【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种基于Luminol/AubranchedPPy的电致化学发光免疫传感器的制备方法及应用。具体涉及一种Luminol/AubranchedPPy作为基底材料，以Luminol作为发光信号源，构建一种无标记型电致化学发光免疫传感器，属于电化学发光检测
技术介绍
癌症是威胁人类健康的最严重的疾病之一，虽然恶性肿瘤的治疗技术在不断进步，但是迄今为止，恶性肿瘤的早期发现、早期诊断和早期治疗是最为有效的手段。从筛选的角度来说，早期诊断癌症的最有效的方法是通过血液检查，检测肿瘤标志物的含量。随着生物学技术的发展和研究的深入，人们发现许多肿瘤早期标志物的一个最显著的特点就是其在血清中浓度非常低，而传统的检测肿瘤标志物的方法，如酶联免疫分析法、放射免疫分析法和荧光免疫分析法等，具有放射性污染，操作时间长且灵敏度低等缺点，限制了早期检测肿瘤标志物的临床检测技术的发展。因此，发展高灵敏的免疫分析技术对于肿瘤标志物的早期检测有着至关重要的意义。为了克服以上传统分析方法的缺点，本专利技术设计了一种特异性强，无放射性污染，快速简便且灵敏度高的电致化学发光免疫分析方法，实现了对肿瘤标志物的早期检测。
技术实现思路
本专利技术的目的之一是通过化学聚合法快速、简便合成枝状聚吡咯，其可与金溶胶通过静电作用牢固结合。本专利技术的目的之二是合成的枝状聚吡咯导电性好，比表面积大，可以固载大量的金溶胶和鲁米诺，提高了传感器的检测范围和灵敏度。本专利技术的目的之三是针对现有的肿瘤标志物检测方法存在的问题，提供一种简单快速...
【技术保护点】
一种基于Luminol/Au@branched PPy的电致化学发光免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）依次用1.0、0.3、0.05 µm的氧化铝粉末对直径为4 mm的玻碳电极进行抛光，用超纯水中清洗干净，氮气吹干；（2）在电极表面滴加6 μL、浓度为1 ~ 3 mg/mL的抗体捕获基底材料Luminol‑Au@branched PPy‑Ab溶液，4 °C保存；（3）用3 μL、质量分数为0.5 ~ 1.5%的牛血清白蛋白溶液封闭非特异性活性位点，于4 °C冰箱中孵化1 ~ 3 h，清洗干净；（4）将6 μL、浓度为0.01 pg/mL ~ 10 ng/mL的一系列不同浓度的肿瘤标志物抗原滴涂至电极表面，室温下孵化1 ~ 3 h，清洗干净，于4 °C冰箱中储存备用。
【技术特征摘要】
1.一种基于Luminol/AubranchedPPy的电致化学发光免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）依次用1.0、0.3、0.05μm的氧化铝粉末对直径为4mm的玻碳电极进行抛光，用超纯水中清洗干净，氮气吹干；
（2）在电极表面滴加6μL、浓度为1~3mg/mL的抗体捕获基底材料Luminol-AubranchedPPy-Ab溶液，4°C保存；
（3）用3μL、质量分数为0.5~1.5%的牛血清白蛋白溶液封闭非特异性活性位点，于4°C冰箱中孵化1~3h，清洗干净；
（4）将6μL、浓度为0.01pg/mL~10ng/mL的一系列不同浓度的肿瘤标志物抗原滴涂至电极表面，室温下孵化1~3h，清洗干净，于4°C冰箱中储存备用。
2.如权利要求1所述的一种基于Luminol/AubranchedPPy的电致化学发光免疫传感器的制备方法，所述抗体捕获基底材料Luminol-AubranchedPPy-Ab溶液的制备，其特征在于，包括以下步骤：
（1）AubranchedPPy的制备
将0.1~0.3mol吡咯单体分散于40~60mL、体积比为1:1的水和乙醇混合液中，加入0.05~0.15mol/L的FeCl3溶液，搅拌24h，过滤，用体积比为1:1的水和乙醇混合液洗涤3次，将其置于60°C真空干燥箱中干燥48h，制得黑色固体branchedPPy；
将10~30mgbranchedPPy分散到10mL超纯水中，加入5~15mL金溶胶，将得到的混合溶液在室温下振荡24h，6000r/min下离心10~15min，洗涤3次，将产物AubranchedPPy重新分散到10mL超纯水中，制得AubranchedPPy溶液；
（2）Luminol/AubranchedPPy的制备
将1mL、浓度为1~3mg/mL的AubranchedPPy溶液与1mL、浓度为0.5~1.5mmol/L的Luminol溶液混合，将得到的混合溶液在室温下振荡24h，6000r/min下离心...
【专利技术属性】
技术研发人员：朱文娟，魏琴，吴丹，范大伟，孙旭，胡丽华，马洪敏，张勇，庞雪辉，杜斌，
申请(专利权)人：济南大学，
类型：发明
国别省市：山东;37
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