电致化学发光分析制造技术

用于测定在溶液中或在与该溶液接触的固相上产生的电致化学发光现象的方法，其特征在于，该溶液含有选自脂肪醇乙氧基化物、Ｐｌａｎｔａｒｅｎ和辛基葡糖苷或其混合物中的一种洗涤剂。（*该技术在2014年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术的目的是提供一类用于测定电致化学发光现象的方法、利用所说方法来测定分析对象的方法、适用于该方法中的试剂溶液以及适用于实施该方法的专用装置。若干年前已经公知一些用于测定电致化学发光现象的方法。这类方法是通过氧化作用使某些特定的金属配合物达到一种激发态，然后使其从激发态回复到基态，同时放出电磁辐射。这类方法和适用的金属配合物例如在WO86/02734中有报导。这种技术已不断地获得改进。在WO90/05296中，将一种胺，优选为三丙胺(它在被氧化时是一种强还原剂)，加入测试组合物中。在一种电解液中产生电化学反应，在该电解液中，电致化学发光(ECL)部分(即金属配合物)能够发射电磁辐射，同时胺被氧化。该说明书描述了一种pH6～9，优选pH7～7.5的磷酸盐缓冲剂，它是一种适用于水溶液的电解质。为了提高电磁辐射，WO90/05302提出了将一种洗涤剂Triton X-100或Triton N-401加入所说的测试组合物中。WO90/05411描述了一种用于测定ECL的改进仪器。另外，已经可以应用这样一种用于测定分析对象的技术，这种技术是将一类电致化学发光的标记物偶合到分析对象、分析对象类似物或分析对象-特异物中。该电致化学发光技术可用来定量地测定所存在的分析对象。该说明书详细地描述了一种免疫分析法，该方法是用一种电致化学发光标记物来代替常规使用的标记物。这种技术的另一些改进和应用描述在WO87/06706、WO89/04392、WO89/10552、WO89/10551、WO90/05301和WO90/11511中。这些出版物的公开内容都被假定为是已知的。因此，本专利技术的一个目的是改进所说的已知方法，特别是要结合电致化学发光分析方法来提高检测分析对象时的灵敏度。本专利技术的第二个目的是提供一种用于测定在溶液中或在与该溶液接触的固相中的电化学现象的测定方法，所说的溶液是选自脂肪醇乙氧基化物、Plantaren和辛基葡糖苷或其混合物中的一种洗涤剂。本专利技术的第三个目的是一种使用所说方法来测定分析对象的方法以及适用于实施该方法的试剂。本专利技术的第四个目的是在上述先有技术的基础上提出一种指导。在这些先有技术文件中较详细地描述了一些主要的电致化学发光方法。用于测定电致化学发光现象的设备包含一个测量单元，该测量单元包括用于装盛试剂溶液的容器、至少两个电极(一个工作电极和一个反电极)，这两个电极在测量时与试剂溶液接触，以及一个用于测定在电致化学发光过程中发出的光的检测器。通常，首先将初始电压(预极化)施加于该溶液中。然后通过在该溶液中含有的一种物质(例如胺)的氧化还原电位来提高该电压。所说被氧化的物质激发了例如某些钌配合物等物质，这些钌配合物能够产生化学发光现象，从而发出光。在一个给定的时间间隔内被检测器接受的光量是对电致化学发光物质存在数量的一种量度。只要将电致化学发光物质作为分析对象、分析对象的类似物或分析对象-特异物(例如在免疫分析中)的一种标记物，那么被接受的光就是分析对象存在量的一种量度。实验表明，通常与洗涤剂Tween20结合使用的洗涤剂TritonX-100(由WO90/05302已知)不能产生最佳效果。一方面，Triton X-100难以降解，因此对环境不利。另一方面，实验还出乎意料地表明，与Triton X-100相比，某些其他洗涤剂能改善ECL方法。这些特种洗涤剂可用来提高信号输出，提高信号/噪声比例，从而使检测达到更高的灵敏度以及降低检测的低限检测阈值并最后达到更好的精密度。适用的洗涤剂是一些选自脂肪醇乙氧基化物的洗涤剂，其中包括，例如已经在实际中应用的Polidocanol〔十二烷基聚(乙二醇醚)n〕、C14-EO9〔聚(乙二醇醚)n〕、Genapol〔异十三烷基聚(乙二醇醚)n〕、C8-EO9〔辛醇聚(乙二醇醚)n〕；Plantaren(烷基聚葡糖苷)和辛基葡糖苷(辛基-β-D-吡喃葡糖苷)或其混合物。这些洗涤剂的使用浓度范围在0.001～1.0％之间。对于每一种洗涤剂都能容易地定出其最佳浓度。最适合的浓度范围在0.1～0.5％之间。在这种检测组合物中通常使用浓度为5～10mM的叠氮化钠作为防腐剂。实验表明，这种对环境有害的试剂可以用bioban或oxaban来代替，它们对于环境要比叠氮化物有利得多。出乎意料，这些稳定剂在ECL方法中还具有另一种有利效果，也就是增强了测量信号。Oxaban和bioban的使用浓度为0.01～1％，优选0.1～0.5％。本专利技术用于测定在溶液中或在与溶液接触的固相中的电化学现象的方法可以在高于该溶液的凝固点，但低于40℃的温度下进行。通过在测量装置上使用方波电压还可以进一步提高灵敏度。这是指将初始电压直接增加(至多0.4秒的时间内)到最终电压值。在激发时，该电压实际上保持恒定。在激发时间之后，该电压直接降低到低于该体系的氧化还原电位的数值。而且，该测定方法还扩大了动力学测量范围，即在免疫分析测定的分析对象的浓度范围也可以测定。如果使用较低的温度，则在测定时最好加入盐。已经证明，最好是将施加于工作电极(相对于Ag/AgCl)的方波终点电压的最大值限定于被氧化物质的氧化还原电位与2.2V之间。较优选的电压范围在1.2与2.2V之间。最优选的是1.4V。如果所用的电极由铂或金制成，则可应用这些数值。如果通常使用斜坡电压，例如使用三角接线电压，则终点电压(相对于Ag/AgCl)的最大值应限定为3.0V。出乎意料，在产生电致化学发光现象之前，向工作电极施加一个在+400与-400mV(相对于Ag/AgCl电极)之间的初始电压也可以增强信号。一个特别优选的电压范围在0mV与+200mV之间。另外，如果所用的电极由铂或金制成，则可应用这些数值。对于电极材料的电位可以很容易地计算出。另外，将pH值调节到6.5至9.0之间，优选6.5至7.5之间，更优选是调节到pH6.8，也可以使信号增强。最好是使用适合于该范围的pH缓冲剂来达到该pH范围。另外，该溶液也可以含有一种或多种其浓度在0.05mmol/l至0.5mol/l之间的碱金属或碱土金属的卤化物。其中优选氯化钠。上述那些测定方法本身已明显地改进了已知的分析方法。而且，将这些测定方法结合还可以更明显地提高用于检测分析对象的分析方法的灵敏度和/或动力学测定范围。当分析对象，例如免疫分析的对象，根据夹层原理(sandwich principle)或竞争性方法可以使其检出灵敏度提高时，则所用的方法或仪器可以进一步简化。例如，可以用一个光电二极管作为检测元件，以简化系统的校准，以便提高单位时间内的测定次数，因为测定时间随信号的增强而减少，或者可以减少样品的体积。本专利技术的另一个目的是一种用于测定电化学现象，特别是用于检测分析对象的试剂溶液，该试剂溶液含有一种电化学上可氧化的胺或者一种在被氧化时是强还原剂的胺。该溶液含有选自脂肪醇乙氧基化物、Plantaren和辛基葡糖苷或其混合物中的一种洗涤剂。另外，该溶液可以含有一种浓度在0.1mmol/l至0.5mol/l之间和/或pH值在6.8至8.0之间的碱金属氯化物。而且，该溶液还可以含有常规使用的添加剂，例如缓冲剂、稳定剂和防腐剂。该试剂溶液最好用bioban或oxaban来稳本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：V·克伦姆，G·米勒，U·努曼，U·吉森，N·霍义尔，
申请(专利权)人：罗赫诊断器材股份有限公司，
类型：发明
国别省市：