红细胞生成素基因的新的多核苷酸和多肽制造技术

本发明专利技术涉及来源于ＥＰＯ基因核苷酸序列并包含新的ＳＮＰ的新的多核苷酸、来源于天然ＥＰＯ蛋白质并包含由本发明专利技术的ＳＮＰ所致至少一个突变的新的多肽、及其治疗用途。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请本申请要求以下专利申请的优先权，2001-04-04提交的法国申请FR 0104603，题为《Nouveaux polynucléotides comportant despolymorphismes de type SNP fonctionnels dans la séquencenucléotidique du gène (EPO)ainsi que denouveaux polypeptides codés par ces polynucléotides etleurs utilisations thérapeutiques》；2001-12-21提交的美国临时专利申请60/343163，题为Erythropoietin Related Moleculesand Single Nucleotide Polymorphisms；2002-01-04提交的美国临时专利申请60/345,440，题为Modified Erythropoietin RelatedMolecules and Single Nucleotide Polymorphisms；以及2002-02-21提交的美国临时专利申请60/358,598，题为NewPolynucleotides and Polypeptides of the EPO Gene。
技术介绍
专利
本专利技术涉及来源于红细胞生成素基因(EPO)核苷酸序列并包含新的SNP的新的多核苷酸、来源于天然红细胞生成素蛋白质并包含由所述SNP所致突变的新的多肽、及其治疗用途。相关技术红细胞生成素基因，以下简称EPO，描述于文献Jacobs K.等人(1985)″Isolation and characterization of genomic and cDNAclones of human erythropoietin″；Nature 313(6005)，806-810。该基因的核苷酸序列可得自GenBank数据库登录号X02158。已知红细胞生成素蛋白质作用于红细胞生成造血祖细胞的增殖、分化和成熟。决定其分化并成熟为红细胞。还已知EPO作为自分泌因子作用于某些红白血病细胞，并作为有丝分裂原和内皮细胞趋化因子(chemoattractant)。还已知EPO刺激活化和分化的B细胞，并增强B细胞免疫球蛋白生成和增殖。EPO的合成受连接肾和骨髓的反馈环路的复杂控制系统支配。其合成依赖于静脉氧分压，在低氧条件下升高。EPO的生成还受其它多种体液因子的影响，例如睾丸素、甲状腺激素、生长激素和儿茶酚胺。相反，诸如IL-1、IL-6和TNF-α等几种细胞因子降低EPO的合成。在细胞中EPO与其受体的结合可诱导-释放膜磷脂，-合成二酰基甘油，-增加细胞内钙的水平，-提高细胞内pH，以及-增加细胞内磷脂酶A2和磷脂酶C，后者可诱导fos和myc癌基因。已知过量的EPO导致红细胞增多。伴有血液粘度和心输出量增加，并可能还导致心力衰竭和肺性高血压症。还观察到血小板显著减少。EPO过量的另一副作用是血栓形成。肺栓塞和脑栓塞，即血液转运的凝块或外来化合物突然堵塞血管，也构成与EPO消耗有关的严重副作用。然而，如果EPO的合成量过低，例如在严重肾功能不全的情况下，常观察到贫血。因此，常将EPO给予血细胞比容低于0.3的严重肾功能不全的患者，特别是透析患者。使用EPO治疗的最重要的并发症是张力过高、尿素、钾和磷酸盐水平增多、血液粘度增加、生成血小板的祖细胞和循环血小板扩增。EPO还用于活化红细胞生成，能采集自体供体的血液。此外，对于例如由慢性感染、炎性过程、放射治疗和抑制细胞生长的药物治疗诱导的非肾型贫血，建议也使用EPO。在某种程度上，EPO还是巨核细胞生成的刺激因子。EPO活性由IL-4协同。已经证明EPO保护神经元免受局部缺血诱导的细胞死亡，因此似乎EPO可能通过降低自由基产生并降低氧化应力效应，而具有神经保护能力。众所周知，EPO基因与各种人类病症(disorder)和/或疾病有关，例如各种癌症，如恶性肿瘤、黑色素瘤、骨髓瘤、肿瘤、白血病和肝、颈、头和肾癌；心血管疾病，例如脑损伤；例如与免疫系统无关的代谢疾病，如肥胖症；传染病，特别是病毒性传染，例如乙型肝炎、丙型肝炎和AIDS；肺炎；溃疡性结肠炎；中枢神经系统疾病，例如阿尔茨海默氏病、精神分裂症和抑郁症；组织或器官移植排斥；创伤愈合；贫血；变态反应；哮喘；多发性硬化；骨质疏松症；银屑病；类风湿性关节炎；克罗恩氏病(Crohn’s disease)；自身免疫疾病和病症；生殖器或性疣；胃肠疾病；以及与化学治疗有关的疾病。本专利技术人发现EPO基因的新的多肽和新的多核苷酸类似物，其能够具有不同于天然野生型EPO蛋白质的功能性。这些新的多肽和多核苷酸可以特别用于治疗或预防前述病症或疾病，并避免其所带来的全部或部分害处。专利技术简述本专利技术的首要目的在于新的多核苷酸，因其包含一个或几个SNP(单核苷酸多态性)而不同于参考的野生型EPO基因核苷酸序列。参考的野生型人EPO基因的核苷酸序列SEQ ID NO.1由3398个核苷酸组成，包含核苷酸615(起始密码子)-2763(终止密码子)的2149个核苷酸的编码序列。EPO基因由5个外显子组成，其在核苷酸序列SEQ ID NO.1中的位置如下外显子1核苷酸397-627(包含位于615的起始密码子)。外显子2核苷酸1194-1339。外显子3核苷酸1596-1682。外显子4核苷酸2294-2473。外显子5核苷酸2608-3327(包含位于2763的终止密码子)。申请人已经鉴定了参考的野生型EPO基因核苷酸序列中的12个SNP。这12个SNP如下465-486(缺失)、c577t、g602c、c1288t、c1347t、t1607c、g1644a、g2228a、g2357a、c2502t、c2621g、g2634a。应当理解，在本专利技术意义上，上文确定的SNP位置的相应编号是相对于核苷酸序列SEQ ID NO.1的编号而言。字母a、t、c和g分别对应于含氮碱基腺嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶和鸟嘌呤。第一个字母表示野生型核苷酸，而最后一个字母表示突变的核苷酸。因此，例如SNP g1644a表示参考的野生型EPO基因核苷酸序列SEQ ID NO.1中的1644位核苷酸g(鸟嘌呤)突变为核苷酸a(腺嘌呤)。SNP 465-486(缺失)表示一种突变，其中参考的野生型EPO基因核苷酸序列SEQ ID NO.1中465-486位的22个核苷酸已经缺失。本申请人利用申请人于2000年12月6日提交的题为″Processfor the determination of one or several functionalpolymorphism(s)in the nucleotide sequence of a preselectedfunctional candidate gene and its applications″的专利申请FR00 22894中所述测定方法(在此引入以供参考)鉴定出了这些SNP。该专利申请中所述方法可以从随机群体中的至少一个个体中鉴定一个(或几个)先前存在的SNP。在本专利技术范围内，在随机选取本文档来自技高网...

【技术保护点】
包含以下全部或部分的分离的多核苷酸：ａ）核苷酸序列ＳＥＱＩＤＮＯ．１，只要该核苷酸序列包含至少一个选自４６５－４８６（缺失）、ｃ５７７ｔ、ｇ６０２ｃ、ｃ１２８８ｔ、ｃ１３４７ｔ、ｔ１６０７ｃ、ｇ１６４４ａ、ｇ２２２８ａ、ｇ２ ３５７ａ、ｃ２５０２ｔ、ｃ２６２１ｇ、ｇ２６３４ａ的ＳＮＰ；或者ｂ）与ａ）中核苷酸序列互补的核苷酸序列。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：JL伊斯卡利，
申请(专利权)人：吉恩奥迪塞公司，
类型：发明
国别省市：FR[法国]