辅酶Ⅰ及其衍生物含量的测定方法技术

本发明专利技术公开了一种辅酶Ｉ及其衍生物含量的测定方法。配置ｐＨ８．０－１１．０焦磷酸钠缓冲液，其中含有体积百分比为０．０１％－０．３％水合肼。在上述缓冲液中加入底物溶液和待测定的辅酶Ｉ及其衍生物测定液，在分光光度计上，于还原型辅酶Ｉ及其衍生物的最大吸收峰处调零后，加入３α－类固醇脱氢酶，反应至吸光值不再增加为止，根据吸光值变化计算辅酶Ｉ的含量。本发明专利技术的３α－类固醇脱氢酶是诊断试剂的常用原料，来源广泛。反应缓冲液中加入肼使反应向正方向进行，辅酶Ｉ及衍生物将全部转化为还原型辅酶Ｉ及衍生物，根据还原型辅酶Ｉ及衍生物在特定波长的摩尔吸光值，可以定量的计算出辅酶Ｉ及衍生物的含量。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种辅酶I及其衍生物含量的测定方法。
技术介绍
氧化型辅酶I与还原型辅酶I双向转变时可出现特征性吸收光谱的改变。在一定条件下，可与被测物的浓度呈线性改变，许多化学分析方法是基于这一原理实现的，但氧化型/还原型辅酶I的化学性质存在许多缺陷。氧化型/还原型辅酶I衍生物的化学性质则有了较大的改变，(主要表现为最大吸收峰改变、摩尔吸光值增加、反应Km值改变、溶液稳定性和稳定pH范围大大增加。)还原型辅酶I衍生物的最大吸收波长在340-405nm之间，氧化型/还原型辅酶I衍生物参与的氧化-还原反应可通过吸光值的变化定量检测生化反应底物，因而是许多生化检测试剂的核心原料。原料的纯度会影响到诊断试剂的质量，在试剂配制的过程中，有必要的对原料质量进行监控。此外，在辅酶I及其衍生物的生产过程中，由于工艺步骤较多，对每一步骤进行纯度测定也很重要。辅酶I及其衍生物种类较多，目前缺乏统一的检测方法。如果采用HPLC(高效液相)方法，过程较为繁琐，需要标准品，实际推广应用不便。在脱氢酶的存在下，辅酶I及其衍生物作为辅酶参与反应，氧化型辅酶I及衍生物将转化为还原型辅酶I及其衍生物，但反应一般均本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种测定辅酶Ｉ及其衍生物的方法，其特征在于：配置０．０３－０．２Ｍ、ｐＨ８．０－１１．０焦磷酸钠缓冲液，其中含有体积百分比为０．０１％－０．３％水合肼，加入底物和待测定液，底物浓度为０．００５－０．０８ｍｇ／ｍｌ，测定液的浓度为０．０１－０．３ｍｇ／ｍｌ；在分光光度计上，于还原型辅酶Ｉ及其衍生物的最大吸收峰处调零后，按反应体积加入０．０５－１Ｕ／ｍｌ的３α－类固醇脱氢酶，反应至吸光值不再增加为止，根据吸光值变化计算辅酶Ｉ的含量。依如下计算公式计算辅酶Ｉ及其衍生物含量，计算公式为：待测定液样品含量（ｗ／ｖ）＝（Ａ－Ａ↓［０］）×Ｖ↓［１］×ＭＷ／（ε×Ｖ↓［２］）×１００％，其中Ａ为加３α－类固...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：闻树群，朱永良，
申请(专利权)人：杭州利安生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]