一种新的多肽--锌指蛋白42和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种新的多肽－锌指蛋白４２，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如恶性肿瘤，血液病，ＨＩＶ感染和免疫性疾病和各类炎症等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的锌指蛋白４２的多核苷酸的用途。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种新的多肽--锌指蛋白42，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。真核基因的转录调控对于基因的正常表达及发挥生物学功能是十分重要的，通常由转录调控因子来完成这一过程。转录调控因子在生物体内参与决定基因在何种组织及何种发育阶段开始转录，编码这类蛋白的基因如发生突变，不但该基因自身不能正常表达，而且受其调节的许多基因也不能正常的进行转录与表达。转录因子对基因表达的调控主要通过转录因子与特定的DNA序列结合、转录因子间的相互作用及转录因子与常规转录机构的相互作用在完成。根据结构基序的不同，已知的DNA结合蛋白可主要分为两类含有螺旋-转角-螺旋基序的蛋白及锌指蛋白。锌指蛋白为编码锌离子介导的核苷酸结合蛋白多基因家族中的成员，锌指蛋白的锌指结构主要有以下几种C2H2构型、C2C2构型、C2HC构型、C2HC4C构型、C3H构型、C3HC4构型(Dai KS et al.,1998)。人们已从酵母、果蝇、鼠及人等多种生物体中分离得到了各种构型的锌指蛋白，其中含C2H2构型的锌指蛋白基因构成人类基因组最大的一族基因(Berker et al.,1995)。C2H2型锌指蛋白与基因的转录活化及抑制有关，这些蛋白的表达异常将引发各种发育紊乱性疾病、各种肿瘤的发生、各种遗传性疾病及免疫系统疾病。所有的C2H2型锌指蛋白均含有28-30个氨基酸长的保守的指重复序列(F/Y)XCXXCXXXFXXXXXLXXHXXXHTGEKP，其中一些特定的氨基酸残基位点为高度保守的。这一序列在很多不同的锌指蛋白中均含有多个拷贝，其拷贝数不同(锌指个数不同)则功能也不同。锌指蛋白与不同长度的DNA的结合依赖于指结构的数量，多指结构可能与复合物的结合稳定性有关，而复合物是RNA聚合酶转录的作用位点。研究发现，许多锌指蛋白的锌指结构域相互连接区域也是高度保守的，这一区域通常含有下列序列His-Thr-Gly-Gly-Lys-Pro-(Tyr,Phe)-X-Cys,其中组氨酸与半胱氨酸为金属离子的结合位点，而X为可变氨基酸残基。这一区域对于锌指结构的形成是必需的，指结构的数量将直接影响锌指蛋白与不同长度的DNA结合，且多指结构与转录调节复合物的结合稳定性有关。本专利技术的人的基因与人锌指蛋白大家族的成员pZNF84在蛋白水平上有48％的同一性及59％的相似性。且两者的蛋白序列均含有人C2H2型锌指蛋白的特征性指重复序列及指结构相连区域。基于以上各点，故认为本专利技术的新基因为一种新的人C2H2型锌指蛋白，命名为锌指蛋白42。并以此推断其与pZNF84相似，同为人C2H2型锌指蛋白，并具有相似的生物学功能。本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽--锌指蛋白42以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码锌指蛋白42的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码锌指蛋白42的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产锌指蛋白42的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽--锌指蛋白42的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术多肽--锌指蛋白42的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断治疗与锌指蛋白42异常相关的疾病的方法。在本专利技术的第一方面，提供新颖的分离出的锌指蛋白42，该多肽是人源的，它包含具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物、类似物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。在本专利技术的第二方面，提供编码分离的这些多肽的多核苷酸，该多核苷酸包含一核苷酸序列，该核苷酸序列与选自下组的一种核苷酸序列有至少70％相同性(a)编码上述锌指蛋白42的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。较佳地，该多核苷酸编码具有SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的多肽。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种 (a)具有SEQ ID NO:1中123-1259位的序列；和(b)具有SEQ ID NO:l中1-l781位的序列。在本专利技术的第三方面，提供了含有上述多核苷酸的载体，以及被该载体转化或转导的宿主细胞或者被上述多核苷酸直接转化或转导的宿主细胞。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。如本专利技术所用，“分离的”是指物质从其原始环境中分离出来(如果是天然的物质，原始环境即是天然环境)。如活体细胞内的天然状态下的多聚核苷酸和多肽是没有分离纯化的，但同样的多聚核苷酸或多肽如从天然状态中同存在的其他物质中分开，则为分离纯化的。如本文所用，“分离的锌指蛋白42”是指锌指蛋白42基本上不含天然与其相关的其它蛋白、脂类、糖类或其它物质。本领域的技术人员能用标准的蛋白质纯化技术纯化锌指蛋白42。基本上纯的多肽在非还原聚丙烯酰胺凝胶上能产生单一的主带。锌指蛋白42多肽的纯度能用氨基酸序列分析。本专利技术提供了一种新的多肽--锌指蛋白42，其基本上是由SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列组成的。本专利技术的多肽可以是重组多肽、天然多肽、合成多肽，优选重组多肽。本专利技术的多肽可以是天然纯化的产物，或是化学合成的产物，或使用重组技术从原核或真核宿主(例如，细菌、酵母、高等植物、昆虫和哺乳动物细胞)中产生。根据重组生产方案所用的宿主，本专利技术的多肽可以是糖基化的，或可以是非糖基化的。本专利技术的多肽还可包括或不包括起始的甲硫氨酸残基。本专利技术还包括锌指蛋白42的片段、衍生物和类似物。如本专利技术所用，术语“片段”、“衍生物”和“类似物”是指基本上保持本专利技术的锌指蛋白42相同的生物学功能或活性的多肽。本专利技术多肽的片段、衍生物或类似物可以是(Ⅰ)这样一种，其中一个或多个氨基酸残基被保守或非保守氨基酸残基(优选的是保守氨基酸残基)取代，并且取代的氨基酸可以是也可以不是由遗传密码子编码的；或者(Ⅱ)这样一种，其中一个或多个氨基酸残基上的某个基团被其它基团取代包含取代基；或者(Ⅲ)这样一种，其中成熟多肽与另一种化合物(比如延长多肽半衰期的化合物，例如聚乙二醇)融合； 或者(Ⅳ)这样一种，其中附加的氨基酸序列融合进成熟多肽而形成的多肽序列(如前导序列或分泌序列或用来纯化此多肽的序列或蛋白原序列)通过本文的阐述，这样的片段、衍生物和类似物被认为在本领域技术人员的知识范围之内。本专利技术提供了分离的核酸(多核苷酸)，基本由编码具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽的多核苷酸组成。本专利技术的多核苷酸序列包括SEQ ID NO:1的核苷酸序列。本专利技术的多核苷酸是从人胎脑组织的cDNA文库中发现的。它包含的多核苷酸序列全长为1781个碱基，其开放读框(123--1259)编码了378个氨基酸。根据氨基酸序列同源比较发现，此多肽与人的pZNF84有48％的同源性，可推断出该锌指蛋白42具有人的pZNF84相似的结构和功能。本专利技术的多核苷酸可以是DNA形式或是RNA形式。DNA形式包括cDNA、基因组DNA或人工合成的DNA。DNA可以是单链的或是双链的。DNA可以是编码链或非编码链。编码成熟多肽的编本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－锌指蛋白４２，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博容基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]