一种鹿药多糖及其制备方法和应用技术

一种鹿药多糖及其制备方法和应用，涉及天然产物提取、分离纯化领域，填补了目前鹿药多糖成分研究的空白。制备鹿药多糖的方法，先将干燥的鹿药根茎及根粉碎，以蒸馏水超声提取，合并提取液减压浓缩后加入无水乙醇依次达到乙醇的体积分数为70％、80％、90％进行分级沉淀，静置、离心、冷冻干燥，得三种鹿药粗多糖；将上述三种鹿药粗多糖进行Sevag法脱蛋白，DEAE Sepharose FF柱色谱分离纯化，透析，Sephacryl S‑300柱色谱分离纯化后冷冻干燥得三种均一组分的鹿药多糖。本发明专利技术提供了一种操作简单、重复性好、污染小、效率高、方法学良好，适用于工业化大规模生产的提取分离纯化鹿药多糖的方法。

Deer medicine polysaccharide and preparation method and application thereof

The invention relates to a deer medicine polysaccharide and a preparation method and an application thereof, relating to the field of extraction, separation and purification of natural products and filling the blank of the study of the composition of the deer medicine polysaccharide. Preparation method of Smilacina polysaccharide, first Smilacina rhizome and root dry crushed, extracted with distilled water by volume fraction extract was concentrated and then adding ethanol in order to ethanol was 70%, 80%, 90% for fractionation, stewing, centrifugation, freeze drying, three kinds of Smilacina the crude polysaccharide; these three kinds of Smilacina crude polysaccharide by Sevag method of removing protein, purification, DEAE Sepharose FF Sephacryl S column chromatography and dialysis, 300 purification column chromatography after freeze drying Smilacina three kinds of homogeneous polysaccharides. The invention provides a method for extracting, separating and purifying deer medicine polysaccharides with simple operation, good repeatability, little pollution, high efficiency and good method, and is suitable for industrialized large-scale production.

【技术实现步骤摘要】
一种鹿药多糖及其制备方法和应用
本专利技术涉及天然产物提取、分离纯化
，具体涉及一种鹿药多糖及其制备方法和应用。
技术介绍
多糖(Polysaccharides)是由单糖连接形成的大分子物质，为生物体必需的生物大分子之一，在细胞识别、生物体受精、生长发育、神经系统和免疫系统衡态的维持等方面都起着重要作用。由于其特殊的结构、理化性质及生物活性，使得多糖在医药领域有广泛的应用，如疫苗、抗肿瘤或抗病毒药物，以及制备药物缓释剂、医用透析膜、人工血液、人工皮肤等。目前，有关多糖的化学结构、药理作用与机理、构效关系已成为生命科学研究中最活跃的领域之一。从不同生物体内提取的多糖具有不同的生理作用。鹿药(SmilacinajaponicaA.Gray)为百合科鹿药属多年生草本植物，我国野生鹿药资源分布十分广泛，储量巨大。鹿药为药食同源植物，地上部分的幼嫩茎叶从出苗到开花前均可食用，味道鲜美，是广受欢迎的山野菜；而地下部分的根茎及根为民间常用中药，性味“甘、苦、温，无毒”，具有补气益肾、祛风除湿、活血调经功能，用于治疗风湿骨痛、神经性头痛、乳腺炎、月经不调、痈疖肿毒、跌打损伤等症。目前，也有报道称，猪、鸡等养殖户将鹿药添加在饲料中喂养动物，以提高动物的免疫力。现代化学及药理研究显示鹿药根茎中含有黄酮、皂苷、多糖等活性成分，经研究发现鹿药中多糖含量较高，约占干燥生药的20％，且具有抗氧化和抑制肿瘤细胞增殖的作用。除上述研究外，未见有关鹿药多糖的研究报道。
技术实现思路
为了填补目前鹿药多糖成分研究的空白，本专利技术提供一种鹿药多糖及其制备方法和应用。本专利技术为解决技术问题所采用的技术方案如下：本专利技术的一种鹿药多糖的制备方法，包括以下步骤：步骤一、超声水提以水为溶剂对鹿药根茎及根进行超声提取，料液比1∶20，超声温度30℃，超声时间20min，超声提取3次，合并滤液，得到鹿药多糖水提取液；步骤二、乙醇分级沉淀将步骤一所得的鹿药多糖水提取液减压浓缩至原体积的1/10，加入无水乙醇至乙醇体积分数为70％，4℃放置24h后，7000r/min离心10min，分离出上清液得沉淀物，将所得沉淀物用无水乙醇和丙酮反复洗涤后冷冻干燥得70％乙醇沉淀鹿药粗多糖；向上清液中继续加入无水乙醇至乙醇体积分数为80％，按上述方法处理得到80％乙醇沉淀鹿药粗多糖；继续向上清液中加入无水乙醇至乙醇体积分数为90％，按上述方法处理得到90％乙醇沉淀鹿药粗多糖；步骤三、纯化将步骤二所得的70％乙醇沉淀鹿药粗多糖、80％乙醇沉淀鹿药粗多糖和90％乙醇沉淀鹿药粗多糖分别依次经脱蛋白、离子交换色谱柱分离纯化、透析、琼脂糖凝胶柱分离纯化、醇沉干燥后得到三种均一组分的鹿药多糖。作为优选的实施例，所得的三种均一组分的鹿药多糖的比旋光度分别为-45°、-75°、-35°；以葡萄糖计所得的三种均一组分的鹿药多糖中的多糖含量分别为89.22％、93.05％、59.83％。作为优选的实施例，所述脱蛋白的具体步骤为：将步骤二所得的70％乙醇沉淀鹿药粗多糖、80％乙醇沉淀鹿药粗多糖和90％乙醇沉淀鹿药粗多糖分别配制成浓度为2mg/mL的多糖水溶液，采用Sevag法分别除蛋白6次，经冷冻干燥后得到三种脱蛋白的鹿药多糖。作为优选的实施例，采用Sevag法除蛋白的工艺条件为：氯仿与正丁醇的体积比为4∶1，浓度为2mg/mL的多糖水溶液与Sevag试剂的体积比为2∶1，洗脱6次，每次振荡15min。作为优选的实施例，所述离子交换色谱柱分离纯化的具体步骤为：将所得的脱蛋白的鹿药多糖加入蒸馏水溶解至浓度为45mg/mL，以离子交换色谱柱分离，依次采用超纯水及0.1～0.4mol/LNaCI溶液洗脱，采用苯酚-硫酸法检测，合并呈峰部分。作为优选的实施例，所述离子交换色谱柱为DEAESepharoseFF色谱柱，填料95mL。作为优选的实施例，步骤三中，所述透析的具体步骤为：将所得的呈峰部分浓缩后以截留分子量4000Da的透析袋进行透析，先以自来水透析48h，再以蒸馏水透析24h，得到截留物质。作为优选的实施例，步骤三中，所述琼脂糖凝胶柱分离纯化的具体步骤为：将所得的截留物质通过SephacrylS-300色谱柱分离纯化，以超纯水洗脱，采用苯酚-硫酸法追踪检测，收集呈单峰的洗脱液，洗脱液依次经减压浓缩、无水乙醇沉淀、冷冻干燥后得到均一组分的鹿药多糖。本专利技术还提供了一种采用上述的制备方法获得的鹿药多糖。采用上述的制备方法获得的鹿药多糖在促进猪小肠上皮细胞增殖方面的应用。本专利技术的有益效果是：1、本专利技术提供了一种操作简单、重复性好、污染小、效率高、方法学良好，适用于工业化大规模生产的提取分离纯化鹿药多糖的方法，填补了目前鹿药多糖成分研究的空白。2、通过本专利技术的制备方法得到的鹿药多糖为均一组分，具有促进猪小肠上皮细胞增殖的作用，有潜力被开发成养猪饲料的添加剂或提高免疫力的药物。3、本专利技术能够从鹿药中提取出新型多糖，并且该多糖具有独特的功效，能够为鹿药资源的开发利用提供物质基础和技术指导。4、采用本专利技术的制备方法获得的三种均一组分的鹿药多糖的比旋光度分别为-45°、-75°、-35°；以葡萄糖计所得的三种均一组分的鹿药多糖中的多糖含量分别为89.22％、93.05％、59.83％。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例1鹿药多糖的制备本专利技术的一种鹿药多糖的制备方法，包括鹿药多糖的提取和鹿药多糖的纯化两个步骤。1、鹿药多糖的提取，包括以下步骤：(1)超声水提：将鹿药根茎及根洗净、阴干、粉碎，以水为溶剂对其进行超声提取，通过正交实验考察料液比、超声温度、超声时间、提取次数对提取率的影响，最终得到最佳提取工艺：料液比1∶20，超声温度30℃，超声时间20min，超声提取3次，按照此最佳工艺提取，合并滤液，得到鹿药多糖水提取液。(2)乙醇分级沉淀：将上述所得的鹿药水提取液减压浓缩至原体积的1/10，加入无水乙醇至乙醇体积分数为70％，4℃放置24h后，7000r/min离心10min，分离出上清液，将所得沉淀物用无水乙醇和丙酮反复洗涤后冷冻干燥得70％乙醇沉淀鹿药粗多糖，标记为SJP1；向上清液中继续加入无水乙醇至乙醇体积分数为80％，按上述方法(4℃放置24h后，7000r/min离心10min，分离出上清液，将所得沉淀物用无水乙醇和丙酮反复洗涤后冷冻干燥)处理得到80％乙醇沉淀鹿药粗多糖，标记为SJP2；向上清液中继续加入无水乙醇至乙醇体积分数为90％，按上述方法(4℃放置24h后，7000r/min离心10min，分离出上清液，将所得沉淀物用无水乙醇和丙酮反复洗涤后冷冻干燥)处理得到90％乙醇沉淀鹿药粗多糖，标记为SJP3。2、鹿药多糖的纯化，包括以下步骤：将乙醇分级沉淀所得的70％乙醇沉淀鹿药粗多糖、80％乙醇沉淀鹿药粗多糖和90％乙醇沉淀鹿药粗多糖分别依次经脱蛋白、离子交换色谱柱分离纯化、透析、琼脂糖凝胶柱分离纯化、醇沉干燥后得到三种均一组分的鹿药多糖。其具体步骤如下本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种鹿药多糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、超声水提以水为溶剂对鹿药根茎及根进行超声提取，料液比1∶20，超声温度30℃，超声时间20min，超声提取3次，合并滤液，得到鹿药多糖水提取液；步骤二、乙醇分级沉淀将步骤一所得的鹿药多糖水提取液减压浓缩至原体积的1/10，加入无水乙醇至乙醇体积分数为70％，4℃放置24h后，7000r/min离心10min，分离出上清液，将所得沉淀物用无水乙醇和丙酮反复洗涤后冷冻干燥得70％乙醇沉淀鹿药粗多糖；向上清液中继续加入无水乙醇至乙醇体积分数为80％，按上述方法处理得到80％乙醇沉淀鹿药粗多糖；向上清液中继续加入无水乙醇至乙醇体积分数为90％，按上述方法处理得到90％乙醇沉淀鹿药粗多糖；步骤三、纯化将步骤二所得的70％乙醇沉淀鹿药粗多糖、80％乙醇沉淀鹿药粗多糖和90％乙醇沉淀鹿药粗多糖分别依次经脱蛋白、离子交换色谱柱分离纯化、透析、琼脂糖凝胶柱分离纯化、醇沉干燥后得到三种均一组分的鹿药多糖。

【技术特征摘要】
1.一种鹿药多糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、超声水提以水为溶剂对鹿药根茎及根进行超声提取，料液比1∶20，超声温度30℃，超声时间20min，超声提取3次，合并滤液，得到鹿药多糖水提取液；步骤二、乙醇分级沉淀将步骤一所得的鹿药多糖水提取液减压浓缩至原体积的1/10，加入无水乙醇至乙醇体积分数为70％，4℃放置24h后，7000r/min离心10min，分离出上清液，将所得沉淀物用无水乙醇和丙酮反复洗涤后冷冻干燥得70％乙醇沉淀鹿药粗多糖；向上清液中继续加入无水乙醇至乙醇体积分数为80％，按上述方法处理得到80％乙醇沉淀鹿药粗多糖；向上清液中继续加入无水乙醇至乙醇体积分数为90％，按上述方法处理得到90％乙醇沉淀鹿药粗多糖；步骤三、纯化将步骤二所得的70％乙醇沉淀鹿药粗多糖、80％乙醇沉淀鹿药粗多糖和90％乙醇沉淀鹿药粗多糖分别依次经脱蛋白、离子交换色谱柱分离纯化、透析、琼脂糖凝胶柱分离纯化、醇沉干燥后得到三种均一组分的鹿药多糖。2.根据权利要求1所述的一种鹿药多糖的制备方法，其特征在于，所得的三种均一组分的鹿药多糖的比旋光度分别为-45°、-75°、-35°；以葡萄糖计所得的三种均一组分的鹿药多糖中的多糖含量分别为89.22％、93.05％、59.83％。3.根据权利要求1所述的一种鹿药多糖的制备方法，其特征在于，步骤三中，所述脱蛋白的具体步骤为：将步骤二所得的70％乙醇沉淀鹿药粗多糖、80％乙醇沉淀鹿药粗多糖和90％乙醇沉淀鹿药粗多糖分别配制成浓度为2mg/mL的多糖水溶液，采用Sevag法分...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵淑杰，路飘飘，战杨，韩忠明，杨利民，
申请(专利权)人：吉林农业大学，
类型：发明
国别省市：吉林,22