灰树花多糖中淀粉含量的测定方法技术

一种灰树花多糖中淀粉含量的测定方法，由以下步骤组成： １）除去脂溶性成分：取烘干磨碎的待测多糖样品，分别称０．５～２克于６个离心杯中，分别加入３０ｍｌ乙醚，充分振荡５～１５分钟，以４０００～５０００转／分钟离心５～１０分钟，弃去上清液，再加入３０ｍｌ乙醚，如此重复离心３次； ２）除去可溶性糖类干扰物质：向上述弃去上清液后的离心杯中加入５０～６０℃的８０％乙醇３０ｍｌ，充分振荡５～１５分钟，以４０００～５０００转／分钟离心５～１０分钟，弃去上清液，如此重复离心３次；然后再向弃去上清液后的离心杯中加入４０～５０℃蒸馏水３０ｍｌ，在４０～５０℃恒温水浴中振荡６０分钟，以４０００～５０００转／分钟离心５～１０分钟，弃去上清液，再加入３０ｍｌ蒸馏水，如此重复离心３次； ３）酶法分解淀粉：向步骤２）离心弃去上清液后的杯中加入５ｍｌ蒸馏水，湿润并搅拌分离出的样品，再加入８０～９０℃蒸馏水４０ｍｌ，搅匀后，置沸水浴中处理５０～６０分钟使淀粉糊化；之后冷却至５０℃，加入１％的糖化酶液１０ｍｌ，并立即加入ｐＨ４～６的磷酸盐缓冲液２５ｍｌ，再加入甲苯５～７滴，混匀，封口，置于４５～４８℃条件下保温２０～２４小时进行淀粉酶解； ４）淀粉酶解检测：取上述淀粉酶解液１滴加入碘溶液１滴进行酶解效果检测，若显蓝色、红色或紫色，即为淀粉酶解不完全，应再重复步骤３）的酶法分解淀粉，直至加碘溶液检测不显蓝色、红色或紫色为止，即为淀粉酶解完全； ５）淀粉酶解液处理：将上述完全酶解的淀粉酶解液冷后，用６ｍｏｌＬ↑［－１］ＮａＯＨ中和至中性，然后边搅动边逐滴加入饱和Ｐｂ（ＯＡｃ）↓［２］溶液，直至淀粉酶解液无白色絮状沉淀为止；再向淀粉酶解液中逐滴加入饱和的硫酸钠溶液，直至不产生白色沉淀为止；以４０００－５０００转／分钟离心５－１０分钟，将上清液转移入容量瓶，调节ｐＨ为９．１～９．６，以测定需求量定容； ６）斐林法测定还原糖含量：取步骤５）中处理后的淀粉酶解液为样品，按ＧＢ５００９．７－８５《食品中还原糖的测定方法》直接滴定法，测定样品中可溶性糖的含量。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及灰树花多糖提取物的测定方法，尤其涉及灰树花深层液体发酵液多糖提取物中非活性成分淀粉含量的定量测定方法。本专利技术的，由以下步骤组成1)除去脂溶性成分取烘干磨碎的待测多糖样品，分别称0.5～2克于6个离心杯中，分别加入30ml乙醚，充分振荡5～15分钟，以4000～5000转/分钟离心5～10分钟，弃去上清液，再加入30ml乙醚，如此重复离心3次；2)除去可溶性糖类干扰物质向上述弃去上清液后的离心杯中加入50～60℃的80％乙醇30ml，充分振荡5～15分钟，以4000～5000转/分钟离心5～10分钟，弃去上清液，如此重复离心3次；然后再向离心后的杯中加入40～50℃蒸馏水30ml，在40～50℃恒温水浴中振荡60分钟，以4000～5000转/分钟离心5～10分钟，弃去上清液，再加入30ml蒸馏水，如此重复离心3次；3)酶法分解淀粉向步骤2)弃去上清液后的离心杯中加入5ml蒸馏水，湿润并搅拌分离出的样品，再加入80～90℃蒸馏水40ml，搅匀后，置沸水浴中处理50～60分钟使淀粉糊化；之后冷却至50℃，加入1％的糖化酶液10ml，并立即加入pH4～6的磷酸盐缓冲液25ml，再加入甲苯5～7滴，混匀，封口，置于45～48℃条件下保温20～24小时进行淀粉酶解；4)淀粉酶解检测取上述淀粉酶解液1滴加入碘溶液1滴进行酶解效果检测，若显蓝色、红色或紫色，即为淀粉酶解不完全，应再重复步骤3)的酶法分解淀粉，直至加碘溶液检测不显蓝色、红色或紫色为止，即为淀粉酶解完全；5)淀粉酶解液处理将上述完全酶解的淀粉酶解液冷后，用6molL-1NaOH中和至中性，然后边搅动边逐滴加入饱和Pb(0Ac)2溶液，直至淀粉酶解液无白色絮状沉淀为止；再向淀粉酶解液中逐滴加入饱和的硫酸钠溶液，直至不产生白色沉淀为止；以4000-5000转/分钟离心5-10分钟，将上清液转移入容量瓶，调节pH为9.1～9.6，以测定需求量定容；6)斐林法测定还原糖含量取步骤5)中处理后的淀粉酶解液为样品，按GB5009.7-85《食品中还原糖的测定方法》直接滴定法，测定样品中可溶性糖的含量。其中，上述步骤1)或2)所述的振荡时间是8～12分钟。其中，上述步骤2)所述80％乙醇的温度是55～58℃。其中，上述步骤2)所述加入的蒸馏水和恒温水浴的温度均为45～50℃。其中，上述步骤3)所述磷酸盐缓冲液的pH为4.8～5.6。其中，上述步骤3)所述进行淀粉酶解的温度是45℃，时间是20小时。其中，上述步骤5)所述处理后的淀粉酶解液pH为9.3～9.5。其中，上述步骤6)所述的食品中还原糖的测定方法包括如下步骤①标定碱性酒石酸铜溶液吸取斐林试剂甲液及乙液各5.0ml，置于150ml锥形瓶中，加水10ml，加入玻璃珠2粒，从滴定管滴加约9ml葡萄糖标准溶液，控制在2min内加热至沸，趁沸以每两秒1滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液，直至溶液蓝色刚好褪去为终点，记录消耗葡萄糖标准溶液的总体积，同时平行操作三份，取其平均值，计算每10ml(甲、乙液各5ml)碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量(mg)；②样品溶液预测吸取斐林试剂甲液及乙液各5.0ml，置于150ml锥形瓶中，加水10ml，加入玻璃珠2粒，控制在2min内加热至沸，趁沸以先快后慢的速度，从滴定管中滴加样品溶液，并保持溶液沸腾状态，待溶液颜色变浅时，以每两秒1滴的速度滴定，直至溶液蓝色刚好褪去为终点，记录样液消耗体积；③样品溶液测定吸取斐林试剂甲液及乙液各5.0ml，置于150ml锥形瓶中，加水10ml，加入玻璃珠2粒，从滴定管滴加比预测体积少1ml的样品溶液，使在2min内加热至沸，趁沸继续以每两秒1滴的速度滴定，直至蓝色刚好褪去为终点，记录样液消耗体积，同法平行操作三份，得出平均消耗体积。采用本专利技术进行灰树花多糖产品中淀粉含量的测定，具有可操作性强、测定结果稳定可靠、测定结果的变异系数小、误差小、重现性高等优点。实验显示，根据样品中淀粉含量不同，变异系数一般在5％～10％范围内。可满足常规实验室对分析测试的要求以及相关企业对产品质量的控制要求。下面结合具体实施方式对本专利技术作进一步的说明。2)除去可溶性糖类干扰物质向上述弃去上清液后的离心杯中加入57℃的80％乙醇30ml，充分振荡15分钟，以5000转/分钟离心10分钟，弃去上清液，如此重复离心3次；然后再向弃去上清液后的离心杯中加入50℃蒸馏水30ml，在50℃恒温水浴中振荡60分钟，以5000转/分钟离心5分钟，弃去上清液，再加入30ml蒸馏水，如此重复离心3次；3)酶法分解淀粉向步骤2)弃去上清液后的离心杯中加入5ml蒸馏水，湿润并搅拌分离出的样品，再加入90℃蒸馏水40ml，搅匀后，置沸水浴中处理55分钟使淀粉糊化；之后冷却至50℃，加入1％的糖化酶液10ml，并立即加入pH 5.2的磷酸盐缓冲液25ml，再加入甲苯5滴，混匀，封口，置于45℃条件下保温20小时进行淀粉酶解；4)淀粉酶解检测取上述淀粉酶解液1滴加入碘溶液1滴进行酶解效果检测，至结果为加碘溶液检测不显蓝色、红色或紫色为止，即为淀粉酶解完全；5)淀粉酶解液处理将上述完全酶解的淀粉酶解液冷后，用6molL-1NaOH中和至中性，然后边搅动边逐滴加入饱和Pb(OAc)2溶液，直至淀粉酶解液无白色絮状沉淀为止；再向淀粉酶解液中逐滴加入饱和的硫酸钠溶液，直至不产生白色沉淀为止；以4000转/分钟离心10分钟，取上清液转移入250ml容量瓶，调节pH为9.3，定容，设为V2；6)斐林法测定还原糖含量取步骤5)中处理后的淀粉酶解液为样品，按GB5009.7-85《食品中还原糖的测定方法》直接滴定法，测定样品中可溶性糖的含量。①标定碱性酒石酸铜溶液吸取斐林试剂甲液及乙液各5.0ml，置于150ml锥形瓶中，加水10ml，加入玻璃珠2粒，从滴定管滴加约9ml葡萄糖标准溶液，控制在2min内加热至沸，趁沸以每两秒1滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液，直至溶液蓝色刚好褪去为终点，记录消耗葡萄糖标准溶液的总体积，同时平行操作三份，取其平均值V0，计算每10ml(甲、乙液各5ml)碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量(mg)；②样品溶液预测吸取斐林试剂甲液及乙液各5.0ml，置于150ml锥形瓶中，加水10ml，加入玻璃珠2粒，控制在2min内加热至沸，趁沸以先快后慢的速度，从滴定管中滴加样品溶液，并保持溶液沸腾状态，待溶液颜色变浅时，以每两秒1滴的速度滴定，直至溶液蓝色刚好褪去为终点，记录样液消耗体积；③样品溶液测定吸取斐林试剂甲液及乙液各5.0ml，置于150ml锥形瓶中，加水10ml，加入玻璃珠2粒，从滴定管滴加比预测体积少1ml的样品溶液，使在2min内加热至沸，趁沸继续以每两秒1滴的速度滴定，直至蓝色刚好褪去为终点，记录样液消耗体积，同法平行操作三份，得出平均消耗体积V1。同时，以同方法做试剂空白试验。结果计算淀粉％＝V0*C/(1000mV1)*0.9*100％(式中淀粉含量以葡萄糖计)灰树花活性多糖中淀粉含量的测定实施例分析结果见附表1。其中m1——10ml碱性酒石酸铜溶液(甲、乙液各5ml)相当于还原糖(以葡萄糖计)的质量，mg；m——样品质量，g；V0——10ml碱性本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：隋方功，宋爱荣，张玉娜，吕银燕，
申请(专利权)人：莱阳农学院，
类型：发明
国别省市：