一种新的多肽——锌指蛋白36和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种新的多肽－锌指蛋白３６，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如恶性肿瘤，血液病，ＨＩＶ感染和免疫性疾病和各类炎症等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的锌指蛋白３６的多核苷酸的用途。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种新的多肽——锌指蛋白36，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。有一类调控蛋白质的DNA结合结构花式叫锌指结构。该调控蛋白质的活性需要Zn离子。在蛋白DNA结合结构域中，存在着一些有规律的正向重复单位。每个单位大约30个氨基酸，其中部10个氨基酸都是碱性或极性氨基酸。每个重复单位构成了结合DNA的“手指”。(孙乃恩等分子遗传学1990)锌指蛋白在生物活细胞中起着重要的作用，其中最重要的是作为转录调节因子发挥作用。真核基因的转录调控对于基因的正常表达是十分重要的，通常由转录调控因子来完成这一调控过程。转录调控因子在生物体内参与决定基因在何种组织及何种发育阶段开始转录。编码这类蛋白的基因如发生突变，不但该基因自身不能正常表达，而且受其调节的许多基因也不能正常的进行转录与表达。锌指蛋白对基因表达的调控主要通过与特定的DNA序列结合来完成，现在发现也有一些锌指蛋白可与RNA结合以调节RNA的代谢。典型的锌指蛋白为C2H2型，即Zn离子与两个半胱氨酸残基和两个组氨酸残基形成配位键。除了这四个氨基酸残基外，还有两个芳香族氨基酸残基和一个亮氨酸残基也高度保守。配位结构加上苯丙氨酸和亮氨酸所形成的疏水核心，确定了锌指结构的基本结构和形状。锌指结构的重复单位是(苯丙氨酸，酪氨酸)—X氨基酸—半胱氨酸—(X氨基酸)—半胱氨酸—(X氨基酸)—苯丙氨酸—(X氨基酸)—亮氨酸—(X氨基酸)—组氨酸—(X氨基酸)—组氨酸—X氨基酸。(Miller,J.,McLachlan,A.D.&Klug,A.1985EMBOJ.4,1609-1914)在该重复单位中，那些与金属结合并同时形成“指”结构的氨基酸残基之间有间隔，而且，这些氨基酸是非常保守的。这些结构就构成了锌指蛋白的功能域。这些连续的氨基酸序列可以分为四部分。(Jeremy M.Berg 1988Proc.Natl.Acad.Sci USA.85,99-102)1．(苯丙氨酸，酪氨酸)—X氨基酸—半胱氨酸—(X氨基酸)—半胱氨酸—(X氨基酸)—苯丙氨酸构成半胱氨酸—半胱氨酸袢。每一个半胱氨酸—(X氨基酸)—半胱氨酸—(X氨基酸)结构都位于此袢的反向平行的β片层底部，该结构以氢键的形式分别与半胱氨酸残基的胺基基团和X氨基酸残基的羧基基团结合。2．紧接在1结构后的4个X氨基酸构成了顶端。3．(X氨基酸)—亮氨酸—(X氨基酸)—(X氨基酸)—组氨酸—(X氨基酸)—(X氨基酸)—(X氨基酸)—组氨酸构成组氨酸—组氨酸袢。该结构采取α-螺旋的形式，每一个组氨酸都以ε-N与金属离子配价。半胱氨酸—半胱氨酸袢和组氨酸—组氨酸袢结构可能以两种方式与锌离子形成配位键。一种方式半胱氨酸—半胱氨酸袢的羧基端和组氨酸—组氨酸袢氨基端之间的距离大于15埃，该距离使得顶端的4个X氨基酸难以跨越。另一种方式半胱氨酸—半胱氨酸袢的羧基端和组氨酸—组氨酸袢氨基端之间的距离压缩在8埃内，并且将两种芳香族氨基酸紧密地压缩在亮氨酸和组氨酸的两旁。这种方式将大部分芳香族氨基酸的疏水表面隐藏于半胱氨酸—半胱氨酸袢和组氨酸—组氨酸袢结构之内。两种方式的半胱氨酸—半胱氨酸袢和组氨酸—组氨酸袢结构在顶端以β-折叠1的方式连接。整个结构被组氨酸残基的支链扭转角和顶端区域的主链扭转角所调节。4．5个X氨基酸构成与临近功能域相连的接头。该结构部分的氨基酸序列非常保守，可以用(丝氨酸，苏氨酸)—(甘氨酸，脯氨酸)—谷氨酸—(赖氨酸，精氨酸)—(甘氨酸，脯氨酸)—(苯丙氨酸，酪氨酸)表示，其中最后一个氨基酸残基代表了半胱氨酸—半胱氨酸袢的第一个氨基酸。本专利技术人的多肽属于锌指蛋白C2H2型，具有典型的锌指蛋白的结构。故命名锌指蛋白65，并推测该多肽具有与锌指蛋白相似的生物学功能。本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽——锌指蛋白36以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码锌指蛋白36的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码锌指蛋白36的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产锌指蛋白36的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽——锌指蛋白36的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术多肽——锌指蛋白36的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断治疗与锌指蛋白36异常相关的疾病的方法。在本专利技术的第一方面，提供新颖的分离出的锌指蛋白36，该多肽是人源的，它包含具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物、类似物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。在本专利技术的第二方面，提供编码分离的这些多肽的多核苷酸，该多核苷酸包含一核苷酸序列，该核苷酸序列与选自下组的一种核苷酸序列有至少70％相同性(a)编码上述锌指蛋白36的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。较佳地，该多核苷酸编码具有SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的多肽。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO:1中272-1270位的序列；和(b)具有SEQ ID NO:1中1-1572位的序列。在本专利技术的第三方面，提供了含有上述多核苷酸的载体，以及被该载体转化或转导的宿主细胞或者被上述多核苷酸直接转化或转导的宿主细胞。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。如本专利技术所用，“分离的”是指物质从其原始环境中分离出来(如果是天然的物质，原始环境即是天然环境)。如活体细胞内的天然状态下的多聚核苷酸和多肽是没有分离纯化的，但同样的多聚核苷酸或多肽如从天然状态中同存在的其他物质中分开，则为分离纯化的。如本文所用，“分离的锌指蛋白36”是指锌指蛋白36基本上不含天然与其相关的其它蛋白、脂类、糖类或其它物质。本领域的技术人员能用标准的蛋白质纯化技术纯化锌指蛋白36。基本上纯的多肽在非还原聚丙烯酰胺凝胶上能产生单一的主带。锌指蛋白36多肽的纯度能用氨基酸序列分析。本专利技术提供了一种新的多肽——锌指蛋白36，其基本上是由SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列组成的。本专利技术的多肽可以是重组多肽、天然多肽、合成多肽，优选重组多肽。本专利技术的多肽可以是天然纯化的产物，或是化学合成的产物，或使用重组技术从原核或真核宿主(例如，细菌、酵母、高等植物、昆虫和哺乳动物细胞)中产生。根据重组生产方案所用的宿主，本专利技术的多肽可以是糖基化的，或可以是非糖基化的。本专利技术的多肽还可包括或不包括起始的甲硫氨酸残基。本专利技术还包括锌指蛋白36的片段、衍生物和类似物。如本专利技术所用，术语“片段”、“衍生物”和“类似物”是指基本上保持本专利技术的锌指蛋白36相同的生物学功能或活性的多肽。本专利技术多肽的片段、衍生物或类似物可以是(Ⅰ)这样一种，其中一个或多个氨基酸残基被保守或非保守氨基酸残基(优选的是保守氨基酸残基)取代，并且取代的氨基酸可以是也可以不是由遗传密码子编码的；或者(Ⅱ)这样一种，其中一个或多个氨基酸残基上的某个基团被其它基团取代包含取代基；或者(Ⅲ)这本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－锌指蛋白３６，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博容基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]