定量测定人体α-淀粉酶活性的干化学试纸制造技术

本实用新型专利技术属于体外临床诊断试剂技术领域，具体为一种定量测定人体α－淀粉酶活性的干化学试纸。试纸由长条形的上下两支持层及中间各测试层组成，分为手持区和测试区。测试区从上至下依次为扩散层、过滤层、试剂层。扩散层可选用各种合成纤维材料的网格材料，过滤层可选用各种滤血的滤过性材料，试剂层可选用非对称性的合成膜。上支持层上开一加样孔，样品从加样孔进入扩散层后渗透进过滤层和试剂层，在试剂层发生化学反应而发生颜色的改变，通过下支持层的测试孔即可测定反应过程的光密度的变化。该试纸用于定量测定人体样品中的α－淀粉酶活性，为急性胰腺炎的诊断提供依据。（*该技术在2017年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本技术属于体外临床诊断试剂
，具体涉及一种适用于测定人体血液、尿 液等的a-淀粉酶活性、胆碱酯酶等生化指标的干化学试纸。 背条技术急性胰腺炎是临床上常见的急腹症之一，多见于青壮年。死亡率达5-10%，误诊率也 高达60-90%。当发生急性胰腺炎时，胰腺中的淀粉酶进入血液当中，引起血液淀粉酶的升 高。 一般急性胰腺炎发作后8-12小时，血液中的淀粉酶显著升高。升高持续24-72小时。 血液淀粉酶达到正常值3倍以上有诊断价值。尿液中的a-淀粉酶升高较迟，在12-24小 时后，持续时间3-5天，达到正常值的2倍以上有诊断意义。尽管测定a-淀粉酶缺乏特 异性，但临床上仍然把测定a -淀粉酶的活性作为诊断急性胰腺炎的重要定性指标而普遍 应用。目前测定a -淀粉酶的方法按试剂类型可以分为液体试剂和干化学试剂两种方法。干 化学试剂主要应用于急诊室。同液体试剂相比，干化学试剂具有方便、灵活、污染小、操 作方便等特点。目前，临床急诊生化所使用的干化学产品都为国外公司生产，有三种类型的产品。一 种是强生公司为代表的多涂层薄膜干片的干化学技术，利用感光胶片的涂层技术将扩散 层、反射层、试剂层等试剂涂在透明的支持层上，从支持层的反面测定光密度的变化。第二类为日本京都公司的干化学技术，其组成为一塑料支持层， 一端为反应区包括样 品层和试剂层，试剂层为某种织物作为试剂的载体。加样和测试同在上部进行。第三类为罗氏公司的千化学产品，U.SPat. No4， 604， 264它将试剂涂层在多丝的纤 维或织物上，全血通过玻璃纤维横向过滤后与上试剂层接触反应，通过上部覆盖一透明的 薄膜测定光密度的变化。U.S Pat 6, 036, 919专利技术了测定全血的千化学试纸，在一透明 的支持层上涂上试剂层和反射层，最上部覆盖一层合成纤维网布作为加样层。上述这些产品，有的生产工艺复杂，对材料设备要求高，有的可能产生某些缺陷，如 在加样端容易产生一定的气泡、过量液体等，加样和测定在同一侧样品可能造成干扰。而 且目前应用的干式生化测定仪为大型设备，将所有的生化项目集中在一台机器上测定。如 强生VITR0S系列(VITR0S-250， VITR0S-950)半自动及全自动干式生化仪及生化试剂； VITR0S-250, 950在医院应用较多。当送检的样本数量少时开机不方便。而急诊项目如急腹症需要马上测定，如果有单独的小型机和试纸可以满足急需。这对一些缺乏大型干式生化仪的中小医院意义更大。
技术实现思路
本技术的目的在于提供一种可减少测量干扰，使用方便的定量测定人体a -淀粉 酶的干化学试纸及定量测定设备。本技术提供的定量测定人体a-淀粉酶的干化学试纸，为长条形， 一端为手持区， 另一端为测试区，其结构如图l、图2、图3所示。它由上支持层l、下支持层2、扩散层 4、试剂层6组成。其中，上支持层1和下支持层2通过自带的胶层粘合在一起；在测试 区上支持层1开有加样孔3，下支持层2的对应位置开有测试孔7;扩散层4和试剂层6 迭合，设置于加样孔3和测试孔7处的上支持层1和下支持层2之间。上述结构的干化学试纸，主要用于样品为血清或尿样的测定。如果是全血样品，则在 上述的扩散层4和试剂层6之间还设置一过滤层5，以便滤去红细胞。本技术中，上支持层和下支持层可采用高分子聚合材料，如聚乙烯、聚氯乙烯、 聚苯乙烯或聚酯纤维等。其中以聚酯材料为最好。单片支持层的厚度为50-300um。上下 两层规格相同为40X8mm-120X12mra。上、下支持层上的加样孔和测试孔可为圆形孔，直 径相同，直径大小为4-10mm。加样孔3用于滴加样品，测试孔7可用于观察测试区颜色的 变化和测定光密度的变化。本技术中，通过加样孔3可将样品直接加到扩散层4中。扩散层4的作用是将测 试的样品均一的滲透到下一层中去。适合做扩散层的材料包括各种滤纸、玻璃纤维、无纺 布、尼龙膜、合成纤维等。优选合成纤维材料。其中最合适的材料为聚酯纤维或尼龙纤维 材料。扩散层4做成网布形式，网布的孔径大小为50-200目，纤维直径为50-400"m。扩 散层的材料一般为亲水性质的，这样有利于样品的扩散，也可用表面活性剂进行预处理。本技术中，过滤层5的作用是过滤红细胞并避免溶血，其材料可以是各种过滤性 的膜、高分子材料等，例如各种玻璃纤维材料和专用滤血膜。优选非对称性合成膜，膜的 孔径为0.15-10um 。本技术中，试剂层6称为反应层。加样后，样品中的a-淀粉酶渗透到试剂层发 生反应而逐渐显色。适合做试剂层的材料有各种滤纸、无纺布、合成膜或纤维织物。膜类 以非对称的膜系列为好。a-淀粉酶分解底物释放的色原标记物直接渗透到膜的测试孔7一侧，在测试孔7—侧进行测定。本技术中，试剂层6中的试剂包括缓冲体系、底物、辅助酶、激活剂、保护剂、 稳定剂等。通常，缓冲体系为HEPES缓冲液或磷酸盐缓冲液，浓度为0.05-l.OM。底物可选用麦芽七糖衍生物，优选人工合成的限定性麦芽七糖衍生物，标记有对硝基苯酚(PNP)， 非还原端进行了封闭。底物浓度为1-20mM。添加的辅助酶为ci-糖苷酶和/或糖化酶，浓度 为0.5-10.0万Ili/L。添加的激活剂为氯离子或钙离子，氯离子的浓度为70-150raM，钙离 子的浓度为1-lOmM。酶的稳定剂为各种多糖类或双糖类，如蔗糖、海藻糖等，重量浓度为 0.5-2.0%。保护剂为海藻胶，重量浓度为0. 5-2. 0%。为定量测定a -淀粉酶的活性，专利技术人还研制了反射式分光光度计(另案申请专利)， 与本技术干化学试纸配套使用。用该光度计测定试纸反应后在405nm波长下反射光密 度的变化。该仪器可以将反应温室内的温度控制在37士0.3'C。计算方法采用速率法，测 定在180秒内完成。自动报告和储存实验结果，并打印。本技术根据淀粉酶作用于底物生成小分子产物对硝基苯酚PNP的特点，采用不对 称的膜作为反应层，在孔径大的一端加样，在相反的一面测定，显色的强度高、均匀度好， 减少了加样端测定产生的气泡、过量液体、浊度等而造成的干扰，同时制作工艺又比较简 单。试纸单独配备一台小型反射式分光光度计，方便测定，适合急诊应用。附图说明图1为本技术的干化学试纸图示。图2为本技术的干化学试纸剖面图示(测血清或血浆)。图3为本技术的干化学试纸剖面图示(测全血样本)。图4为实施例1的测定结果的回归直线方程。图5为实施例2的测定结果的回归直线方程。图6为实施例6的测定结果的回归直线方程。图中标号l为上支持层，2为下支持层，3为加样孔，4为扩散层，5为过滤层，6为 测试层，7为测试孔。具体实施方式实施例l:上、下支持层采用PVC片，用打孔机打出加样孔3和测试孔7，孔直径为 4mm，孔距为8mm,扩散层4采用尼龙网布，试剂层6采用纤维织物，宽度均为8mm，将扩 散层4和试剂层6分别粘贴在两块PVC片上，位于加样孔3和测试孔7的处，然后将两块 PVC片对合粘贴在一起，加样孔和测试孔的位置对准。将配制好的试剂(酶反应液)用 BI0-DOT喷点仪点样，每孔6ul。酶反应液试剂的配方如下HEPES缓冲液 0.5mM麦芽七糖衍生物 10mMa -糖苷酶 5000IU/LN本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种定量测定人体α－淀粉酶活性的干化学试纸，为长条形，一端为手持区，另一端为测试区，其特征在于由上支持层（１）、下支持层（２）、扩散层（４）、过滤层（５）、试剂层（６）组成，其中，上支持层（１）和下支持层（２）通过自带的胶层粘合在一起；在测试区上支持层（１）开有加样孔（３），下支持层（２）的对应位置开有测试孔（７）；扩散层（４）和试剂层（６）迭合，设置于加样孔（３）和测试孔（７）处的上支持层（１）和下支持层（２）之间，试剂层（６）中的试剂包括缓冲体系、底物、辅助酶、激活剂、保护剂、稳定剂；其中，缓冲体系为ＨＥＰＥＳ或磷酸盐缓冲液，浓度为０．０５－１．０Ｍ；底物为麦芽七糖衍生物，还原端标记有对－硝基苯酚，非还原端进行了封闭，底物浓度为１－２０ｍＭ；辅助酶为α－糖苷酶和／或糖化酶，浓度为０．５－１０．０万ＩＵ／Ｌ；激活剂为氯离子或钙离子，氯离子的浓度为７０－１５０ｍＭ，钙离子的浓度为１－１０ｍＭ；稳定剂为多糖类或双糖类，重量浓度为０．５－２．０％，保护剂为海藻胶，重量浓度为０．５－２．０％。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：朱世成，王缦，田漪，
申请(专利权)人：上海科华生物工程股份有限公司，
类型：实用新型
国别省市：31[中国|上海]