一种新的多肽--死亡效应器结构域DNA结合蛋白10.89和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种新的多肽－死亡效应器结构域ＤＮＡ结合蛋白１０．８９，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如恶性肿瘤，血液病，发育紊乱症，ＨＩＶ感染，免疫性疾病和各类炎症等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的死亡效应器结构域ＤＮＡ结合蛋白１０．８９的多核苷酸的用途。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种新的多肽——死亡效应器结构域DNA结合蛋白10.89，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。两个死亡效应器结构域(DED)的蛋白质，已知的含DED的蛋白质有FADD，c-FLIP，caspase-8，caspase-10等。它们含有两个分别由六肽组成的及双向的核移位信号(NLS)，相互加强并补充功能，NLS2指导DEDD进入核，而NLS1在DEDD的核靶向性中起作用。1998年Alexander H.Stegh等人克隆出一新的DED基因—DEDD。该基因具一编码318个氨基酸的开放阅读框，所有组织中都有一2.3kb的转录本，一些组织中还有4.2kb的转录本。它的表达产物为一37Kda的蛋白质，它的N-末端具有与caspase-8等的DED同源的DED，其DED含有两个亲水区域。该产物的C端和DNA结合蛋白如组蛋白H1、H2A、H4，SAF-B等同源，和DNA非特异性紧密结合，它有一个以上的DNA结合结构域，以此交联DNA。DEDD蛋白质所含的氨基酸大部分都是酸性的，仅两个核移位信号(NLS)及之间区域主要含有基本氨基酸。它存在于细胞质中，在CD95介导的凋亡中起诱导凋亡及转位到核中的作用，在此过程中DEDD中的DED和FADD结合，FADD能加强DEDD诱导的凋亡。在CD95诱导的凋亡中C-DEDD仅不明显的诱导凋亡，而N-DEDD含有DED及NLS1，因而能有效的诱导凋亡。凋亡和caspase活性对于DEDD移位到核内是必需的，移位至核中后，并非均一的分布在核质中，而是集中分布于核仁。DEDD能抑制rDNA的转录。它的主要调控序列在人类和鼠中高度保守，并且在各组织中广泛表达，过度表达会由于它的DED和caspase-8等相互作用而引起细胞凋亡，过度表达的DEDD直接移位到核中，并与一RNA聚合酶I转录必需因子-UBF共同定位在核中。DEDD是CD95所诱导的凋亡信号的最终靶目标，该凋亡信号转移到核内关闭细胞内的生物合成。DNA非特异性结合蛋白在生物体内广泛分布，DEDD的核定位影响细胞核的一些重要功能，干扰染色质的生物合成，与细胞凋亡关系密切，对于肿瘤的抑制及治疗有重要作用。它的表达异常会导致各种疾病。通过基因芯片的分析发现，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast，生长因子刺激，1024NT、疤痕成fc生长因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生长因子刺激，1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌、贲门癌中，本专利技术的多肽的表达谱与死亡效应器结构域DNA结合蛋白的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本专利技术被命名为死亡效应器结构域DNA结合蛋白10.89。由于如上所述死亡效应器结构域DNA结合蛋白10.89蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的死亡效应器结构域DNA结合蛋白10.89蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新死亡效应器结构域DNA结合蛋白10.89蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽——死亡效应器结构域DNA结合蛋白10.89以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码死亡效应器结构域DNA结合蛋白10.89的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码死亡效应器结构域DNA结合蛋白10.89的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产死亡效应器结构域DNA结合蛋白10.89的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽——死亡效应器结构域DNA结合蛋白10.89的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术多肽——死亡效应器结构域DNA结合蛋白10.89的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断治疗与死亡效应器结构域DNA结合蛋白10.89异常相关的疾病的方法。本专利技术涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO2氨基酸序列的多肽。本专利技术还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO1中5-304位的序列；和(b)具有SEQ ID NO1中1-1250位的序列。本专利技术另外涉及一种含有本专利技术多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本专利技术多肽的方法。本专利技术还涉及一种能与本专利技术多肽特异性结合的抗体。本专利技术还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制死亡效应器结构域DNA结合蛋白10.89蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本专利技术的多肽。本专利技术还涉及用该方法获得的化合物。本专利技术还涉及一种体外检测与死亡效应器结构域DNA结合蛋白10.89蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本专利技术多肽的量或生物活性。本专利技术也涉及一种药物组合物，它含有本专利技术多肽或其模拟物、激活剂、拮抗剂或抑制剂以及药学上可接受的载体。本专利技术还涉及本专利技术的多肽和/或多核苷酸在制备用于治疗癌症、发育性疾病或免疫性疾病或其它由于死亡效应器结构域DNA结合蛋白10.89表达异常所引起疾病的药物的用途。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。本说明书和权利要求书中使用的下列术语除非特别说明具有如下的含义“核酸序列”是指寡核苷酸、核苷酸或多核苷酸及其片段或部分，也可以指基因组或合成的DNA或RNA，它们可以是单链或双链的，代表有义链或反义链。类似地，术语“氨基酸序列”是指寡肽、肽、多肽或蛋白质序列及其片段或部分。当本专利技术中的“氨基酸序列”涉及一种天然存在的蛋白质分子的氨基酸序列时，这种“多肽”或“蛋白质”不意味着将氨基酸序列限制为与所述蛋白质分子相关的完整的天然氨基酸。蛋白质或多核苷酸“变体”是指一种具有一个或多个氨基酸或核苷酸改变的氨基酸序列或编码它的多核苷酸序列。所述改变可包括氨基酸序列或核苷酸序列中氨基酸或核苷酸的缺失、插入或替换。变体可具有“保守性”改变，其中替换的氨基酸具有与原氨基酸相类似的结构或化学性质，如用亮氨酸替换异亮氨酸。变体也可具有非保守性改变，如用色氨酸替换甘氨酸。“缺失”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中一个或多个氨基酸或核苷酸的缺失。“插入本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－死亡效应器结构域ＤＮＡ结合蛋白１０．８９，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博德基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]