用于通过选择性抑制VEGF来治疗癌症的组合物和方法技术

本发明专利技术公开了可特异性抑制ＶＥＧＦ结合两种ＶＥＧＦ受体之一ＶＥＧＦＲ２的抗体。该抗体有效抑制血管发生并诱导肿瘤退化，而且改善了安全性，这要归功于它们的特异性。本发明专利技术由此提供了用于治疗癌症和其它血管发生性疾病的新的基于抗体的组合物、方法、和联合方案。还提供了使用新的ＶＥＧＦ特异性抗体的有益免疫缀合物和药物前体组合物和方法。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
本申请要求1999年4月28日提交的共同待审美国临时专利申请流水号60/131,432的优先权，本文特别收入该申请的全部正文和图作为参考，而不作任何具体放弃。美国政府依据国家卫生研究院(NationalInstitute of Health，NIH)的1RO1 CA74951、5RO CA54168、和T32GM07062拥有对本专利技术的权利。1.专利
本专利技术主要涉及抗体、血管发生、和肿瘤治疗领域。具体而言，本专利技术提供了特异性抑制VEGF结合两种VEGF受体之一VEGFR2的抗VEGF抗体。这些抗体抑制血管发生并诱导肿瘤退化，而且已经证明了安全性，这要归功于它们的特异性阻断特性。本专利技术中基于抗体的组合物和方法还延伸至免疫缀合物和其它治疗性联合、试剂盒、和方法的使用，包括药物前体。2.相关技术的描述肿瘤细胞对化疗剂的抗性是临床肿瘤学中的一个重要问题。事实上，这是许多最普遍的人类癌症仍然不能有效化疗干预的主要原因之一，尽管该领域具有某些进展。另一种肿瘤治疗策略是使用“免疫毒素”，即使用抗肿瘤细胞抗体将毒素投递至肿瘤细胞。然而，与化疗方法一样，当应用于实体瘤时，免疫毒素疗法也遭遇了重大障碍。例如，抗原阴性细胞或抗原缺陷细胞能够存活，并再次形成肿瘤或导致进一步的转移。实体瘤耐受基于抗体疗法的另一个原因是高分子试剂(诸如抗体和免疫毒素)通常不能渗透肿瘤块(Burrows等人，1992；Dvorak等人，1991a；Baxter和Jain，1991)。肿瘤内的物理扩散距离和间质压力都严重限制了这种疗法。已经证明，在所有人类癌症中占超过90％的实体瘤耐受抗体和免疫毒素治疗。最近的策略是靶向实体瘤的血管结构。靶向肿瘤血管而非肿瘤细胞自身具有某些优点，即不大可能形成抗性肿瘤细胞，而且容易接近靶向的细胞。此外，由于许多肿瘤细胞依赖单一血管供应氧和营养，所以破坏血管能够放大抗肿瘤效果(Burrows和Thorpe，1994a；1994b)。美国专利5,855,866和5,965,132描述了例示性的血管靶向策略，这两项专利具体描述了将抗细胞试剂和毒素靶向投递至肿瘤血管结构标记物。血管靶向方法的另一种有效形式是使凝血因子靶向肿瘤血管结构表达或吸收的标记物(Huang等人，1997；美国专利号5,877,289、6,004,555、和5,＿＿,＿＿(美国申请流水号08/482,369，1998年10月20日交纳颁证费))。向肿瘤血管结构投递凝血剂而非毒素还具有其它优点，即降低免疫原性和甚至更低的毒副作用风险。正如美国专利5,877,289中公开的，优选用于这些肿瘤特异性“凝血配体”的凝血因子是截短形式的人凝血诱导蛋白质、组织因子(TF)、血液凝血主要起始物。虽然使毒素和凝血因子向肿瘤血管的特异性投递是肿瘤治疗中的重大进步，但是某些外周肿瘤细胞能够幸免于由这些疗法引起的肿瘤内破坏。因此，需要联合使用抗血管发生策略与美国专利5,855,866和5,877,289中破坏肿瘤的方法。抗血管发生肿瘤治疗策略基于抑制通常位于实体瘤外周的萌芽血管的增殖。大多在更传统干预(诸如手术或化疗)后，使用这些疗法来降低微转移的风险或抑制实体瘤的进一步生长。血管发生指由原有血管和/或循环中的内皮干细胞形成新的血管结构(Asahara等人，1997；Springer等人，1998；Folkman和Shing，1992)。血管发生在许多生理学过程中具有至关重要的作用，诸如胚胎发生、创伤愈合、和月经。血管发生在某些病理学事件中也是重要的。除了在实体瘤生长和转移中的作用之外，具有血管发生性成分的其它值得注意的状况是关节炎、牛皮癣、和糖尿病性视网膜病变(Hanahan和Folkman，1996；Fidler和Ellis，1994)。在正常和恶性组织中，血管发生受靶组织和较远位点产生的血管发生刺激剂与血管发生抑制剂之间平衡的调控(Fidler等人，1998；McNamara等人，1998)。血管内皮生长因子-A(VEGF，也称为血管通透因子，VPF)是血管发生的主要刺激物。VEGF是由缺氧和致瘤突变诱导的多功能细胞因子，可以由多种组织产生(Kerbel等人，1998；Mazure等人，1996)。对于VEGF是病理性状况中血管发生的主要刺激物的认识导致了设想阻断VEGF活性的多次尝试。已经有人建议，将抑制性抗VEGF受体抗体、可溶性受体构建物、反义策略、针对VEGF的RNA aptamer、和低分子量VEGF受体酪氨酸激酶(RTK)抑制剂用于干扰VEGF信号传导(Siemeister等人，1998)。事实上，针对VEGF的单克隆抗体已经显示在小鼠中抑制人肿瘤异种移植物的生长和腹水的形成(Kim等人，1993；Asano等人，1998；Mesiano等人，1998；Luo等人，1998a；1998b；Borgstrom等人，1996；1998)。虽然上述研究强调了VEGF在实体瘤生长中的重要性，及其作为肿瘤治疗靶的潜力，但是鉴定可抑制VEGF诱导的血管发生的其它试剂将有助于增加治疗选择。开发更特异性抑制VEGF受体结合的治疗剂将是重要进步，只要改进的特异性不显著危及抗肿瘤效果。专利技术概述通过提供用于抗血管发生和抗肿瘤治疗的新型治疗性组合物和方法，本专利技术克服了现有技术的某些缺点。本专利技术以特异性抑制VEGF与两种主要VEGF受体中仅其一的VEGFR2的结合的抗体为基础。这些抗体可抑制血管发生并诱导肿瘤退化，就像其它抗VEGF抗体(包括早已用于临床试验的抗体)一样有效，而且已经证明了安全性，这要归功于它们的特异性阻断特性。使用提供的特定种类的抗体，本专利技术的组合物和方法还延伸至免疫缀合物和联合的应用，包括药物前体。本专利技术的特殊优势是提供的抗体只抑制VEGF结合VEGFR2而非VEGFR1。这与包括A4.6.1在内的现有技术主导抗体相反，它们抑制VEGF结合VEGFR2和VEGFR1二者。因为VEGFR1具有与血管发生无关的重要生物学作用，特别是巨噬细胞的迁移和趋化性、破骨细胞和破软骨细胞的功能，所以这种只抑制VEGFR2所介导血管发生的能力具有明显优势。这可以转变成显著的临床好处，即巨噬细胞仍然能够介导宿主的抗肿瘤应答，而且骨的新陈代谢(如在儿科癌症治疗中)没有受到不利影响。另一项优势是，因为在存在本专利技术抗体时仍旧维持了VEGF与VEGFR1的结合，所以借助VEGF结合在肿瘤内皮上上调的VEGFR1，本专利技术的抗体能够用于将附着的治疗剂特异性投递至肿瘤血管。因此，在免疫缀合物的内容中，本专利技术提供了在同一分子内具有抗血管发生和破坏肿瘤两种特性的试剂。还有另一项优势在于提供的组合物能够中和由VEGFR2介导的VEGF存活信号裸露的或缀合的本专利技术抗体由此可以与其它疗法和/或附着试剂形成协同性联合，特别是那些因VEGF抵消其破坏特性而在体内不能实现最大效力的方法和试剂。本专利技术由此提供了特异性阻断VEGF结合VEGFR2受体的抗体，或基本上只阻断VEGF结合VEGFR2受体的抗体。这些抗体显著抑制VEGF结合VEGFR2受体(KDR/Flk-1)，而不显著抑制VEGF结合VEGFR1受体(Flt-1)。由此，抗体抑制VEGF结合VEGFR2受体(KDR/Flk-1本文档来自技高网...

【技术保护点】
包含生物学有效量的抗ＶＥＧＦ抗体或其抗原结合片段的组合物，该抗体或其抗原结合片段结合的表位与单克隆抗体ＡＴＣＣ ＰＴＡ １５９５基本上相同，并显著抑制ＶＥＧＦ结合ＶＥＧＦ受体ＶＥＧＦＲ２（ＫＤＲ／Ｆｌｋ－１）而不显著抑制ＶＥＧＦ结合ＶＥＧＦ受体ＶＥＧＦＲ１（Ｆｌｔ－１）。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：PE索普，RA布里肯，
申请(专利权)人：德克萨斯大学董事会，
类型：发明
国别省市：US[美国]