二亚胺DCC 30.9mg (0.15mmo1)溶解于2mL的DMF中，室温下搅拌18小时，4500 r/min离心后弃沉淀，清液为活性酯中间体，为 A液；(2) 将134mg的BSA (2pmo1)溶解于10mL的PBS(0.1M， pH8.0)中，为B液；(3) 将A液逐滴滴入B液中，溶液维持在4'C，所有的A液加入后，继续 搅拌4小时；(4) 透析透析袋前处理取10cm的透析袋，于沸水中煮沸10min，再 用6(TC的去离子水冲洗3min，保存在4"C去离子水中备用；将(3)反应液转移到透析袋中，用PBS(0.01M， pH7.4)透析3天，每天换 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种呋喃西林代谢物胶体金层析检测试纸条的制备方法，其特征是含有衬板和在衬板上依次衔接的样品垫、金标结合垫、包被膜、吸水垫，金标结合垫为吸附呋喃西林代谢物ＳＥＭ衍生物金标抗体的玻璃纤维棉，在包被膜上有用ＳＥＭ衍生物偶联载体蛋白的溶液印制的直线式隐形检测线Ｔ线，用羊抗兔ＩｇＧ溶液印制的直线式隐形控制线Ｃ线，两条线平行排列。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：胥传来，徐一平，刘丽强，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]
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