新化合物制造技术

本发明专利技术公开了ＣＡＳＢ６１９多肽和多核苷酸以及通过重组技术生产这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了在诊断中应用ＣＡＳＢ６１９多肽和多核苷酸的方法，预防和治疗癌症，特别是卵巢癌和结肠癌，自身免疫病和相关病症的疫苗。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及多核苷酸，这里指“CASB619多核苷酸，它们编码的多肽(这里称为“CASB619多肽”)、重组物质以及它们的制备方法。在另一个方面，本专利技术涉及使用这种多肽和多核苷酸包括治疗癌症特别是结肠癌和自身免疫病及其它相关病症的方法。再一方面，本专利技术涉及使用本专利技术提供的材料鉴定激动剂和拮抗剂/抑制剂的方法，以及用鉴定的化合物治疗与CASB619多肽失衡有关的病症的方法。再一方面，本专利技术涉及检测与CASB619多肽活性或水平异常有关的病症的诊断试验。据信，本专利技术的多肽和多核苷酸是抗肿瘤的特异性预防或治疗免疫的重要病原体，因为，相对于正常细胞，它们在肿瘤中特异性表达或高度过表达，因此，可以通过抗原特异性免疫机制被寻靶，导致肿瘤细胞的破坏。它们也可以用来诊断肿瘤细胞的出现。此外，它们在某些情况下的异常表达会引起自身免疫的诱导、异常免疫应答，这可以通过使用相同的多肽或多核苷酸进行免疫接种矫正。在这方面，最重要的生物活性是本专利技术多肽的抗原和免疫原活性。本专利技术的多肽也可以具有CASB619多肽的至少一种其它生物活性，这使之可以作为不同于免疫应答的治疗或预防干预的靶。在本专利技术一方面涉及CASB619多肽。这种多肽包括含有以下氨基酸序列的分离多肽与SEQ ID NO2全长序列至少有70％的同一性，优选至少80％的同一性，更优选至少90％的同一性，更优选至少95％的同一性，最优选至少97-99％的同一性的氨基酸序列。这种多肽包括含有SEQ ID NO2的氨基酸的多肽。本专利技术的多肽还包括其氨基酸序列与SEQ ID NO2全长序列至少有70％的同一性，优选至少80％的同一性，更优选至少90％的同一性，更优选至少95％的同一性，最优选至少97-99％的同一性的分离多肽。这种多肽包括SEQ ID NO2的多肽。本专利技术的多肽还包括由包括SEQ ID NO1所含的序列的多核苷酸编码的分离多肽。本专利技术还提供CASB619多肽的一种免疫原性片段，即CASB619多肽的一个连续的部分，它与含有SEQ ID NO2的氨基酸序列的多肽具有相同或基本上相同的免疫原性活性。也就是说，该片段(必要时可与一种载体偶联)能够产生能识别CASB619多肽的免疫应答。这种免疫原性片段可包括诸如缺少N-末端前导序列、跨膜区域或C-末端锚定区域的CASB619多肽。在一个优选的方面，根据本专利技术的CASB619的免疫原性片段基本上包括一种多肽的所有胞外结构域，其中该多肽与SEQ ID NO2在SEQ ID NO2的整个长度上至少有70％的同一性，优选至少80％的同一性，更优选至少90％的同一性，更优选至少95％的同一性，最优选至少97-99％的同一性。包括CASB619表位的肽片段一般包括SEQ ID NO2的至少7个，优选9或10个连续氨基酸。优选的表位示于SEQ ID NO5到SEQID NO68。包括这些表位的肽是本专利技术的一个优选方面。与这些表位具有相同特性的模拟表位(mimotope)和含有产生与CASB619分子中的表位交叉反应的免疫应答的这些模拟表位的免疫原也是本专利技术的部分。因此，本专利技术包括含有这些表位本身和其模拟表位的分离肽。模拟表位是指与天然CASB619表位足够相似从而能够被识别天然分子的抗体识别的实体；(Gheysen，H.M.等，1986，“作为抗原的合成肽”，Wiley，Chichester，Ciba基金研讨会119，p130-149；Gheysen，H.M.，1986，Molecular Immunology，23，7，709-715)，或者是在与合适载体偶联时能够产生与天然分子交叉反应的抗体的实体。上述表位的肽模拟表位可通过添加、缺失或取代所选择的氨基酸用于特别的目的。因此，本专利技术的肽可被修饰以易于与一种蛋白载体连接。例如，对于某些化学结合方法，表位中需要包括一个末端半胱氨酸。此外，对于肽与一种蛋白载体结合，需要包括一个远离肽结合末端的疏水末端，使肽的未结合的游离末端保持与载体蛋白表面的结合。这降低了肽的构象自由度，使肽更有可能呈现与肽在整个天然分子结构中具有的构象非常相似的构象。例如，肽可被修改成具有一个N末端半胱氨酸和一个C末端疏水的酰胺化尾巴。另外，可以进行一种或多种氨基酸的D立体异构体的添加或取代，来制备一种有用的衍生物，用来例如增强肽的稳定性。本领域技术人员知道，这些修饰肽或模拟表位可以是全部或部分非肽的模拟表位，其中组成的残基不限于20种天然氨基酸。此外，可以使用本领域已知的技术使之环化，从而限制肽的构象，使之类似于肽序列在整个分子中时的形状。环化肽的优选方法包括加入一对半胱氨酸残基以形成二硫桥。并且，本领域技术人员会意识到，本专利技术的模拟表位或免疫原可以大于上述表位，因而可以包括本文公开的序列。因此，本专利技术的模拟表位可以通过在一个或两个末端加入一定数目其它天然残基的N和/或C末端延伸来形成。肽模拟表位也可以是天然序列的反向序列，其序列方向相反；或者序列可以全部或至少部分由D-立体异构体氨基酸组成(反转序列，inverso sequence)。并且，肽序列也可以是反向反转序列，其中序列方向是相反的，氨基酸是D-立体异构体形式。这些反向或反向-反转肽的优势是其为非自身的，因此可以克服免疫系统中的自身耐受问题。此外，肽模拟表位可通过诸如噬菌体显示技术(EP 0 552 267 B1)使用能与本专利技术的多肽结合的抗体来鉴定。这种技术产生大量的模拟天然肽的结构的肽序列，这些肽序列因此能够结合抗天然肽的抗体，但不一定与天然多肽具有明显的序列同源性。这种方法的显著优势是可以鉴定具有较强免疫原特性的肽，或可以克服使用天然肽序列时可能出现的潜在自身抗原耐受问题。此外，该技术根据识别的模拟表位序列中的共有化学特性可以鉴定各个天然肽的识别特征。肽与免疫原性载体的共价偶联可以按本领域众所周知的方式进行。因此，例如对于直接共价偶联，可以利用碳二亚胺、戊二醛或N-琥珀酰亚胺酯，利用常用商用异源双功能接头，如CDAP和SPDP(按照厂商说明)。偶联反应后，免疫原可以通过透析法、凝胶过滤法和分级分离法等方便地除去并纯化。用于本专利技术免疫原的载体是本领域技术人员熟知的。载体的功能是提供细胞因子辅助，以便帮助诱导抗肽的免疫应答。可用于本专利技术的载体的非限制性实例包括匙孔血蓝蛋白(KLH)、血清白蛋白如牛血清白蛋白(BSA)、灭活细菌毒素如破伤风或白喉毒素(TT和DT)或其重组片段(如TT片段C的1区或DT的转运区)或结核菌素的纯化蛋白衍生物(PPD)。或者，模拟表位或表位可以直接与脂质体载体辍合，它还可以包括能够提供T细胞辅助的免疫原。优选模拟表位对载体的比例为1∶1到20∶1，优选每个载体负载3-15个肽。在本专利技术的一个实施方案中，优选的载体是流感嗜血杆菌的蛋白D(EP 0 594 610 B1)。蛋白D是流感嗜血杆菌的IgD结合蛋白，已由Forsgren申请专利(WO 91/18926，授权号EP 0 594 610 B1)。在某些情况下，例如重组免疫原表达系统中，可能需要使用蛋白D的片段，例如蛋白D 1/3rd(包括蛋白D的N末端100到110个氨基酸(GB9717953.5))。呈递本专利技术肽的另一种优选方法是在重组融合分子中。例如本文档来自技高网...

【技术保护点】
含有如下氨基酸序列的分离多肽，该氨基酸序列与ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２的氨基酸序列的全长序列具有至少７０％的同一性。

【技术特征摘要】
...

【专利技术属性】
技术研发人员：CEM布鲁克，JP卡萨特，T科切，C维纳尔斯丫德巴索尔斯，
申请(专利权)人：史密丝克莱恩比彻姆生物有限公司，
类型：发明
国别省市：BE[比利时]