一种新的多肽--PLP蛋白10.34和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种新的多肽－ＰＬＰ蛋白１０．３４，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如恶性肿瘤，血液病，ＨＩＶ感染和免疫性疾病和各类炎症等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的ＰＬＰ蛋白１０．３４的多核苷酸的用途。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种新的多肽——PLP蛋白10.34，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。PLP蛋白家族是一类以髓鞘蛋白脂蛋白(Myelin proteolipid protein，PLP，lipophil in)为代表的，主要存在于神经组织，参与形成和维持髓鞘多层结构的膜蛋白。其主要成员见表一。PLP蛋白家族成员高级结构均含有四个疏水的穿膜结构域(Transmembrane domain，TM)和两个保守序列(Motif)，其一位于N端第一个TM区起始处，第二个保守序列位于三，四TM区之间的胞外loop区，含一个形成二硫键的Cys。保守序列1为G--A-L-F-C-G-C-G-H保守序列2为C-X--X--X(3)---X-L--I-X(4)-G-A其中C为二硫键位点PLP蛋白是中枢神经系统髓鞘蛋白的主要组成部分，约占其总蛋白量的50％。编码人PLP蛋白的基因定位于X染色体长臂22亚区(Xq22)，长度约为17Kb，含7个外显子和6个内含子。其编码的PLP蛋白共276个氨基酸，在哺乳类动物中同源性接近100％，而在其它物种如角鲨，非洲爪蛙等也显示高度保守性。PLP基因转录后，前体mRNA不同的剪切拼接方式形成两种成熟mRNA，分别编码PLP和DM20蛋白。与PLP相比较，DM20除于116-150位缺失35个氨基酸外，其余序列于PLP完全相同。PLP蛋白为自然界中疏水性最强的蛋白之一，其一级结构共含276个氨基酸，其中疏水性氨基酸约占50％，多肽折叠形成四个疏水性的穿膜结构域(Transmembrane domain，TM)和5个亲水性的膜外loop，PLP通过TM嵌合于细胞膜中。十四个半胱氨酸，5个呈自由巯基，包埋于疏水TM I和III中，四个形成两对二硫键Cys200-Cys219与Cys183-Cys227，其余6个Cys则于长链脂肪酸共价结合成硫脂键。DM20的结构与PLP相似，均于loop III缺失35个氨基酸。PLP/DM20蛋白功能1.维持和稳定中枢神经髓鞘多层结构中枢神经系统髓鞘结构是由少突胶质细胞突起部分的胞膜紧密结合而形成的多层结构。PLP/DM20在中枢神经系统主要由少突胶质细胞产生，它与髓鞘基本蛋白(Myelinbasic protein，MBP)一起，是髓鞘蛋白的主要组成成分，对于髓鞘多层结构的形成和稳定有重要作用。2.参与神经系统的分化新生出生后0-2天，最早可于脊索中检测到PLP蛋白存在，这与髓鞘形成时间相吻合。但定点杂交显示，在胚胎期神经系统中已有PLP基因表达，表达产物主要为DM20。DM20表达远早于髓鞘的形成，提示DM20可能参与神经系统的分化。3.其它除中枢神经系统外，其它组织如外周神经系统的许旺细胞(Schwann cells)、心脏、脾等也检测到有PLP基因表达。这些组织中PLP功能尚不清楚，目前推测，PLP可能a.参与离子通道的组成；b.与信号转导相关联。人类PLP基因变异可导致家族性中叶性硬化(Pelizaeus-MerzbacherDisease，PMD，一种家族性脑白质病)和X染色体偶联的2型痉挛性截瘫(X-linkedspastic paraplegia type 2，SPG2)。PMD在形态学上主要表现为中枢神经系统髓鞘缺失，成熟少突胶质细胞数量减少，临床表现眼球震颤，精神运动性迟缓，强直，共济失调，症状开始出现于出生后第一年。SPG2症状与PMD相似，但程度较轻，发生较晚。其它物种如小鼠，狗等PLP基因突变也可导致与PMD相似的症状。PLP基因突变与相关的疾病如表二所示。PLP基因的变异，如点突变、缺失、移码、无义突变和基因复制等，均可导致PMD或SPG2病变。研究表明，突变的PLP基因产生的错误折叠的多肽链聚集于内质网，由此产生的毒性作用可能是导致中枢神经系统髓鞘结构破坏的主要原因。这也可能是临床上无义突变导致的PLP蛋白缺失，所表现的PMD症状反而较错义突变导致的症状较轻的原因。编码本专利技术多肽的基因含PLP蛋白家族Motif，根据该motif的保守性，结合GCG软件对新基因氨基酸组成，疏水性的分析(含较多的疏水氨基酸，较强的疏水性)，推测该基因所编码的蛋白质可能也是一参与神经组织或其它特定结构(如离子通道)形成的一种膜蛋白。本专利技术的多肽被推断鉴定为一种新的人PLP蛋白。通过基因芯片的分析发现，在正常脑、肝癌、肌肉、胎脑、胎肾，胎肺、胎肝、甲状腺、胸腺、成人肝、肺、胶质瘤中，本专利技术的多肽的表达谱与PLP蛋白的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本专利技术被命名为PLP蛋白10.34。由于如上所述PLP蛋白10.34蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的PLP蛋白10.34蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新PLP蛋白10.34蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽——PLP蛋白10.34以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码PLP蛋白10.34的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码PLP蛋白10.34的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产PLP蛋白10.34的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽——PLP蛋白10.34的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术多肽——PLP蛋白10.34的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断治疗与PLP蛋白10.34异常相关的疾病的方法。本专利技术涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO2氨基酸序列的多肽。本专利技术还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO1中467-751位的序列；和(b)具有SEQ ID NO1中1-1233位的序列。本专利技术另外涉及一种含有本专利技术多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本专利技术多肽的方法。本专利技术还涉及一种能与本专利技术多肽特异性结合的抗体。本专利技术还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制PLP蛋白10.34蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本专利技术的多肽。本专利技术还涉及用该方法获得的化合物。本专利技术还涉及一种体外检测与PLP蛋白10.34蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－ＰＬＰ蛋白１０．３４，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博德基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]